Ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™

Este Kit es de florecencia rojo profundo y proporciona un ensayo fluorimétrico sensible de un solo paso para detectar ROS intracelulares (especialmente superóxido y radical hidroxilo) en células vivas dentro de 1 hora de incubación.

Descripción

Las especies reactivas de oxígeno (ROS) son subproductos naturales del metabolismo normal del oxígeno y juegan un papel importante en la señalización celular. La acumulación de ROS da como resultado un daño significativo a las estructuras celulares. Ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™

El papel del estrés oxidativo en las enfermedades cardiovasculares, la diabetes, la osteoporosis, los accidentes cerebrovasculares, las enfermedades inflamatorias, una serie de enfermedades neurodegenerativas y el cáncer ha sido bien establecido. La medición de ROS ayudará a determinar cómo el estrés oxidativo modula diversas vías intracelulares.

El ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ utiliza nuestro sensor patentado ROS Brite™ 670 para cuantificar ROS en células vivas. El ROS Brite™ 670, permeable a las células y no fluorescente, exhibe una fuerte señal de fluorescencia al reaccionar con ROS. El sensor ROS Brite™ 670 está localizado en el citoplasma. La señal de fluorescencia del sensor ROS Brite™ 670 se puede medir mediante microscopía de fluorescencia, imágenes de alto contenido, fluorometría de microplaca o citometría de flujo.

El kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ proporciona un ensayo fluorimétrico sensible de un solo paso para detectar ROS intracelulares (especialmente superóxido y radical hidroxilo) en células vivas dentro de 1 hora de incubación. El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pocillos o de 384 pozos utilizando un lector de microplacas de fluorescencia o un microscopio de fluorescencia con filtro Cy5. 

Nombre en Ingles: Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit

CatalogoProductoPresentación
AAT-22903Ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™200 ensayos

pdfSDSpdfProtocol

Importante: Solo para uso en investigación (RUO).

Plataforma

Lector de Microplacas de Flourescencia

Excitación650 nm
Emisión675 nm
Corte665 nm
Placa RecomendadaParedes negras / fondo claro
Especificaciones InstrumentoModo de lectura inferior

Citómetro de flujo

Excitación Laser640 nm
Emisión Filtro660/20 nm
Especificaciones InstrumentoCanal APC

Microscopio de Flourescencia

ExcitaciónJuego de Filtros Cy5
EmisiónJuego de Filtros Cy5
Especificaciones InstrumentoParedes negras / fondo claro

Componentes

Componente A: ROS Brite™ 6701 vial
Componente B: Buffer de ensayo1 botella (20ml)
Componente C: DMSO1 vial (100 µL)

Preparación de Solución de Stock

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

Solución madre ROS Brite™ 670 (500X)
Agregue 40 µL de DMSO (Componente C) en el vial de ROS Brite™ 670 (Componente A) y mezcle bien para preparar una solución madre de 500X ROS Brite™ 670. Proteger de la luz.
Nota: Tenga en cuenta que 20 µL de solución madre 500X ROS Brite™ 670 es suficiente para 1 placa. Para el citómetro de flujo y para mayor comodidad, la solución madre 500X ROS Brite™ 670 se puede diluir por 5 a 100X en DMSO. Para el almacenamiento, selle los tubos herméticamente.


Preparación de Solución de Trabajo

Agregue 20 µl de solución madre 500X ROS Brite™ 670 en 10 ml de buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para preparar la solución de trabajo ROS Brite™ 670.
Nota: Esta solución de trabajo ROS Brite™ 670 es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.


Preparación de células

Para guias sobre la preparación de muestras de células, visite https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

Imagenes

Fig. 1

Figura 1. Detección de ROS en células HeLa con el kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™. Se sembraron 15.000 células  HeLa durante la noche  con /90 µl pozo en una placa de 96 pocillos Costar de pared negra/fondo transparente. Las células control no se trataron  o se trataron con 100 µM H2O2 a 1 mM o hidroperóxido de terc-butilo (TBHP) durante 30 minutos a 37 °C. Se añadió la solución de trabajo ROS Brite™ 670 (100 µl/ pozo) y se incubó en una incubadora a 37 °C con CO2 al 5 % durante 1 hora. La señal de fluorescencia se controló a Ex/Em = 650/675 nm (corte = 665 nm) con el modo de lectura inferior utilizando FlexStation (Molecular Devices).

