El kit de imágenes de ARN de células vivas Cell Navigator® incluye StrandBrite™ RNA Green, ya que se une específicamente al ARN en las células. Puede teñir el ARN tanto en células vivas como en células fijadas.
Descripción
Kit Cell Navigator® de imágenes de ARN de células vivas Fluorescencia verde
La detección y obtención de imágenes de moléculas de ARN en células vivas es extremadamente importante para una amplia variedad de procedimientos de biología molecular, incluido el transporte físico, la interpretación de la información genética, la regulación de la expresión génica y algunas funciones biocatalíticas esenciales. El mayor desafío para teñir el ARN en células vivas son las interferencias causadas por el ADN.
Para abordar la dificultad, se desarrolló un nuevo tinte fluorogénico verde como sonda selectiva de ARN. El kit de imágenes de ARN de células vivas Cell Navigator® de AAT Bioquest incluye StrandBrite™ RNA Green, ya que se une específicamente al ARN en las células. En comparación con el colorante comercial SYTO™ RNA Select para la tinción de ARN in vivo, StrandBrite™ RNA Green muestra una señal más brillante y una selectividad mucho mejor para el ARN. Además, este kit puede teñir el ARN tanto en células vivas como en células fijadas.
Nombre en ingles: Cell Navigator® Live Cell RNA Imaging Kit *Green Fluorescence*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| 22630 | Kit Cell Navigator® de imágenes de ARN de células vivas Fluorescencia verde | 100 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Microscopio de Fluorescencia
| Excitación | 490 nm |
| Emisión | 520 nm |
| Placa recomendada | Pared negra / fondo claro |
| Especificaciones Instrumento | Juego de filtros FITC |
Componentes
| Componente A: StrandBrite™ RNA Green | 1 vial (25 µL, 400X en DMSO) |
| Componente B: Live Cell Staining Buffer | 1 botella (20 ml) |
Espectro
Abrir en Advanced Spectrum Viewer
Propiedades espectrales
| Excitación (nm) | 509 |
| Emisión (nm) | 527 |
PROTOCOLO EXPERIMENTAL DE MUESTRA
1. Cultive las células a una densidad óptima para obtener imágenes de acuerdo con su protocolo de inducción específico (alrededor de 1 – 2 × 104 células/pocillo/placa de 96 pocillos).
2. Para células vivas: Incube las células con StrandBrite™ RNA Green (Componente A) diluido 400X en medio o buffer de tinción de células vivas (Componente B) a temperatura ambiente durante 30 a 60 minutos (100 µL/pocillo). Nota: 25 µL de StrandBrite™ RNA Green (Componente A) son suficientes para una placa de 96 pocillos. Proteger de la luz y evitar ciclos repetidos de congelación-descongelación. El tiempo de incubación adecuado depende del tipo de célula individual y de la concentración celular utilizada. Optimice el tiempo de incubación para cada experimento. Vea la figura 1 para más detalles.
3. Para células fijadas: fije las células con metanol puro durante 1 minuto a temperatura ambiente y luego lave con PBS. Sumerja las células en Triton-100 al 1% durante 2 minutos, luego lave dos veces con PBS. Incube las células con StrandBrite™ RNA Green (Componente A) a la concentración de 1X en PBS a temperatura ambiente durante 15 a 30 minutos. Nota: Se recomienda aumentar la concentración de marcaje o el tiempo de incubación para permitir que se acumule el tinte si las células no parecen estar lo suficientemente teñidas. Vea la figura 1 para más detalles.
(Opcional) Lave las células con PBS 1 o 2 veces, agregue 100 µL de PBS a cada pocillo.
4. Supervise la intensidad de la fluorescencia con un microscopio de fluorescencia a Ex/Em = 490/520 nm (canal FITC).
Imagen
Figura 1. Imágenes de fluorescencia de tinción de ARN en células HeLa. (A) Las células vivas se tiñeron con el kit de imágenes de ARN de células vivas Cell Navigator® (verde, catálogo 22630) y se contratiñeron con Hoechst 33342 (azul, catálogo 17530). (B) Las células fijadas en metanol se tiñeron usando el mismo kit.
(C) Después de la tinción, las células HeLa fijadas se incubaron con 0,5 mg/ml de ARNasa a 37 ºC durante 1 hora. La imagen de la prueba de digestión con ARNasa indica la alta selectividad de StrandBrite™ RNA Green. La señal de fluorescencia verde se midió utilizando un microscopio de fluorescencia con un filtro FITC.
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Bibliografía
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Journal: Talanta Open (2024): 100308
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Journal: International Journal of Biological Sciences (2022): 1238