Este Kit es de Fluorescencia verde y utiliza nuestro exclusivo sensor de ROS para cuantificar ROS en células vivas.
Descripción
Las especies reactivas de oxígeno (ROS) son subproductos naturales del metabolismo normal del oxígeno y juegan un papel importante en la señalización celular. Sin embargo, los niveles de ROS pueden aumentar dramáticamente durante los estados relacionados con el estrés oxidativo, lo que resulta en un daño significativo a las estructuras celulares. Ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico.
El papel del estrés oxidativo en las enfermedades cardiovasculares, la diabetes, la osteoporosis, los accidentes cerebrovasculares, las enfermedades inflamatorias, las enfermedades neurodegenerativas y el cáncer ha sido bien establecido. A través de las mediciones de ROS, los investigadores pueden determinar cómo el estrés oxidativo modula diversas vías intracelulares.
El kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ utiliza nuestro exclusivo sensor de ROS, Amplite® ROS Red, para cuantificar ROS en células vivas. Amplite® ROS Red es permeable a las células y genera fluorescencia roja cuando reacciona con ROS. El ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ es fácil de realizar utilizando un formato optimizado de mezcla y lectura. Proporciona un ensayo fluorimétrico sensible de un solo paso para detectar ROS intracelulares en células vivas con 1-2 horas de incubación.
El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pocillos o de 384 pocillos y se puede adaptar fácilmente a la automatización sin un paso de separación. Su señal se puede leer fácilmente utilizando un lector de microplacas de fluorescencia o un microscopio de fluorescencia. Se puede utilizar para cuantificar las actividades de ROS o detectar inhibidores de ROS.
Nombre en Ingles: Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit *Red Fluorescence*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-22901 | Ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ | 200 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Microscopio de Flourescencia
| Excitación | 520 nm |
| Emisión | 605 nm |
| Placa recomendada | Pared negra, fondo claro |
| Especificaciones instrumento | Juego de filtros Texas Red |
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 520 nm |
| Emisión | 605 nm |
| Cutoff | 590 nm |
| Placa recomendada | Pared negra, fondo claro |
| Especificaciones instrumento | Modo de lectura inferior |
Componentes
| Componente A: Amplite™ ROS Red | 1 vial |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (20 mL) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (200 µL) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre Amplite™ ROS Red (500X):
Agregue 40 µL de DMSO (Componente C) en el vial de Amplite™ ROS Red (Componente A) y mezcle bien para preparar una solución madre de Amplite™ ROS Red 500X. Proteger de la luz. Nota: 20 µL de solución madre 500X Amplite™ ROS Red es suficiente para 1 placa. Nota: la porción no utilizada puede dividirse en alícuotas y almacenarse a < -20 °C durante más de un mes si los tubos se sellan herméticamente y se mantienen alejados de la luz. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 20 µL de solución madre 500X Amplite™ ROS Red en 10 mL de buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para preparar la solución de trabajo Amplite™ ROS Red. Nota: Esta solución de trabajo Amplite™ ROS Red es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.
Para obtener pautas sobre la preparación de muestras de células, visite
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagen
Figura 1. Detección de ROS en células Jurkat con el kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™. Se sembraron a 300.000 células Jurkat el mismo día /(100 µl/pozo) en una placa Costar de 96 pozos de pared negra/fondo transparente. Se añadió la solución de carga del ensayo de ROS (100 µl/pozo) y se incubó a 37 °C con CO2 al 5 % durante 1 hora. Las células se trataron con 1 mM de H2O2 o sin H2O2 (control) durante 2 horas. La señal de fluorescencia se controló a Ex/Em = 520/605 nm (corte = 590 nm) con el modo de lectura inferior utilizando un lector de microplacas FlexStation (Molecular Devices).
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Bibliografía
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Referencias
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Application Notes (en Ingles)
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