Las tinciones de Hoechst son una familia de tinciones fluorescentes para marcar ADN en microscopía de fluorescencia.
Descripción
Las tinciones de Hoechst son una familia de tinciones fluorescentes para marcar ADN en microscopía de fluorescencia. Debido a que estas tinciones fluorescentes marcan el ADN, también se usan comúnmente para visualizar núcleos y mitocondrias. Dos de estas bis-benzimidas estrechamente relacionadas se usan comúnmente: Hoechst 33258 y Hoechst 33342. Ambos tintes se excitan con luz ultravioleta a alrededor de 350 nm y ambos emiten luz de fluorescencia azul/cian alrededor de un máximo de emisión a 461 nm. Las tinciones de Hoechst se pueden usar en células vivas o fijadas y, a menudo, se usan como sustituto de otra tinción de ácido nucleico, DAPI. La diferencia clave entre ellos es que el grupo etilo adicional de Hoechst 33342 lo hace más lipofílico y, por lo tanto, más capaz de atravesar las membranas celulares intactas. En algunas aplicaciones, Hoechst 33258 es significativamente menos permeable. Estos tintes también se pueden usar para detectar el contenido de una muestra de ADN trazando una curva estándar de emisión a contenido.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-17535 | Hoechst 33342 *20 mM solution in water* | 5 mL |
Importante, Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento: Congelación (< -15 °C). Minimizar la exposición a la luz.
Plataforma
Microscopio de fluorescencia
Excitación : 350 nm
Emisión : 461 nm
Placa recomendada : Negro sólido, fondo transparente
Propiedades fisicas
| Peso Molecular | 561.93 |
| Disolvente | AGUA |
Espectro
Abrir en Advanced Spectrum Viewer
Propiedades espectrales
| Excitación (nm) | 352 |
| Emisión (nm) | 454 |
Calculadora
Preparación de la solución de stock común
Volumen de agua necesario para reconstituir la masa específica de Hoechst 33342 *solución 20 mM en agua* a la concentración dada. Tenga en cuenta que el volumen es solo para preparar la solución madre. Consulte el protocolo experimental de muestra para conocer los buffers experimentales/fisiológicos apropiados.
| 0.1 mg | 0.5 mg | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 177.958 µL | 889.791 µL | 1.78 mL | 8.898 mL | 17.796 mL |
| 5 mM | 35.592 µL | 177.958 µL | 355.916 µL | 1.78 mL | 3.559 mL |
| 10 mM | 17.796 µL | 88.979 µL | 177.958 µL | 889.791 µL | 1.78 mL |
Imagenes
Figura 1. Las células HeLa se incubaron en buffer HBSS 1X con suero al 5 % para inducir la inanición. Después de la inanición, las células se trataron con la solución de trabajo Autophagy Green™ (Cat No. 23002) durante 20 minutos en una incubadora a 37 °C, CO2 al 5 % y luego se lavaron 3 veces. Los núcleos se etiquetaron con Hoechst 33342 (Cat No. 17530). Los lisosomas se marcaron con LysoBrite™ Orange (Cat No. 22657).
Figura 2. Se sembraron células HeLa en microplacas de 96 pocillos y se incubaron a 37 °C, CO2 al 5 % durante 24 horas. A continuación, las células se tiñeron con Hoechst 33342 5 o 10 µM durante 30 minutos a 37 °C, se lavaron y se tomaron imágenes en un microscopio Keyence BZ-X. Posteriormente, las células se fijaron con formaldehído al 4 % durante 20 minutos a temperatura ambiente, se lavaron y se tomaron imágenes.
Productos relacionados
| Nombre | Excitation (nm) | Emission (nm) | Extinction coefficient (cm -1 M -1) | Quantum yield |
| Hoechst 33258 *CAS 23491-45-4* | 352 | 454 | 460001 | 0.03401 |
| Hoechst 33258 *20 mM solution in water* | 352 | 454 | 460001 | 0.03401 |
| Hoechst 34580 *CAS 911004-45-0* | 371 | 438 | – | – |
| Hoechst 34580 *20 mM solution in water* | 371 | 438 | – | – |
Bibliografía
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Referencias
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