Agarosa Ni-NTA PureCube

Alto rendimiento y pureza

Nuestro exclusivo proceso de producción produce una agarosa Ni-NTA que exhibe una capacidad de unión a proteínas > 20 % más alta que la de dos productos líderes de la competencia. La Figura 1 muestra la SDS-PAGE de GFP expresada en E. coli y purificada en columnas de gravedad con PureCube Ni-NTA Agarosa y la resina Ni-NTA de Competitor G y Competitor Q. El rendimiento de proteína en 4 eluciones (E1-E4, Cube ) fue de 80 mg/mL, en comparación con 65 y 48 mg/mL obtenidos con las resinas alternativas (E1-E4, Competidor G, Competidor Q). Se obtuvieron resultados similares (10-18 % más de capacidad de unión; datos no mostrados aquí) al comparar la purificación de JNK1 (quinasa, 48 kDa) en PureCube Ni-NTA y Ni-NTA de proveedores líderes.

Figura 1: Más de un 20 % más de rendimiento obtenido con PureCube Ni-NTA Agarose. SDS-PAGE de GFP expresada en E. coli y purificada en columnas de gravedad con agarosa PureCube Ni-NTA y resina Ni-NTA del competidor Q. Se obtuvo un rendimiento de proteína de 80 mg/mL con agarosa PureCube Ni-NTA (E1–E4, Cube ) en comparación con 65 y 48 mg/mL, respectivamente, con las resinas alternativas G y Q ampliamente utilizadas (E1–E4, Competitor G / Competitor Q).

Estabilidad superior de DTT y EDTA

La agarosa PureCube Ni-NTA es muy robusta en presencia de DTT y EDTA. En una prueba de estabilidad, la agarosa PureCube Ni-NTA se expuso a concentraciones crecientes de DTT o EDTA durante 1 h. Posteriormente, las resinas se usaron para purificar GFP-His expresada en E. coli en columnas de gravedad. La capacidad de unión de la resina disminuyó en presencia tanto de DTT como de EDTA, pero la velocidad de descomposición fue superficial. En presencia de DTT, la agarosa PureCube Ni-NTA perdió en promedio un 8 % de capacidad de unión con cada aumento en la concentración de DTT, lo que resultó en una disminución general del 22 % a 10 mM. Incluso con EDTA 1,5 mM, la resina aún exhibe el 54 % de su capacidad de unión máxima (Fig. 2).

Figura 2: NTA es robusto en presencia de agentes reductores y quelantes. GFP-His se purificó en columnas de gravedad que contenían agarosa PureCube Ni-NTA después de exponer la resina durante 1 h a 3 concentraciones de DTT o EDTA. NTA exhibe una tasa de descomposición poco profunda en la capacidad de unión.

Robusto contra la oxidación y regenerable

La agarosa PureCube Ni-NTA conserva su color y función después de la exposición a DTT de hasta 10 mM. La Figura 3 muestra una serie de fotos de la resina después de una exposición de 1 h a DTT 5 mM. A diferencia de otras resinas, la agarosa PureCube Ni-NTA no se volvió marrón (A). La resina aún podía unirse a GFP (B), con una capacidad de unión medida de 65 mg/mL (ver Fig. 2). Luego, la resina podría regenerarse quitando el NTA, volviendo la resina blanca (C) y recargándola con iones de níquel (D). El protocolo para regenerar PureCube Ni-NTA Agarosa se puede descargar.

Figura 3: PureCube Ni-NTA Agarose es resistente a la oxidación y regenerable. La agarosa PureCube Ni-NTA se expuso a DTT 5 mM durante 1 h (A). Después de demostrar que aún podía unirse a GFP (B), la resina se lavó, se decaparon (C) y se recargaron con Ni2+ (D) siguiendo el protocolo estándar de Cube (ver Protocolos y hojas de datos de Cube).
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