Descripción
El cartucho compacto PureCube 100 Ni-NTA es una columna de cromatografía IMAC preempaquetada con resina PureCube 100 Ni-NTA. Puede elegir entre dos tamaños, volumen de lecho de 1 ml y volumen de lecho de 5 ml. Consulte la tabla de características proporcionada para asegurarse de que el cartucho/columna sea compatible con su hardware FPLC como ÄKTA TM.
Si este no es el caso, recomendamos comprar la única resina PureCube 100 Ni-NTA suelta y empaquetar las columnas usted mismo. Un tutorial dedicado se puede encontrar en el sitio.
Como alternativa, si las perlas de 100 µm son demasiado grandes para su ensayo de purificación, también ofrecemos cartuchos compactos PureCube Ni-NTA, cuyas perlas tienen un diámetro de 40 µm. Además, también ofrecemos nuestros productos PureCube Ni-NTA como perlas magnéticas, si prefiere este método IMAC.
Catalogo | Producto | Presentación |
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CU-74302 | PureCube 100 Compact Cartridge Ni-NTA | 1 x 1 ml |
CU-74304 | PureCube 100 Compact Cartridge Ni-NTA | 5 x 1 ml |
CU-74306 | PureCube 100 Compact Cartridge Ni-NTA | 1 x 5 ml |
CU-74308 | PureCube 100 Compact Cartridge Ni-NTA | 5 x 5 ml |
Hojas de Datos / Protocolos
- PureCube 100 Ni-NTA compact cartridge Datasheet
- Washing & Regeneration Protocol
- His-tag Western Blot Protocol
Caracteristicas
Usage | Specific binding and purification of 6x His tagged proteins |
Specificity | Affinity to His tagged proteins |
Binding capacity | >80 mg/mL |
Bead Ligand | Ni-NTA |
Bead size | 100 μm |
Chelator stability | Stable in buffer containing 10 mM DTT and 1 mM EDTA |
Filling quantity | Delivered as a 50 % suspension |
Required equipment & materials | FPLC hardware like e.g. AEKTABinding BufferElution Buffer |
Columna | ||
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PureCube Compact Cartridge 1 mL | PureCube Compact Cartridge 5 mL | |
Bed Volume | 1 mL | 5 mL |
Max. Flow Rate | 6 mL/min | 6 mL/min |
Dimensions: diameter X length (mm) | 5 X 35 | 17 X 35 |
Body material | Polypropylene | Polypropylene |
Inlet | 10-32 UNF female thread | 10-32 UNF female thread |
Outlet | 10-32 UNF female thread | 10-32 UNF female thread |
Envio y Almacenamiento
Este producto se envia a temperatura ambiente. Almacenamiento de corto plazo: En buffer neutral. Almacenamiento a largo plazo: En buffer neutral con 20% etanol a 4°C.
Resultado de laboratorio
Alto rendimiento y pureza
Nuestro exclusivo proceso de producción produce una agarosa Ni-NTA que exhibe una capacidad de unión a proteínas > 20 % más alta que la de dos productos líderes de la competencia. La Figura 1 muestra la SDS-PAGE de GFP expresada en E. coli y purificada en columnas de gravedad con PureCube Ni-NTA Agarosa y la resina Ni-NTA de Competitor G y Competitor Q. El rendimiento de proteína en 4 eluciones (E1-E4, Cube ) fue de 80 mg/mL, en comparación con 65 y 48 mg/mL obtenidos con las resinas alternativas (E1-E4, Competidor G, Competidor Q). Se obtuvieron resultados similares (10-18 % más de capacidad de unión; datos no mostrados aquí) al comparar la purificación de JNK1 (quinasa, 48 kDa) en PureCube Ni-NTA y Ni-NTA de proveedores líderes.
Figura 1: Más de un 20 % más de rendimiento obtenido con PureCube Ni-NTA Agarose. SDS-PAGE de GFP expresada en E. coli y purificada en columnas de gravedad con agarosa PureCube Ni-NTA y resina Ni-NTA del competidor Q. Se obtuvo un rendimiento de proteína de 80 mg/mL con agarosa PureCube Ni-NTA (E1–E4, Cube ) en comparación con 65 y 48 mg/mL, respectivamente, con las resinas alternativas G y Q ampliamente utilizadas (E1–E4, Competitor G / Competitor Q).
