Este kit es de fluorescencia roja y se puede utilizar para ELISA. Proporciona un protocolo de ensayo de “mezcla y lectura” optimizado que es compatible con los instrumentos de manipulación de líquidos HTS.
Descripción
Ensayo de peroxidasa fluorimétrica (HRP) Amplite®
La peroxidasa es una molécula pequeña (MW ~40 KD) que generalmente se puede conjugar con un anticuerpo en una proporción de 4:1. Debido a su pequeño tamaño, rara vez causa un problema de impedimento estérico con la formación del complejo anticuerpo/antígeno.
La peroxidasa es económica en comparación con otras enzimas marcadoras. La principal desventaja asociada con la peroxidasa es su baja tolerancia a muchos conservantes, como la azida de sodio, que inactiva la actividad de la peroxidasa incluso a bajas concentraciones. Los conjugados de HRP se utilizan ampliamente como reactivos de detección secundarios en ELISA, técnicas inmunohistoquímicas y análisis de transferencia Northern, Southern y Western. Ofrecemos este ensayo HRP rápido (10 min) en un sistema de ensayo sin lavado, homogéneo y de un solo paso.
Este se puede utilizar para ELISA, que caracteriza la cinética de la reacción enzimática y la detección de alto rendimiento de los inhibidores de la oxidasa, etc. El kit proporciona un protocolo de ensayo optimizado de ‘mezclar y leer’ que es compatible con los instrumentos de manipulación de líquidos HTS.
Este kit se conoce en ingles como: Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit Red Fluorescence
Catalogo | Producto | Presentación |
---|---|---|
AAT-11552 | Ensayo de peroxidasa fluorimétrica (HRP) Amplite®Fluorescencia roja | 500 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Absorbancia
Absorbancia | 576 ± 5 nm |
Placa recomendada | Fondo claro |
Lector de Microplacas de Fluorescencia
Excitación | 540 nm |
Emisión | 590 nm |
Cutoff | 575 nm |
Placa recomendada | Negra sólida |
Componentes
Componente A: Amplite™ Red Peroxidase Substrate | 1 vial |
Componente B: H2O2 | 1 vial (3% sol estabilizadora, 200 µL) |
Componente C: Buffer de ensayo | 1 bottella (100 ml) |
Componente D: Horseradish Peroxidase | 1 vial (20 unidades) |
Componente E: DMSO | 1 vial (0.5ml) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
1. Solución madre de sustrato de peroxidasa roja Amplite™ (100X) Agregue 250 µl de DMSO (componente E) en el vial de sustrato de peroxidasa roja Amplite™ (componente A) para preparar una solución madre de sustrato de peroxidasa roja Amplite™ 100X. La solución madre debe usarse con prontitud. Mantener alejado de la luz.
2. Solución estándar de HRP (20 U/mL) Agregue 1 ml de buffer de ensayo (componente C) al vial de peroxidasa de rábano picante (componente D) para obtener 20 U/ml de solución estándar de HRP.
3. Solución madre de H2O2 (20 mM) Agregue 22,7 µl de H2O2 al 3 % (0,88 M, componente B) en 977 µl de buffer de ensayo (componente C) para preparar una solución madre de H2O2 20 mM. Nota: La solución diluida de H2O2 no es estable. La porción no utilizada debe desecharse.
PREPARACION DE SOLUCION DE ESTANDAR
Para su conveniencia puede usar el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/11552
Estándar HRP
Agregue 1 µL de solución estándar de HRP de 20 U/mL en 1999 µL de buffer de ensayo (Componente C) para obtener una solución estándar de HRP de 10 mU/mL (SD7). Tome 10 mU/ml de solución estándar de HRP (SD7) y realice diluciones en serie 1:3 para obtener estándares de HRP diluidos en serie (SD6 – SD1) con buffer de ensayo (componente C).
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 50 μL de solución madre de sustrato de peroxidasa roja Amplite™ 100X y 50 μL de solución madre de H2O2 20 mM en 4,9 mL de buffer de ensayo (componente C) para preparar la solución de trabajo de HRP. Mantener alejado de la luz.
Espectro
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Propiedades Espectrales
Excitación (nm) | 571 |
Emisión (nm) | 584 |
Figura 1. La respuesta a la dosis de HRP se midió con el kit de ensayo de peroxidasa fluorimétrica Amplite en una placa negra utilizando un lector de microplacas de fluorescencia Gemini (Molecular Devices).
Producto Relacionado
Name | Excitation (nm) | Emission (nm) |
Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Near Infrared Fluorescence* | 648 | 668 |
Bibliografía
Identification of acetylcholinesterase inhibitors using homogenous cell-based assays in quantitative high-throughput screening platforms
Authors: Li, Shuaizhang and Huang, Ruili and Solomon, Samuel and Liu, Yitong and Zhao, Bin and Santillo, Michael F and Xia, Menghang
Journal: Biotechnology journal (2017): 1600715
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Referencias
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Horseradish peroxidase-driven fluorescent labeling of nanotubes with quantum dots
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Application Notes
A Library of Well-Defined and Water-Soluble Poly(alkyl phosphonate)s with Adjustable Hydrolysis
Acetylcholinesterase Inhibitory Activity of Pigment Echinochrome A
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FAQ
Are coumarins water-soluble?
Are NADH and ROS related?
Can I measure NADPH without lysing my cells?
Can I use Amplite Fluorimetric Glutamic Acid Assay Kit with an absorbance microplate reader?
How are fatty acids activated?
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