La agarosa PureCube Cu-NTA se desarrolló para la purificación por afinidad de proteínas que portan una etiqueta de polihistidina, o para el enriquecimiento de proteínas de unión a cobre.
Descripción
Nuestras resinas de agarosa PureCube Cu-NTA son pequeñas perlas de resina de agarosa con un diámetro de 40 µm. Se utilizan para la purificación de proteínas etiquetadas con His activas de las células y el enriquecimiento de proteínas de unión a cobre.
Nuestra experiencia de un año en la fabricación de resina de agarosa condujo al alto rendimiento de 80 mg de proteína por ml de resina, que es líder en el mercado en comparación con otros proveedores de Cu-NTA. Las resinas PureCube Cu-NTA son adecuadas para columnas de centrifugación por lotes y FPLC. Su pequeño diámetro les proporciona una gran estabilidad mecánica.
Además, también puede obtener estas perlas de Cu-NTA pre empaquetadas en una columna/cartucho o como perlas magnéticas.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| CU-31403-Cu | PureCube Cu-NTA Agarose | 10 ml |
| CU-31405-Cu | PureCube Cu-NTA Agarose | 50 ml |
| CU-31410-Cu | PureCube Cu-NTA Agarose | 250 ml |
| CU-31412-Cu | PureCube Cu-NTA Agarose | 500 ml |
Hojas de Datos / Protocolos
- Cu-NTA agarose Datasheet
- Native Purification Protocol
- Denaturing Purification Protocol
- Batchspin MINI Native Purification Protocol
- Batchspin MINI Denaturing Purification Protocol
- Batchspin MIDI Native Purification Protocol
- Batchspin MIDI Denaturing Purification Protocol
- Washing & Regeneration Protocol
- Cartridge Packing Protocol
Caracteristicas
| Usage | Specific binding and purification of 6x His-tagged proteins Binding of Copper-binding proteins |
| Specificity | Affinity to His-tagged proteins Affinity to Copper-binding proteins |
| Binding capacity | >80 mg/mL |
| Bead Ligand | Cu-NTA |
| Bead size | 40 μm |
| Filling quantity | Delivered as a 50 % suspension |
| Metal ion capacity | > 15 µeqv Cu2+/ml |
| pH stability | 2-14 |
| Other stabilities | 100% methanol, 100% ethanol, 8 M urea, 6 M guanidinium hydrochloride, 30% (v/v) acetonitrile |
| Required equipment | Lysis Buffer Wash Buffer Elution Buffer Ice bath Refrigerated centrifuge for 50 mL tube (min 10,000 x g) 50 mL centrifuge tube Micropipettor and Micropipetting tips Disposable gravity flow columns with capped bottom outlet, 2 ml pH meter End-over-end shaker SDS-PAGE buffers, reagents and equipment Optional: Western Blot reagents and equipment |
Envio y Almacenamiento
PureCube Compact Cartridge Co-NTA: Envio a temperatura ambiente: Buffer de almacenamiento: 20% ethanol, pH 6.5. Temperatura de almacenamiento: 2-8 °C
Resultado de laboratorio
Diferentes iones metálicos confieren diferente afinidad y especificidad de unión.
La carga de diferentes iones metálicos en una resina da como resultado diferentes afinidades y especificidades para una proteína etiquetada con His. En general, el cobalto exhibe la mayor especificidad de unión de los iones metálicos IMAC comúnmente utilizados, lo que conduce a rendimientos relativamente bajos pero de alta pureza. El cobre, en el otro extremo del espectro, tiene una alta afinidad que conduce a altos rendimientos pero a una unión inespecífica. En la búsqueda de la resina óptima para purificar una proteína, se recomienda explorar diferentes ligandos quelantes (IDA o NTA) y diferentes iones metálicos.
Figura 1: Afinidad y especificidad de los iones metálicos comúnmente utilizados para IMAC. Cargar una resina IMAC con diferentes iones metálicos puede ajustar la afinidad y la especificidad para optimizar la pureza y el rendimiento de una proteína purificada.
VIDEOS
FAQ
– ¿Cuáles son las razones de la unión no específica?
R: Aunque Cu-NTA es la forma más pura de purificación de etiquetas His, algunas proteínas no deseadas aún pueden unirse a las perlas. Pero el lavado con NaOH después de la elución de la proteína de interés elimina las proteínas unidas inespecíficas de la resina.
– Quiero usar una alta concentración de EDTA y DTT. ¿Es posible utilizar Cu-NTA de Cube Biotech?
R: No, no se recomienda porque los iones de níquel se reducen con DTT o se disuelven con EDTA. Si desea utilizar altas concentraciones de EDTA y DTT, debe utilizar nuestra resina Indigo.
– Después de usar DTT la resina cambió de color. ¿Cómo regenerarlo?
R: Seguramente la DTT ha dañado las perlas. Las perlas de Cu-NTA solo tienen una tolerancia DTT muy limitada. Sin embargo, puede regenerarlos para recuperar su funcionalidad. Lea nuestro protocolo detallado para obtener más información al respecto. Está vinculado en la parte superior de esta pagina.
Sin embargo, recomendamos usar productos Ni-INDIGO en su lugar. Trabajan con los mismos tampones y protocolos que los productos Cu-NTA pero tienen una tolerancia DTT de 20 mM.
– ¿Se pueden cortar las perlas de Cu-NTA?
R: Sí pueden. Sin embargo, recomendamos utilizar nuestras perlas NTA o IDA precortadas, para empezar.
Descargo de responsabilidad:
Nuestros productos están destinados para investigación en aplicaciones de biología molecular. Estos productos no están destinados al diagnóstico, prevención o tratamiento de una enfermedad.
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