Las perlas magnéticas PureCube Co-NTA MagBeads XL se desarrollaron para la purificación por afinidad de proteínas que llevan etiqueta de polihistidina
Descripción
Las perlas magnéticas PureCube Co-NTA fueron desarrolladas por Cube Biotech para la purificación de proteínas His-tag. Nuestra experiencia de un año en la fabricación de resina de agarosa condujo al alto rendimiento de 30 mg de proteína por ml de resina, que es líder en el mercado en comparación con otros proveedores de Co-NTA.
Los productos Co-NTA de Cube Biotech también están disponibles como perlas de resina de agarosa para FPLC y centrifugación por lotes o como perlas magnéticas XL para medios celulares más viscosos. Para su comodidad, Cube Biotech también ofrece su propio separador MagBead para usar con nuestras perlas magnéticas.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| CU-31501 | PureCube Co-NTA MagBeads | 1 ml |
| CU-31505 | PureCube Co-NTA MagBeads | 5 ml |
| CU-31525 | PureCube Co-NTA MagBeads | 25 ml |
| CU-31590 | PureCube Co-NTA MagBeads | 4 x 25 ml |
Hojas de Datos / Protocolos
- Co-NTA MagBeads Datasheet
- Native Purification Protocol
- Denaturing Purification Protocol
- Washing & Regeneration Protocol
- His-tag Western blot Protocol
Caracteristicas
| Usage | Specific binding and purification of 6x His-tagged proteins |
| Specificity | Affinity to His-tagged proteins |
| Binding capacity | >30 mg/mL |
| Bead Ligand | Co-NTA |
| Bead size | 30 μm |
| Filling quantity | Delivered as a 25 % suspension |
| pH stability | 2-14 |
| Other stabilities | 100% methanol, 100% ethanol, 8 M urea, 6 M guanidinium hydrochloride, 30% (v/v) acetonitrile |
Envio y Almacenamiento
Este producto se envia a temperatura ambiente. Almacenamiento de corto plazo: En buffer de equilibrio (ver protocolo). Almacenamiento a largo plazo: En 20% etanol a 4°C.
Resultado de laboratorio
Diferentes iones metálicos confieren diferente afinidad y especificidad de unión.
La carga de diferentes iones metálicos en una resina da como resultado diferentes afinidades y especificidades para una proteína etiquetada con His. En general, el cobalto exhibe la mayor especificidad de unión de los iones metálicos IMAC comúnmente utilizados, lo que conduce a rendimientos relativamente bajos pero de alta pureza. El cobre, en el otro extremo del espectro, tiene una alta afinidad que conduce a altos rendimientos pero a una unión inespecífica. En la búsqueda de la resina óptima para purificar una proteína, se recomienda explorar diferentes ligandos quelantes (IDA o NTA) y diferentes iones metálicos.
Figura 1: Afinidad y especificidad de los iones metálicos comúnmente utilizados para IMAC. Cargar una resina IMAC con diferentes iones metálicos puede ajustar la afinidad y la especificidad para optimizar la pureza y el rendimiento de una proteína purificada.
VIDEOS
FAQ
– ¿Cuáles son las razones de la unión no específica?
R: Aunque Co-NTA es la forma más pura de purificación de etiquetas His, algunas proteínas no deseadas aún pueden unirse a las perlas. Pero el lavado con NaOH después de la elución de la proteína de interés elimina las proteínas unidas inespecíficas de la resina.
– Quiero usar una alta concentración de EDTA y DTT. ¿Es posible utilizar Co-NTA de Cube Biotech?
R: No, no se recomienda porque los iones de cobalto se reducen con DTT o se disuelven con EDTA. Si desea utilizar altas concentraciones de EDTA y DTT, debe utilizar nuestra resina Indigo.
-¿Cómo es la capacidad the flujos elevados?
R: Si se desean velocidades de flujo más altas, recomendamos usar perlas con diámetros más grandes.
Ofrecemos perlas de Co-NTA con diámetros medios de 40 µm, 100 µm y 400 µm (XL).
Con cada aumento de tamaño, las velocidades de flujo también aumentan debido al espacio proporcionalmente creciente entre las perlas. Sin embargo, la superficie de las perlas no aumenta a la misma velocidad que el diámetro (ley del cuadrado-cubo). Eso da como resultado cantidades decrecientes de proteína purificada por ml de perlas mientras aumenta el tamaño de las perlas.
Para 40 µm de perlas de 100 µm, ambos tenemos cantidades de purificación promedio de ~30 µg de proteína/mL de perlas. Con perlas de 400 µm (XL), esto disminuye a una cantidad no especificada.
Recomendamos leer el apartado correspondiente de la guía “Introducción a las matrices de agarosa” sobre este tema para obtener información más detallada.
– Después de usar DTT mi resina cambió de color. ¿Cómo regenerarlo?
R: Seguramente la TDT ha dañado las perlas. Las perlas de Co-NTA solo tienen una tolerancia DTT limitada de aproximadamente 1 mM. Sin embargo, puede regenerarlos para recuperar su funcionalidad. Lea nuestro protocolo detallado para obtener más información al respecto.
Sin embargo, recomendamos usar productos Ni-INDIGO en su lugar. Trabajan con los mismos buffers y protocolos que los productos Ni-NTA pero tienen una tolerancia DTT de 20 mM.
Descargo de responsabilidad:
Nuestros productos están destinados para investigación en aplicaciones de biología molecular. Estos productos no están destinados al diagnóstico, prevención o tratamiento de una enfermedad.
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