Ensayo Amplite® de Fluorescencia azul. Este kit ofrece un ensayo fluorimétrico sensible para medir los niveles de glutatión peroxidasa en muestras biológicas.
Descripción
Glutatión peroxidasa protege contra el daño oxidativo de las membranas celulares y otros sitios sensibles a los oxidantes en las células.
Los niveles alterados de glutatión peroxidasa se correlacionan con lesiones causadas por muchas enfermedades comunes y complejas. El nivel de glutatión peroxidasa se mide en muestras biológicas como un indicador potencial para el tratamiento potencial de cáncer, diabetes, enfermedades neurodegenerativas y cardiovasculares. El kit de ensayo fluorimétrico de glutatión peroxidasa de AAT Bioquest ofrece un ensayo fluorimétrico sensible para medir los niveles de glutatión peroxidasa en muestras biológicas.
Este ensayo se basa en la oxidación del glutatión (GSH) a glutatión oxidado (GSSG) catalizada por la glutatión peroxidasa. El GSSG generado se recicla a su estado reducido GSH por la glutatión reductasa (GR) y NADPH para generar NADP+ que se puede monitorear específicamente usando Quest Fluor™ NADP Probe, nuestro sensor NADP patentado recientemente desarrollado. El sensor NADP reacciona solo con NADP para generar un producto fluorescente. La señal de fluorescencia se puede medir con un lector de microplacas de fluorescencia y es directamente proporcional a la actividad de la glutatión peroxidasa.
En comparación con otros kits comerciales que miden la disminución de la absorbancia de NADPH a 340 nm, nuestra sonda de NADP Quest Fluor™ se puede utilizar para cuantificar el nivel de NADP directamente. Con este ensayo fluorimétrico de glutatión peroxidasa, se puede detectar tan solo 1,25 mU/mL de glutatión peroxidasa en un volumen de reacción de 155 µL.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-11560 | Amplite® Fluorimetric Glutathione Peroxidase Assay Kit *Blue Fluorescence* | 200 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 420 nm |
| Emisión | 480 nm |
| Cutoff | 430 nm |
| Placa recomendada | Negra sólida |
Componentes
| Componente A: Glutathione Peroxidase Standard | 1 vial (0.5 U/vial) |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (10 mL) |
| Componente C: Enzyme Mix | 2 botellas (polvo liofilizado) |
| Componente D: GSH | 1 vial (3ml/vial) |
| Componente E: GPx Substrate | 1 vial (11 µL/vial) |
| Componente F: Quest Fluor™ NADP Probe | 1 botella (5 mL) |
| Componente G: NADP Assay Solution | 1 botella (5 mL) |
| Componente H: Enhancer Solution | 1 botella (3.5mL) |
PREPARACION DE SOLUCIONES DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución estándar de glutatión peroxidasa (GPx) (10 U/mL)
Agregue 50 µL de ddH2O o buffer PBS 1× en el vial del estándar GPx (Componente A) para preparar una solución estándar de 10 U/mL.
Solución madre de GSH (100X)
Agregue 100 µL de ddH2O en el vial de GSH (Componente D) para hacer una solución madre de GSH 100X.
Solución madre de sustrato GPx (100X)
Agregue 100 µL de ddH2O en el vial de sustrato (Componente E) para preparar una solución madre de sustrato 100X GPx.
PREPARACION DE SOLUCION ESTANDAR
Para su conveniencia puede utilizar el Planificador de dilución en serie:
https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/11560
Estándar GPx
Agregue 10 μl de solución estándar GPx (10 U/mL) en 990 μl de buffer PBS 1x + BSA al 0,1 % para generar 100 mU/mL de solución estándar GPx (GP7). Tome 100 mU/ml de solución estándar GPx (GP7) y realice diluciones en serie 1:1,5 en PBS + BSA al 0,1 % para obtener diluciones en serie del estándar GPx (GP6 – GP1). Nota: La solución estándar de GPx diluida es inestable y debe usarse dentro de las primeras 4 horas.
PREPARACION DE SOLUCIONES DE TRABAJO
1. Agregue 5 ml de buffer de ensayo (componente B) a una botella de mezcla de enzimas (componente C).
2. Agregue 50 µL de solución madre de GSH (Componente D), 50 µL de Solución madre de sustrato GPx (Componente E) en la botella del Componente B+C y mezcle bien para hacer la solución de trabajo GPx (Componente B+C+D+E). Nota: Esta solución de trabajo GPx es suficiente para una placa de 96 pocillos. No es estable; por favor, utilícelo con prontitud. No se recomienda almacenar la solución de trabajo GPx no utilizada.
Imagen
Figura 1. La respuesta a la dosis de glutatión peroxidasa (GPx) se midió con el kit de ensayo fluorimétrico de glutatión peroxidasa Amplite® (catálogo 11560) en una placa negra sólida de 96 pocillos utilizando un lector de microplacas Gemini (Molecular Devices).
Productos Relacionados
| Nombre | Excitation (nm) | Emission (nm) |
| Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Red Fluorescence* | 571 | 584 |
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Bibliografía
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Referencias
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Application Notes
A Library of Well-Defined and Water-Soluble Poly(alkyl phosphonate)s with Adjustable Hydrolysis
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