Kit iFluor® 350 PSA™ con cabra anti-conejo IgG

El kit iFluor® 350 PSA™ con cabra anti-conejo IgG y es un reemplazo muy superior para el kit basado en tiramida Alexa Fluor 350 u otros kits de tiramida fluorescente o TSA espectralmente similares.

Descripción

Kit de imágenes iFluor® 350 PSA™ con cabra anti-conejo IgG

El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados.

En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC.

El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.

En comparación con los reactivos de tiramida, los conjugados Styramide™ tienen la capacidad de marcar el objetivo con mayor eficiencia y, por lo tanto, generar una señal de fluorescencia significativamente mayor. Los conjugados de Styramide™ también permiten un consumo significativamente menor de anticuerpo primario en comparación con el método de conjugado directo estándar o la amplificación de tiramida con el mismo nivel de sensibilidad.

El kit iFluor® 350 PSA es un reemplazo muy superior para el kit basado en tiramida Alexa Fluor 350 u otros kits de tiramida fluorescente o TSA espectralmente similares.

Nombre en ingles: iFluor® 350 PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Rabbit IgG

CatalogoProductoPresentación
AAT-45200Kit de imágenes iFluor® 350 PSA™ con cabra anti-conejo IgG100 pruebas

pdfSDSpdfProtocol

Importante, Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento a largo plazo: Congelar a  < -15 °C. Minimizar la exposición a la luz.

Plataforma

Microscopio de Fluorescencia

ExcitaciónJuego de filtros DAPI
EmisiónJuego de filtros DAPI
Placa recomendada Pared negra/fondo transparente
Especificaciones instrumentoJuego de filtros DAPI

Componentes

Componente A: iFluor™ 350 Styramide™ conjugate1 vial (polvo liofilizado)
Componente B: Styramide™ Reaction Buffer1 botella (10 mL)
Componente C: DMSO1 vial (100 µL)
Componente D: Secondary Antibody-HRP (Goat Anti-Rabbit IgG-HRP)1 vial (100 µL) (100X)
Componente E: Stabilized 3% Hydrogen Peroxide (H2O2)1 botella (11 mL)

Espectro

Abrir en Advanced Spectrum Viewer

Propiedades Espectrales

Factor de corrección (260 nm)0.83
Factor de corrección (280 nm)0.23
Coeficiente de extinción (cm -1 M -1)200001
Excitación (nm)345
Emisión (nm)450
Rendimiento cuántico0.951
1 Buffer acuoso (pH 7.2)

Preparación de Soluciones de Stock

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

1. Solución madre de Styramide™ (100X)

Agregue 100 µL de DMSO en el vial de conjugado de Styramide™marcado con iFluor™ 350 (Componente A) para preparar una solución madre de Styramide™ 100X. Nota: Haga alícuotas de un solo uso y almacene la solución madre 100X sin usar a 2-8 °C en un lugar oscuro y evite repetir los ciclos de congelación y descongelación. 

2. Solución de H2O2 (100X)

Agregue 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3% (Componente E) a 9 mL de ddH2O. Nota: Prepare la solución 100X H2O2 fresca el día de su uso.


Preparación de Soluciones de Trabajo

1. Solución de trabajo de Styramide™ (1X)

Cada 1 ml de buffer de reacción requiere 10 µl de solución madre de Styramide™ y 10 µl de solución madre de H2O2. Nota: El Styramide™ proporcionado es suficiente para 100 pruebas basadas en 100 µL de solución de trabajo de Styramide™ necesarios por cubreobjetos o por pocillo en una microplaca de 96 pocillos. Nota: La solución de trabajo Styramide™ debe usarse dentro de las 2 horas posteriores a la preparación y evitar la exposición directa a la luz

2. Solución de H2O2 (100X)

Agregue 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3% (Componente E) a 9 mL de ddH2O. Nota: Prepare la solución 100X H2O2 fresca el día de su uso.

Calculadora

Preparación de la solución de stock común

Volumen de DMSO necesario para reconstituir la masa específica de iFluor® 350 PSA™ Imaging Kit con Goat Anti-Rabbit IgG a la concentración dada. Tenga en cuenta que el volumen es solo para preparar la solución madre. Consulte el protocolo experimental de muestra para conocer los buffers experimentales/fisiológicos apropiados.

0.1 mg0.5 mg1 mg5 mg10 mg
1 mM107.396 µL536.982 µL1.074 mL5.37 mL10.74 mL
5 mM21.479 µL107.396 µL214.793 µL1.074 mL2.148 mL
10 mM10.74 µL53.698 µL107.396 µL536.982 µL1.074 mL

Imagenes

Fig. 1

Figura 1. El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados . En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC. El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.

Fig.2

Figura 2. Imágenes de fluorescencia de células HeLa marcadas con anticuerpo primario anti-tubulina de conejo. A continuación, las células se tiñeron con un anticuerpo secundario IgG anti-conejo de cabra marcado con HRP seguido de iFluor® 350 Styramide™ (izquierda) o Alexa Fluor® 350 tiramida (centro y derecha), respectivamente. Las imágenes de fluorescencia se tomaron utilizando el conjunto de filtros DAPI y el tiempo de exposición se marcó en consecuencia. iFluor® 350 Styramide™ muestra una intensidad de fluorescencia significativamente mayor que Alexa Fluor® 350 tyramide si se encuentra bajo el mismo tiempo de exposición (25 ms). La tiramida Alexa Fluor® 350 requiere un tiempo de exposición superior (125 ms) para visualizar la tinción.

Productos Relacionados

NameExcitation (nm)Emission (nm)Extinction coefficient (cm -1 M -1)Quantum yieldCorrection Factor (260 nm)Correction Factor (280 nm)
iFluor® 488 PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Rabbit IgG4915167500010.910.210.11
iFluor® 555 PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Rabbit IgG55757010000010.6410.230.14
iFluor® 594 PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Rabbit IgG58860418000010.5310.050.04
iFluor® 647 PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Rabbit IgG65667025000010.2510.030.03
iFluor 350™ PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Mouse IgG3454502000010.9510.830.23
1 Aqueous buffer (pH 7.2)

Application notes (en Ingles)

A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
A New Protein Crosslinking Method for Labeling and Modifying Antibodies
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides
Annexin V

FAQ

Are there any alternatives to BrdU (Bromodeoxyuridine)?
Are there any alternatives to Cy5?
Are there any alternatives to indocyanine green (ICG)?
Can DAPI bind to RNA?
Can DAPI stain dead cells?

AssayWise (en Ingles)

HRP Antibody Labeling Using Buccutite™ Crosslinking Technology
iFluor® 700 Dyes
Hydroxyl Radical Detection
Peroxidase Detection
Buccutite™ Conjugation Kits: Quick and Easy Antibody Labeling