iFluor® 488 PSA Imaging Kit with Goat Anti-Rabbit IgG es reemplazo superior para tiramida Alexa Fluor 488 u otros conjugados de tiramida fluorescente espectralmente similares o reactivos TSA.
Descripción
El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados.
En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC.
El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.
En comparación con los reactivos de tiramida, los conjugados Styramide™ tienen la capacidad de marcar el objetivo con mayor eficiencia y, por lo tanto, generar una señal de fluorescencia significativamente mayor. Los conjugados de Styramide™ también permiten un consumo significativamente menor de anticuerpo primario en comparación con el método de conjugado directo estándar o la amplificación de tiramida con el mismo nivel de sensibilidad. iFluor® 488 PSA kit es un reemplazo superior para la tiramida Alexa Fluor 488 u otros conjugados de tiramida fluorescente espectralmente similares o reactivos TSA.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-45205 | iFluor® 488 PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Rabbit IgG | 100 pruebas |
Importante, Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Microscopio de Flourescencia
| Excitación | Juego de filtros FITC |
| Emisión | Juego de filtros FITC |
| Placa recomendada | Pared negra/fondo transparente |
| Especificaciones instrumento | Juego de filtros FITC |
Componentes
| Componente A: iFluor™ 488 Styramide™ conjugate | 1 vial (polvo liofilizado) |
| Componente B: Styramide™ Reaction Buffer | 1 botella (10 mL) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (100 µL) |
| Componente D: Secondary Antibody-HRP (Goat Anti-Rabbit IgG-HRP) | 1 vial (100 µL) (100X) |
| Componente E: Stabilized 3% Hydrogen Peroxide (H2O2) | 1 botella (11 mL) |
Espectro
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Propiedades Espectrales
| Factor de corrección (260 nm) | 0.21 |
| Factor de corrección (280 nm) | 0.11 |
| Coeficiente de extinción (cm -1 M -1) | 750001 |
| Excitación (nm) | 491 |
| Emisión (nm) | 516 |
| Rendimiento cuántico | 0.91 |
Preparación de Soluciones de Stock
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre de Styramide™ (100X)
Agregue 100 µL de DMSO en el vial de iFluor™ 488-labeled Styramide™ conjugate (Componente A) para preparar una solución madre de Styramide™ 100X. Nota: Haga alícuotas de un solo uso y almacene la solución madre 100X sin usar a 2-8 oC en un lugar oscuro y evite repetir los ciclos de congelación y descongelación. - Solución de H2O2 (100X)
Agregue 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3% (Componente E) a 9 mL de ddH2O. Nota: Prepare la solución 100X H2O2 fresca el día de su uso.
Preparación de Soluciones de Trabajo
- Solución de trabajo de Styramide™ (1X)
Cada 1 ml de buffer de reacción requiere 10 µl de solución madre de Styramide™ y 10 µl de solución madre de H2O2. Nota: Styramide™ proporcionado es suficiente para 100 pruebas en base a 100 µL de solución de trabajo de Styramide™ necesarios por cubreobjetos o por pocillo en una microplaca de 96 pocillos. Nota: La solución de trabajo Styramide™ debe usarse dentro de las 2 horas posteriores a la preparación y evitar la exposición directa a la luz.
2. Solución de trabajo de anticuerpo secundario-HRP
Diluya la solución madre de anticuerpo secundario-HRP 100X 1:100 en PBS con BSA al 1%.
Nota: El anticuerpo secundario-HRP provisto en este kit es suficiente para 100 pruebas basadas en 100 µL de solución de trabajo de HRP por cubreobjetos o por pocillo en una microplaca de 96 pocillos.
Imagenes
Figura 1. El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados . En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC. El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.
Figura 2. IHC de fluorescencia de adenocarcinoma de pulmón humano incluido en parafina y fijado con formaldehído utilizando dos kits de amplificación de señal de imágenes. Las secciones de tejido se tiñeron con anticuerpo anti-EpCam de conejo y luego siguieron el método PSA™ utilizando el kit de imágenes iFluor® 488 PSA™ con IgG anti-conejo de cabra (n.° de cat. 45205) o el kit Thermo Fisher Alexa Fluor® 488 Superboost respectivamente. El núcleo celular se tiñó con Nuclear Blue™ DCS1 (Cat#17548).
Figura 3. Inmunotinción secuencial de adenocarcinoma de pulmón humano incluido en parafina y fijado con formaldehído utilizando los kits de imágenes iFluor® PSA™. Las EpCam se marcaron con anticuerpos anti-EpCam de conejo y el iFluor® 488 PSA™ Imaging Kit con IgG anti-conejo de cabra, seguido de lavado. La pan-queratina se marcó con anticuerpos anti-pan-queratina de ratón y el iFluor® 555 PSA™ Imaging Kit con IgG anti-ratón de cabra. Los núcleos se marcaron con DAPI. Las imágenes fueron adquiridas en un microscopio confocal.
Figura 4. Sensibilidad de los kits Styramide™ Super Signal Amplification. (A) Las células HeLa se fijaron, permeabilizaron y marcaron con varias concentraciones de anticuerpo primario anti-tubulina de conejo. La recomendación del fabricante fue una dilución de 1:500. A continuación, las células se tiñeron con anticuerpo secundario IgG anti-conejo de cabra conjugado directamente con Alexa Fluor® 488, o mediante métodos amplificados utilizando un anticuerpo secundario IgG anti-conejo de cabra marcado con HRP seguido de Alexa Fluor® 488 tiramida o iFluor® 488 Styramide™ ( Cat#45205), respectivamente. Las imágenes de fluorescencia se tomaron utilizando el conjunto de filtros FITC y se analizaron con el mismo tiempo de exposición. (B) La intensidad relativa de la señal de fluorescencia se midió y comparó entre diferentes métodos de detección.
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Bibliografía
CircCCNB1 silencing acting as a miR-106b-5p sponge inhibited GPM6A expression to promote HCC progression by enhancing DYNC1I1 expression and activating the AKT/ERK signaling pathway
Authors: Liu, Yan-ming and Cao, Yue and Zhao, Ping-sen and Wu, Liang-yin and Lu, Ya-min and Wang, Yu-long and Zhao, Jia-feng and Liu, Xin-guang
Journal: International journal of biological sciences (2022): 637
Application notes
A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
A New Protein Crosslinking Method for Labeling and Modifying Antibodies
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides
Annexin V
FAQ
Are there any alternatives to BrdU (Bromodeoxyuridine)?
Are there any alternatives to Cy5?
Are there any alternatives to indocyanine green (ICG)?
Can DAPI bind to RNA?
Can DAPI stain dead cells?
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