iFluor® 555™ PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Rabbit IgG

iFluor® 555 PSA es reemplazo superior para tiramida Alexa Fluor 555 u otros conjugados de tiramida fluorescente espectralmente similares o reactivos TSA.

Descripción

El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados.

En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC.

El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.

En comparación con los reactivos de tiramida, los conjugados Styramide™ tienen la capacidad de marcar el objetivo con mayor eficiencia y, por lo tanto, generar una señal de fluorescencia significativamente mayor. Los conjugados de Styramide™ también permiten un consumo significativamente menor de anticuerpo primario en comparación con el método de conjugado directo estándar o la amplificación de tiramida con el mismo nivel de sensibilidad. iFluor® 555 PSA kit es un reemplazo superior para la tiramida Alexa Fluor 555 u otros conjugados de tiramida fluorescente espectralmente similares o reactivos TSA.

Catalogo	Producto	Presentación
AAT-45220	iFluor 555™ PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Rabbit IgG	100 pruebas

SDS

Protocol

Importante, Solo para uso en investigación (RUO).

Plataforma

Microscopio de Flourescencia

Excitación	Juego de filtros Cy3/TRITC
Emisión	Juego de filtros Cy3/TRITC
Placa recomendada	Pared negra/fondo transparente
Especificaciones instrumento	Juego de filtros Cy3/TRITC

Componentes

Componente A: iFluor™ 555 Styramide™ conjugate	1 vial (polvo liofilizado)
Componente B: Styramide™ Reaction Buffer	1 botella (10 mL)
Componente C: DMSO	1 vial (100 µL)
Componente D: Secondary Antibody-HRP (Goat Anti-Rabbit IgG-HRP)	1 vial (100 µL) (100X)
Componente E: Stabilized 3% Hydrogen Peroxide (H2O2)	1 botella (11 mL)

Espectro

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Propiedades Espectrales

Factor de corrección (260 nm)	0.23
Factor de corrección (280 nm)	0.14
Coeficiente de extinción (cm ^-1 M ^-1)	100000¹
Excitación (nm)	557
Emisión (nm)	570
Rendimiento cuántico	0.64¹

¹ Buffer acuoso (pH 7.2)

Preparación de Soluciones de Stock

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

Solución madre de Styramide™ (100X)
Agregue 100 µL de DMSO en el vial de iFluor™ 555-labeled Styramide™ conjugate (Componente A) para preparar una solución madre de Styramide™ 100X. Nota: Haga alícuotas de un solo uso y almacene la solución madre 100X sin usar a 2-8 ^oC en un lugar oscuro y evite repetir los ciclos de congelación y descongelación.
Solución de H₂O₂ (100X)
Agregue 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3% (Componente E) a 9 mL de ddH₂O. Nota: Prepare la solución 100X H₂O₂ fresca el día de su uso.

Preparación de Soluciones de Trabajo

Solución de trabajo de Styramide™ (1X)
Cada 1 ml de buffer de reacción requiere 10 µl de solución madre de Styramide™ y 10 µl de solución madre de H₂O₂. Nota: El Styramide™ proporcionado es suficiente para 100 pruebas en base a 100 µL de solución de trabajo de Styramide™ necesarios por cubreobjetos o por pocillo en una microplaca de 96 pocillos. Nota: La solución de trabajo Styramide™ debe usarse dentro de las 2 horas posteriores a la preparación y evitar la exposición directa a la luz.

2. Solución de trabajo de anticuerpo secundario-HRP
Diluya la solución madre de anticuerpo secundario-HRP 100X 1:100 en PBS con BSA al 1%.
Nota: El anticuerpo secundario-HRP provisto en este kit es suficiente para 100 pruebas basadas en 100 µL de solución de trabajo de HRP por cubreobjetos o por pocillo en una microplaca de 96 pocillos.

Imagenes

Figura 1. El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados . En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC. El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.

Figura 2. IHC de fluorescencia para la detección de HER2/ErbB2 en tejido de cáncer de mama fijado en formaldehído e incluido en parafina. Se incubaron secciones de tejido positivas para Her2/Neu humano (c-erbB-2) con mAb de conejo HER2/ErbB2 diluido 1:5000 (arriba) o 1:250 (abajo), respectivamente. A continuación, el tejido se incubó con anticuerpo secundario IgG anti-conejo de cabra marcado con HRP seguido de iFluor® 555 Styramide™ (arriba) o Alexa Fluor® 555 tiramida (abajo), respectivamente. En comparación con la amplificación de tiramida, el aumento de la sensibilidad de la amplificación de súper señal de Styramide™ permite el uso de menos anticuerpos primarios. Se puede lograr el mismo nivel de sensibilidad con una reducción significativa en la cantidad de anticuerpo diana utilizado (10-50 veces). El núcleo celular se tiñó con Nuclear Blue™ DCS1 (Cat#17548).

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