Estabilidad superior de DTT y EDTA
La agarosa PureCube Ni-NTA es muy robusta en presencia de DTT y EDTA. En una prueba de estabilidad, la agarosa PureCube Ni-NTA se expuso a concentraciones crecientes de DTT o EDTA durante 1 h. Posteriormente, las resinas se usaron para purificar GFP-His expresada en E. coli en columnas de gravedad. La capacidad de unión de la resina disminuyó en presencia tanto de DTT como de EDTA, pero la velocidad de descomposición fue superficial. En presencia de DTT, la agarosa PureCube Ni-NTA perdió en promedio un 8 % de capacidad de unión con cada aumento en la concentración de DTT, lo que resultó en una disminución general del 22 % a 10 mM. Incluso con EDTA 1,5 mM, la resina aún exhibe el 54 % de su capacidad de unión máxima (Fig. 2).
Figura 2: NTA es robusto en presencia de agentes reductores y quelantes. GFP-His se purificó en columnas de gravedad que contenían agarosa PureCube Ni-NTA después de exponer la resina durante 1 h a 3 concentraciones de DTT o EDTA. NTA exhibe una tasa de descomposición poco profunda en la capacidad de unión.
Robusto contra la oxidación y regenerable
La agarosa PureCube Ni-NTA conserva su color y función después de la exposición a DTT de hasta 10 mM. La Figura 3 muestra una serie de fotos de la resina después de una exposición de 1 h a DTT 5 mM. A diferencia de otras resinas, la agarosa PureCube Ni-NTA no se volvió marrón (A). La resina aún podía unirse a GFP (B), con una capacidad de unión medida de 65 mg/mL (ver Fig. 2). Luego, la resina podría regenerarse quitando el NTA, volviendo la resina blanca (C) y recargándola con iones de níquel (D). El protocolo para regenerar PureCube Ni-NTA Agarosa se puede descargar.
Figura 3: PureCube Ni-NTA Agarose es resistente a la oxidación y regenerable. La agarosa PureCube Ni-NTA se expuso a DTT 5 mM durante 1 h (A). Después de demostrar que aún podía unirse a GFP (B), la resina se lavó, se decaparon (C) y se recargaron con Ni2+ (D) siguiendo el protocolo estándar de Cube (ver Protocolos y hojas de datos de Cube).
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FAQ
– ¿Cuáles son las razones de la unión no específica?
R: Aunque Co-NTA es la forma más pura de purificación de etiquetas His, algunas proteínas no deseadas aún pueden unirse a las perlas. Pero el lavado con NaOH después de la elución de la proteína de interés elimina las proteínas unidas inespecíficas de la resina.
– ¿Hay alguna diferencia entre una columna y un cartucho?
R: No, estos dos terminos son sinonimos.
– ¿Puedo reutilizar perlas o cartuchos PureCube 100 Ni-NTA o puedo regenerarlos?
R: Sí es posible reutilizar las perlas. Recomendamos usar su protocolo de lavado y regeneración al menos después de cada 5 usos de las perlas.
– ¿Se pueden cortar las perlas de Ni-NTA?
R: Sí se puede. Pero recomendamos usar nuestras perlas NTA precortadas desde el principio:
Bibliografía
PURIFIED PROTEIN | YEAR | AUTHOR |
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Human Hsp90a, XcHtpG, and TRb | 2022 | Fan L., Kishore A., Jansen-Olliges L., Wang D., Stahl F., Psathaki O.E., Harre J., Warnecke A., Weder J., Preller M., Zeilinger C. |
proBMP-7 precursor, BMP-7 PD, BMP-9 PD, BMP-10 PD, and a BMP-10/9 hybrid PD | 2022 | Spanou C.E.S, Wohl A.P., Doherr S., Correns A., Sonntag N., Lütke S., Mörgelin M., Imhof T., Gebauer J.N., Baumann U., Grobe K., Koch M., Sengle G. |
Descargo de responsabilidad:
Nuestros productos están destinados para investigación en aplicaciones de biología molecular. Estos productos no están destinados al diagnóstico, prevención o tratamiento de una enfermedad.
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