Kit de biotinilación de proteínas ReadiLink™ *Powered by ReadiView™ Biotin Visionization Technology*
Descripción
La biotina se usa ampliamente para marcar biomoléculas, en particular, anticuerpos. Este kit se utiliza principalmente para la preparación de IgG marcada con biotina para inmunoensayo enzimático (EIA).
Nuestro kit utiliza nuestro éster de succinimidilo de biotina ReadiView™ (#3059) que reacciona con un grupo amino de IgG y otras biomoléculas. Nuestra exclusiva biotina contenida en el kit lleva una etiqueta de color para indicar el grado de biotinilación, eliminando así la problemática determinación de biotinilación de HABA.
Este kit contiene todos los reactivos necesarios para el etiquetado y la purificación. En nuestras manos, se pueden conjugar de 5 a 8 moléculas de biotina a cada molécula de IgG utilizando nuestro kit.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-5521 | ReadiLink™ Protein Biotinylation Kit *Powered by ReadiView™ | 3 reacciones |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Componentes
| Componente A: ReadiView™ Biotin SE | 1 vial |
| Componente B: Buffer de reaccion | 1 vial (200 µL) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (100 µL) |
| Componente D: Spin Column | 3 columnas |
| Componente E: Washing Tube (2 mL) | 3 tubos |
| Componente F: Collecting Tube (1.5 mL) | 3 tubos |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
Solución madre ReadiView™ Biotin SE
Agregue 10 µL de DMSO (Componente C) en el vial de ReadiView™ Biotin SE (Componente A) y agítelos vigorosamente.
Nota: Prepare la solución madre ReadiView™ Biotin SE (Solución B) antes de comenzar la conjugación. Úselo con prontitud. El almacenamiento prolongado de la solución madre ReadiView™ Biotin SE puede reducir la actividad de la biotina. La solución B se puede almacenar en el congelador durante dos semanas cuando se mantiene alejada de la humedad.
Nota: Alícuotas de la solución madre ReadiView™ Biotin SE en 5 viales (2 µL/vial). SOLO se necesita un vial para marcar 100 µg de proteínas. Los viales restantes se pueden almacenar en el congelador durante 2 semanas en caso de que necesite repetir su conjugación.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Solución de trabajo de proteínas
Para marcar 100 µg de proteína objetivo (suponiendo que la concentración de proteína objetivo sea de 2 mg/ml), mezcle 5 µL (10 % del volumen total de la reacción) de buffer de reacción (componente B) con 50 µL de la solución de proteína objetivo.
Nota: Si tiene una concentración de proteína diferente, ajuste el volumen de proteína en consecuencia para que ~2 mg de proteína estén disponibles para esta reacción de etiquetado.
Nota: El pH de la solución de proteínas debe ser de 8,5 ± 0,5. Si el pH de la solución de proteínas es inferior a 8,0, ajuste el pH al rango de 8,0 a 9,0 utilizando el buffer de reacción (componente B) o una solución saturada de bicarbonato de sodio.
Nota: La proteína debe disolverse en solución salina tamponada con fosfato (PBS) 1X, pH 7,2-7,4. Si la proteína se disuelve en tampón Tris o glicina, debe dializarse frente a PBS 1X, pH 7,2-7,4, para eliminar las aminas libres o las sales de amonio (como el sulfato de amonio y el acetato de amonio) que se utilizan ampliamente para la precipitación de proteínas.
Nota: Es posible que los anticuerpos impuros o los anticuerpos estabilizados con albúmina de suero bovino (BSA) o gelatina no se etiqueten bien. La presencia de azida de sodio o timerosal también podría interferir con la reacción de conjugación. La azida de sodio o el timerosal se pueden eliminar mediante diálisis o columna giratoria para obtener resultados de etiquetado óptimos.
Nota: La eficacia de la conjugación se reduce significativamente si la concentración de proteína es inferior a 2 mg/mL. Para una eficiencia de etiquetado óptima, se recomienda el rango de concentración de proteína final de 2-10 mg/mL.
Imagen
Figura 1. Biotina ReadiView™ conjugada con etiqueta de color (CT) especialmente diseñada para determinar fácilmente el grado de biotinilación.
Productos Relacionados
Referencias
Ver todas las 62 referencias: Citation Explorer
Protein C-terminal labeling and biotinylation using synthetic peptide and split-intein
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Tandem affinity purification of protein complexes in mouse embryonic stem cells using in vivo biotinylation
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