Screen Quest™ Fluorimetric Fatty Acid Uptake Assay Kit

El kit de ensayo fluorométrico de captación de ácidos grasos Screen Quest™ proporciona un método simple y sensible para la medición de la captación de ácidos grasos en células que contienen transportadores de ácidos grasos.

Descripción

La captación de ácidos grasos es un objetivo terapéutico importante para el tratamiento de muchas enfermedades humanas como la obesidad, la diabetes tipo 2 y la esteatosis hepática. El kit de ensayo fluorométrico de captación de ácidos grasos Screen Quest™ proporciona un método simple y sensible para la medición de la captación de ácidos grasos en células que contienen transportadores de ácidos grasos. El kit utiliza un sustrato de ácido graso fluorescente de ácido dodecanoico patentado. Este kit de ensayo de captación de ácidos grasos se puede realizar en cualquier lector de microplacas de fluorescencia con un modo de lectura inferior o canal FITC. El ensayo se puede realizar en placas de microtitulación de 96 pozos o de 384 pozos en un procedimiento simple de mezcla y lectura, y se puede adaptar fácilmente para aplicaciones que requieren alto volumen de detección.  Kit para 100 pruebas.

CatalogoProductoPresentación
AAT-36385Screen Quest™ Fluorimetric Fatty Acid Uptake Assay Kit100 pruebas

Importante: Solo para uso en investigación (RUO).

Plataforma

Lector de microplacas de Fluorescencia

Excitación485 nm
Emisión515 nm
Cutoff495 nm
Placa recomendadaPared negra / fondo claro
Especificacion instrumentoModo de lectura inferior

Componentes

Componente A: TF2-C12 Fatty Acid1 vial (liofilizado)
Componente B: Buffer de ensayo1 botella (10 mL)
Componente C: DMSO1 vial (100 µL)

PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

Solución madre de ácidos grasos TF2-C12:
Agregue 20 µL de DMSO (Componente C) al vial de Ácido graso TF2-C12 (Componente A) y mezcle bien. Nota: 20 μL de la solución madre de sustrato de ácido graso fluorescente es suficiente para una placa. La solución madre de sustrato de ácido graso fluorescente no utilizada se puede dividir en alícuotas y almacenar a < -20 oC durante un máximo de dos meses si los tubos se sellan herméticamente y se mantienen alejados de la luz. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.


PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO

Solución de carga de colorantes de ácidos grasos:
Agregue 20 µl de la solución madre de ácidos grasos TF2-C12 a 10 ml de buffer de ensayo (componente B) y mézclelos bien. Nota: 10 ml de solución de carga de colorante de ácidos grasos es suficiente para una placa; prepárelo fresco para cada experimento.

Imagenes

Figura 1. Comparación de la captación de ácidos grasos por adipocitos 3T3-L1 y fibroblastos. Las células se sembraron 50.000 células/100 ml/pozo en placa de 96 pozos  con  poli-D lisina  de fondo transparente/pared negra  durante 5 horas, y luego se privaron de suero durante 1 hora. Las células se trataron sin (control) o con insulina (150 nM), y se incubaron a 37 ºC,  con CO2 al 5 % durante 30 min. Al final del tiempo de incubación, se añadieron 100 µl de mezcla de ácidos grasos al  pozo y se incubó durante otros 60 min. La señal de fluorescencia se midió con un lector de placas FlexStation utilizando el modo de lectura inferior. A – fibroblastos (Control); B – fibroblastos (Insulina); C – adipocitos (Control); D– adipocitos (Insulina).

Bibliografía

Andrographolide ameliorates hepatic steatosis by suppressing FATP2-mediated fatty acid uptake in mice with nonalcoholic fatty liver disease
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In vitro targeted screening and molecular docking of stilbene, quinones, and flavonoid on 3T3-L1 pre-adipocytes for anti-adipogenic actions
Authors: Bedi, Onkar and Aggarwal, Savera and Trehanpati, Nirupma and Ramakrishna, Gayatri and Grewal, Ajmer Singh and Krishan, Pawan
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Referencias

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Poultry fat decreased fatty acid transporter protein mRNA expression and affected fatty acid composition in chickens
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Significance of short chain fatty acid transport by members of the monocarboxylate transporter family (MCT)
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Emerging risk factors for postpartum depression: serotonin transporter genotype and omega-3 fatty acid status
Authors: Shapiro GD, Fraser WD, Seguin JR.
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Munc18c provides stimulus-selective regulation of GLUT4 but not fatty acid transporter trafficking in skeletal muscle
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Journal: FEBS Lett (2012): 2428

Improved working memory but no effect on striatal vesicular monoamine transporter type 2 after omega-3 polyunsaturated fatty acid supplementation
Authors: Narendran R, Frankle WG, Mason NS, Muldoon MF, Moghaddam B.
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A mixed polyunsaturated fatty acid diet normalizes hippocampal neurogenesis and reduces anxiety in serotonin transporter knockout rats
Authors: Schipper P, Kiliaan AJ, Homberg JR.
Journal: Behav Pharmacol (2011): 324

Absence of fatty acid transporter CD36 protects against Western-type diet-related cardiac dysfunction following pressure overload in mice
Authors: Steinbusch LK, Luiken JJ, Vlasblom R, Chabowski A, Hoebers NT, Coumans WA, Vroegrijk IO, Voshol PJ, Ouwens DM, Glatz JF, Diamant M.
Journal: Am J Physiol Endocrinol Metab (2011): E618

Melittin stimulates fatty acid release through non-phospholipase-mediated mechanisms and interacts with the dopamine transporter and other membrane-spanning proteins
Authors: Keith DJ, Eshleman AJ, Janowsky A.
Journal: Eur J Pharmacol (2011): 501

Fatty acid- and cholesterol transporter protein expression along the human intestinal tract
Authors: Masson CJ, Plat J, Mensink RP, Namiot A, Kisielewski W, Namiot Z, Fullekrug J, Ehehalt R, Glatz JF, Pelsers MM.
Journal: PLoS One (2010): e10380

Application Notes (en Ingles)

A New Red Fluorescent & Robust Screen Quest™ Rhod-4™ Ca2+Indicator for Screening GPCR & Ca2+ Channel Targets
A New Robust No-Wash FLIPR Calcium Assay Kit for Screening GPCR and Calcium Channel Targets
A Non-Radioactive Photometric Assay for Glucose Uptake in Insulin-Responsive 3T3-L1 Adipocytes
A Novel NO Wash Probeniceid-Free Calcium Assay for Functional Analysis of GPCR and Calcium Channel Targets
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides

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