Fig. 2

Figura 2. Imágenes de células Hela teñidas con el kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ en una placa de 96 pocillos de pared negra/fondo transparente Costar. A: Células control no tratadas. B: Células tratadas con 100 µM de hidroperóxido de terc-butilo (TBHP) durante 30 minutos antes de la tinción.   

Fig. 3

Figura 3. Detección de ROS en células Jurkat. Las células Jurkat se trataron sin (verde) o con 100 µM hidroperóxido de terc-butilo (TBHP) (rojo) durante 30 minutos a 37 °C y luego se cargaron con ROS Brite™ 670 en una incubadora CO2 al 5 %, a 37 °C durante 1 hora. Las intensidades de fluorescencia se midieron con el canal APC utilizando un citómetro de flujo (NovoCyte 3000, ACEA).

Formatos Alternativos

Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit*Green Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit*Orange Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit*Red Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit*Optimized for Flow Cytometry*

Productos Relacionados

Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit*Green Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit*Orange Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit*Red Fluorescence*
Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence*
Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence*
Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence Optimized for Flow Cytometry*
Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence Optimized for Flow Cytometry*
Cell Meter™ Mitochondrial Hydroxyl Radical Detection Kit *Red Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Mitochondrial Superoxide Activity Assay Kit *Green Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Peroxynitrite Assay Kit *Green Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Peroxynitrite Assay Kit *Optimized for Flow Cytometry*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Nitric Oxide (NO) Activity Assay Kit *Orange Fluorescence Optimized for Microplate Reader*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Nitric Oxide (NO) Activity Assay Kit *Orange Fluorescence Optimized for Flow Cytometry*

Bibliografía

Ver todas las 21 bibliografías: Citation Explorer

Obstructive sleep apnea-increased DEC1 regulates systemic inflammation and oxidative stress that promotes development of pulmonary arterial hypertension
Authors: Li, Xiaoming and Zhang, Xiang and Hou, Xiaozhi and Bing, Xin and Zhu, Fangyuan and Wu, Xinhao and Guo, Na and Zhao, Hui and Xu, Fenglei and Xia, Ming
Journal: Apoptosis (2022): 1–15

ONC206 has anti-tumorigenic effects in human ovarian cancer cells and in a transgenic mouse model of high-grade serous ovarian cancer
Authors: Tucker, Katherine and Yin, Yajie and Staley, Stuart-Allison and Zhao, Ziyi and Fang, Ziwei and Fan, Yali and Zhang, Xin and Suo, Hongyan and Sun, Wenchuan and Prabhu, Varun Vijay and others,
Journal: American Journal of Cancer Research (2022): 521

Reversal of multidrug resistance by Fissistigma latifolium–derived chalconoid 2-hydroxy-4, 5, 6-trimethoxydihydrochalcone in cancer cell lines overexpressing human P-glycoprotein
Authors: Teng, Yu-Ning and Hung, Chin-Chuan and Kao, Pei-Heng and Chang, Ying-Tzu and Lan, Yu-Hsuan
Journal: Biomedicine \& Pharmacotherapy (2022): 113832

Bcl-2 interacting protein 3 (BNIP3) promotes tumor growth in breast cancer under hypoxic conditions through an autophagy-dependent pathway
Authors: Zhang, Guipu and Xu, Zhiyi and Yu, Minjing and Gao, Haiyan
Journal: Bioengineered (2022): 6280–6292

The Abnormal Proliferation of Hepatocytes is Associated with MC-LR and C-Terminal Truncated HBX Synergistic Disturbance of the Redox Balance
Authors: Cai, Dong-Mei and Mei, Fan-Biao and Zhang, Chao-Jun and An, San-Chun and Lv, Rui-Bo and Ren, Guan-Hua and Xiao, Chan-Chan and Long, Long and Huang, Tian-Ren and Deng, Wei
Journal: Journal of Hepatocellular Carcinoma (2022): 1229–1246

