iFluor® 488 Styramide es reemplazo superior para tiramida Alexa Fluor 488 u otros conjugados de tiramida fluorescente espectralmente similares o reactivos TSA.
Descripción
El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados.
En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC.
El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.
En comparación con los reactivos de tiramida, los conjugados Styramide™ tienen la capacidad de marcar el objetivo con mayor eficiencia y, por lo tanto, generar una señal de fluorescencia significativamente mayor. Los conjugados de Styramide™ también permiten un consumo significativamente menor de anticuerpo primario en comparación con el método de conjugado directo estándar o la amplificación de tiramida con el mismo nivel de sensibilidad. iFluor® 488 PSA kit es un reemplazo superior para la tiramida Alexa Fluor 488 u otros conjugados de tiramida fluorescente espectralmente similares o reactivos TSA.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-45260 | iFluor 488™ PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Mouse IgG | 100 slides |
Importante, Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Microscopio de Flourescencia
| Excitación | Juego de filtros FITC |
| Emisión | Juego de filtros FITC |
| Placa recomendada | Pared negra/fondo transparente |
| Especificaciones instrumento | Juego de filtros FITC |
Componentes
| Componente A: iFluor™ 488 Styramide™ conjugate | 1 vial (polvo liofilizado) |
| Componente B: Styramide™ Reaction Buffer | 1 botella (10 mL) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (100 µL) |
| Componente D: Secondary Antibody-HRP (Goat Anti-Mouse IgG-HRP) | 1 vial (100 µL) (100X) |
| Componente E: Stabilized 3% Hydrogen Peroxide (H2O2) | 1 botella (11 mL) |
Espectro
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Propiedades Espectrales
| Factor de corrección (260 nm) | 0.21 |
| Factor de corrección (280 nm) | 0.11 |
| Coeficiente de extinción (cm -1 M -1) | 750001 |
| Excitación (nm) | 491 |
| Emisión (nm) | 516 |
| Rendimiento cuántico | 0.91 |
Preparación de Soluciones de Stock
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre de Styramide™ (100X)
Agregue 100 µL de DMSO en el vial de iFluor™ 488-labeled Styramide™ conjugate (Componente A) para preparar una solución madre de Styramide™ 100X. Nota: Haga alícuotas de un solo uso y almacene la solución madre 100X sin usar a 2-8 oC en un lugar oscuro y evite repetir los ciclos de congelación y descongelación. - Solución de H2O2 (100X)
Agregue 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3% (Componente E) a 9 mL de ddH2O. Nota: Prepare la solución 100X H2O2 fresca el día de su uso.
Preparación de Soluciones de Trabajo
- Solución de trabajo de Styramide™ (1X)
Cada 1 ml de buffer de reacción requiere 10 µl de solución madre de Styramide™ y 10 µl de solución madre de H2O2. Nota: Styramide™ proporcionado es suficiente para 100 pruebas en base a 100 µL de solución de trabajo de Styramide™ necesarios por cubreobjetos o por pocillo en una microplaca de 96 pocillos. Nota: La solución de trabajo Styramide™ debe usarse dentro de las 2 horas posteriores a la preparación y evitar la exposición directa a la luz. - Solución de H2O2 (100X) Agregue 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3% (Componente E) a 9 mL de ddH2O. Nota: Prepare la solución 100X H2O2 fresca el día de su uso.
Imagenes
Figura 1. El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados . En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC. El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.
Figura 2. IHC de fluorescencia de fijado en formaldehído, incluido en parafina utilizando métodos amplificados PSA ™ y TSA. Las secciones de tejido positivo de adenocarcinoma de pulmón humano se tiñeron con anticuerpo anti-EpCam de ratón y luego se siguieron con el método PSA™ utilizando el kit de imágenes iFluor 488™ PSA™ con IgG anti-ratón de cabra (n.° de cat. 45260) o el método TSA con Alexa Fluor® 488 tyramide respectivamente . Las imágenes mostraron que la superamplificación de la señal de PSA™ puede aumentar la sensibilidad de la IHC de fluorescencia sobre el método Alexa Fluor® 488 TSA. El núcleo celular se tiñó con Nuclear Blue™ DCS1 (Cat#17548).
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| Name | Excitation (nm) | Emission (nm) | Extinction coefficient (cm -1 M -1) | Quantum yield | Correction Factor (260 nm) | Correction Factor (280 nm) |
| iFluor® 488 PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Rabbit IgG | 491 | 516 | 750001 | 0.91 | 0.21 | 0.11 |
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Application notes
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A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides
Annexin V
FAQ
What are the differences between immunoglobulin and antibody?
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Can DAPI bind to RNA?
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