PureCube Co-NTA Agarose

Resina de agarosa PureCube Co-NTA, desarrollada para la purificación por afinidad de proteínas portadoras de etiqueta de polihistidina.

Descripción

Nuestras resinas de agarosa PureCube Co-NTA son pequeñas perlas de resina de agarosa con un diámetro de 40 µm. Se utilizan para la purificación de proteínas etiquetadas con His activas de las células.

Nuestra experiencia de un año en la fabricación de resina de agarosa condujo al alto rendimiento de 40 mg de proteína por ml de resina, que es líder en el mercado en comparación con otros proveedores de Co-NTA. Las resinas PureCube Co-NTA son adecuadas para columnas de centrifugación por lotes y FPLC. Su pequeño diámetro les proporciona una gran estabilidad mecánica.

Además, también puede obtener estas perlas preempaquetadas en una columna/cartucho o como perlas magnéticas.

Catalogo	Producto	Presentación
CU-31403	PureCube Co-NTA Agarose	10 ml
CU-31405	PureCube Co-NTA Agarose	50 ml
CU-31410	PureCube Co-NTA Agarose	250 ml

Hojas de Datos / Protocolos

Caracteristicas

Usage	Specific binding and purification of 6x His tagged proteins
Specificity	Affinity to His tagged proteins
Binding capacity	>30 mg/mL
Bead Ligand	Co-NTA
Bead size	40 μm
Filling quantity	Delivered as a 50 % suspension
Required equipment	Lysis Buffer Wash Buffer Elution Buffer Ice bath Refrigerated centrifuge for 50 mL tube (min 10,000 x g) 50 mL centrifuge tube Micropipettor and Micropipetting tips Disposable gravity flow columns with capped bottom outlet, 2 ml pH meter End-over-end shaker SDS-PAGE buffers, reagents and equipment Optional: Western Blot reagents and equipment

Envio y Almacenamiento

Este producto se envia a temperatura ambiente. Almacenamiento de corto plazo: En buffer neutral. Almacenamiento a largo plazo: En buffer neutral con 20% etanol a 4°C.

Resultado de laboratorio

Diferentes iones metálicos confieren diferente afinidad y especificidad de unión.

La carga de diferentes iones metálicos en una resina da como resultado diferentes afinidades y especificidades para una proteína etiquetada con His. En general, el cobalto exhibe la mayor especificidad de unión de los iones metálicos IMAC comúnmente utilizados, lo que conduce a rendimientos relativamente bajos pero de alta pureza. El cobre, en el otro extremo del espectro, tiene una alta afinidad que conduce a altos rendimientos pero a una unión inespecífica. En la búsqueda de la resina óptima para purificar una proteína, se recomienda explorar diferentes ligandos quelantes (IDA o NTA) y diferentes iones metálicos.

Figura 1: Afinidad y especificidad de los iones metálicos comúnmente utilizados para IMAC. Cargar una resina IMAC con diferentes iones metálicos puede ajustar la afinidad y la especificidad para optimizar la pureza y el rendimiento de una proteína purificada.

VIDEOS

Video Guide – Column Chromatography

Video Guide – Batch Spin Chromatography

Video Guide – FPLC

FAQ

– ¿Por qué debería usar perlas de Co-NTA en lugar de Ni-NTA?

R: Como ilustra la figura 1 en la sección de “resultados de laboratorio”, las purificaciones de Co-NTA que utilizan la etiqueta His son más puras que las de Ni-NTA en comparación. Esto tiene un costo de parte del rendimiento de proteína. Si sus necesidades se ajustan a ese patrón, use perlas de Co-NTA en lugar de Ni-NTA.

– ¿Cuáles son las razones de la unión no específica?

R: Aunque Co-NTA es la forma más pura de purificación de etiquetas His, algunas proteínas no deseadas aún pueden unirse a las perlas. Pero el lavado con NaOH después de la elución de la proteína de interés elimina las proteínas unidas inespecíficas de la resina.

– Quiero usar una alta concentración de EDTA y DTT. ¿Es posible utilizar Co-NTA de Cube Biotech?

R: No, no se recomienda porque los iones de cobalto se reducen con DTT o se disuelven con EDTA. Si desea utilizar altas concentraciones de EDTA y DTT, debe utilizar nuestra resina Indigo.

-¿Cómo es la capacidad the flujos elevados?

R: Si se desean velocidades de flujo más altas, recomendamos usar perlas con diámetros más grandes.

Ofrecemos perlas de Co-NTA con diámetros medios de 40 µm, 100 µm y 400 µm (XL).

Con cada aumento de tamaño, las velocidades de flujo también aumentan debido al espacio proporcionalmente creciente entre las perlas. Sin embargo, la superficie de las perlas no aumenta a la misma velocidad que el diámetro (ley del cuadrado-cubo). Eso da como resultado cantidades decrecientes de proteína purificada por ml de perlas mientras aumenta el tamaño de las perlas.

Para 40 µm de perlas de 100 µm, ambos tenemos cantidades de purificación promedio de ~30 µg de proteína/mL de perlas. Con perlas de 400 µm (XL), esto disminuye a una cantidad no especificada.

Recomendamos leer el apartado correspondiente de la guía “Introducción a las matrices de agarosa” sobre este tema para obtener información más detallada.

– Después de usar DTT mi resina cambió de color. ¿Cómo regenerarlo?

R: Seguramente la TDT ha dañado las perlas. Las perlas de Co-NTA solo tienen una tolerancia DTT limitada de aproximadamente 1 mM. Sin embargo, puede regenerarlos para recuperar su funcionalidad. Lea nuestro protocolo detallado para obtener más información al respecto.

Sin embargo, recomendamos usar productos Ni-INDIGO en su lugar. Trabajan con los mismos buffers y protocolos que los productos Ni-NTA pero tienen una tolerancia DTT de 20 mM.

Bibliografía

PURIFIED PROTEIN	YEAR	AUTHOR
eGFP	2015	Li Y., Lui Y., Gao T., Zhang B., Song Y., Terrell J-L., Barber N., Bentley W-E., Takeuchi I., Payne G-F., Wang Q.
HrpII	2017	Bauer W.S., Richardson K.A., Adams N.M., Ricks K.M., Gasperino D.J., Ghionea S.J., Rosen M., Nichols K.P., Weigl B.H., Haselton F.R., Wright D.W.
Flavin-dependent tryptophan 6-halogenase Thal	2018	Moritzer A.-C., Minges H., Prior T., Frese M., Seewald N., Niemann H.H.
Metal Binding Phages	2019	Matys S., Schönberger N., Lederer F., Pollmann K.

Descargo de responsabilidad:

Nuestros productos están destinados para investigación en aplicaciones de biología molecular. Estos productos no están destinados al diagnóstico, prevención o tratamiento de una enfermedad.

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Proteínas