Host Defense against Klebsiella pneumoniae Pneumonia Is Augmented by Lung-Derived Mesenchymal Stem Cells
Authors: Rangasamy, Tirumalai and Ghimire, Laxman and Jin, Liliang and Le, John and Periasamy, Sivakumar and Paudel, Sagar and Cai, Shanshan and Jeyaseelan, Samithamby
Journal: The Journal of Immunology (2021): 1112–1127

Low-power STED nanoscopy based on temporal and spatial modulation
Authors: Wang, Luwei and Chen, Yue and Guo, Yong and Xie, Weixin and Yang, Zhigang and Weng, Xiaoyu and Yan, Wei and Qu, Junle
Journal: Nano Research (2021): 1–8

Hypoxically cultured cells of oral squamous cell carcinoma increased their glucose metabolic activity under normoxic conditions
Authors: Shinohara, Yuta and Washio, Jumpei and Kobayashi, Yuri and Abiko, Yuki and Sasaki, Keiichi and Takahashi, Nobuhiro
Journal: Plos one (2021): e0254966

Tyrosine kinase inhibitor conjugated quantum dots for non-small cell lung cancer (NSCLC) treatment
Authors: Kulkarni, Nishant S and Parvathaneni, Vineela and Shukla, Snehal K and Barasa, Leonard and Perron, Jeanette C and Yoganathan, Sabesan and Muth, Aaron and Gupta, Vivek
Journal: European Journal of Pharmaceutical Sciences (2019)

Anti-proliferation effect of blue light-emitting diodes against antibiotic-resistant Helicobacter pylori
Authors: Ma, Jianwei and Hiratsuka, Takahiro and Etoh, Tsuyoshi and Akada, Junko and Fujishima, Hajime and Shiraishi, Norio and Yamaoka, Yoshio and Inomata, Masafumi
Journal: Journal of Gastroenterology and Hepatology (2018): 1492–1499

Referencias

Automatic flow injection based methodologies for determination of scavenging capacity against biologically relevant reactive species of oxygen and nitrogen
Authors: Magalhaes LM, Lucio M, Segundo MA, Reis S, Lima JL.
Journal: Talanta (2009): 1219

Diabetes and the impairment of reproductive function: possible role of mitochondria and reactive oxygen species
Authors: Amaral S, Oliveira PJ, Ramalho-Santos J.
Journal: Curr Diabetes Rev (2008): 46

Virion disruption by ozone-mediated reactive oxygen species
Authors: Murray BK, Ohmine S, Tomer DP, Jensen KJ, Johnson FB, Kirsi JJ, Robison RA, O’Neill KL.
Journal: J Virol Methods (2008): 74

The role of mitochondria in reactive oxygen species metabolism and signaling
Authors: Starkov AA., undefined
Journal: Ann N Y Acad Sci (2008): 37

Sensitive determination of reactive oxygen species by chemiluminescence methods and their application to biological samples and health foods
Authors: Wada M., undefined
Journal: Yakugaku Zasshi (2008): 1031

Reactive oxygen species and yeast apoptosis
Authors: Perrone GG, Tan SX, Dawes IW.
Journal: Biochim Biophys Acta (2008): 1354

Measurement of reactive oxygen species in cells and mitochondria
Authors: Armstrong JS, Whiteman M.
Journal: Methods Cell Biol (2007): 355

Role of reactive oxygen species in mediating hepatic ischemia-reperfusion injury and its therapeutic applications in liver transplantation
Authors: Zhang W, Wang M, Xie HY, Zhou L, Meng XQ, Shi J, Zheng S.
Journal: Transplant Proc (2007): 1332

Superoxide and derived reactive oxygen species in the regulation of hypoxia-inducible factors
Authors: Gorlach A, Kietzmann T.
Journal: Methods Enzymol (2007): 421

Reactive oxygen species and superoxide dismutases: role in joint diseases
Authors: Afonso V, Champy R, Mitrovic D, Collin P, Lomri A.
Journal: Joint Bone Spine (2007): 324

Application notes (en Ingles)

A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
A Comparison of Fluorescent Red Calcium Indicators for Detecting Intracellular Calcium Mobilization in CHO Cells
A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
A New Red Fluorescent & Robust Screen Quest™ Rhod-4™ Ca2+Indicator for Screening GPCR & Ca2+ Channel Targets