Descripción
Ensayo de peróxido de hidrógeno intracelular fluorimétrico Cell Meter™ de fluorescencia Verde
El peróxido de hidrógeno (H2O2) es un subproducto metabólico del oxígeno reactivo que sirve como regulador clave para una serie de estados relacionados con el estrés oxidativo. Está involucrado en una serie de eventos biológicos que se han relacionado con el asma, la aterosclerosis, la vasculopatía diabética, la osteoporosis, una serie de enfermedades neurodegenerativas y el síndrome de Down.
Quizás el aspecto más intrigante de la biología del peróxido de hidrógeno es el informe reciente de que los anticuerpos tienen la capacidad de convertir el oxígeno molecular en peróxido de hidrógeno para contribuir a los procesos normales de reconocimiento y destrucción del sistema inmunitario. La medición de esta especie reactiva ayudará a determinar cómo el estrés oxidativo modula diversas vías intracelulares.
Este kit de ensayo de peróxido de hidrógeno Cell Meter™ utiliza nuestro exclusivo sensor de peróxido de hidrógeno OxiVision™ Green para cuantificar el peróxido de hidrógeno en células vivas. OxiVision™ Green es permeable a las células y genera la fluorescencia verde cuando reacciona con el peróxido de hidrógeno.
El kit es un formato de ensayo optimizado de ‘mezclar y leer’ que es compatible con los instrumentos de manejo de líquidos HTS.
Nombre en Ingles: Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-11503 | Ensayo de peróxido de hidrógeno intracelular fluorimétrico Cell Meter™ | 200 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Microscopio de Fluorescencia
| Excitación | Canal FITC |
| Emisión | Canal FITC |
| Placa recomendada | Pared negra/Fondo claro |
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 490 nm |
| Emisión | 525 nm |
| Cutoff | 515 nm |
| Placa Recomendada | Pared negra/Fondo claro |
| Especificaciones Instrumento | Modo lectura inferior |
Componentes
| Componente A: Amplite™ Green Peroxide Sensor | 1 vial |
| Componente B: H2O2 | 1 vial (solución estabilizada al 3%, 200 µL) |
| Componente C: Buffer de ensayo | 1 botella (20 ml) |
| Componente D: DMSO | 1 vial (200 µL) |
Espectro
Abrir en Advanced Spectrum Viewer
Propiedades Espectrales
| Excitación (nm) | 498 |
| Emisión (nm) | 517 |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre del sensor de peróxido verde Amplite™ (250X):
Agregue 50 µl de DMSO (componente D) en el vial del sensor de peróxido verde Amplite™ (componente A) para preparar la solución madre del sensor de peróxido verde Amplite™ 250X. Proteger de la luz. - Solución estándar de H2O2 (20 mM):
Agregue 22,7 µl de H2O2 al 3 % (0,88 M, componente B) en 977 µl de buffer de ensayo (componente C) para preparar una solución estándar de H2O2 20 mM. Nota: La solución estándar de H2O2 diluida no es estable. La porción no utilizada debe desecharse.
PREPARACION DE SOLUCION ESTANDAR
Para mayor comodidad, utilice el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/11503
Agregue 50 µL de solución estándar de H2O2 20 mM a 950 µL de tampón de ensayo (componente C) para obtener una solución estándar de H2O2 1000 µM. Tome una solución estándar de H2O2 1000 µM y realice diluciones en serie 1:3 para obtener estándares de H2O2 diluidos en serie (HS1 – HS7) con tampón de ensayo (componente C).
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 20 μL de solución madre del sensor de peróxido verde Amplite™ 250X en 5 mL de buffer de ensayo (componente C) para hacer que la solución de trabajo del sensor de peróxido verde Amplite™.
Preparacion de Células
Para obtener información sobre la preparación de muestras de células, visite https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Figura 1. Imágenes de fluorescencia de peróxido de hidrógeno intracelular en células HeLa utilizando el kit de ensayo de peróxido de hidrógeno intracelular fluorimétrico Cell Meter™ (Cat. 11503). Las células HeLa se trataron con (izquierda) o sin (derecha) peróxido de hidrógeno 100 µM a 37oC durante 90 minutos.
Figura 2. Respuestas de fluorescencia de OxiVision Green™ a varias especies de ROS.
Productos Adicionales
| Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* |
Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence*
Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence Optimized for Flow Cytometry*
Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence Optimized for Flow Cytometry*
Cell Meter™ Mitochondrial Hydroxyl Radical Detection Kit *Red Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Mitochondrial Superoxide Activity Assay Kit *Green Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Peroxynitrite Assay Kit *Green Fluorescence*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Peroxynitrite Assay Kit *Optimized for Flow Cytometry*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Nitric Oxide (NO) Activity Assay Kit *Orange Fluorescence Optimized for Microplate Reader*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Nitric Oxide (NO) Activity Assay Kit *Orange Fluorescence Optimized for Flow Cytometry*
Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Nitric Oxide (NO) Activity Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry*
Cell Meter™ Live Cell Caspase 3/7 Binding Assay Kit *Green Fluorescence*
Cell Meter™ Live Cell Caspase 3/7 Binding Assay Kit *Red Fluorescence*
Cell Meter™ Live Cell Caspase 1 Binding Assay Kit *Green Fluorescence*
Bibliografía
Homogeneously catalytic oxidation of phenanthrene by the reaction of extracellular secretions of pyocyanin and Nicotinamide Adenine Dinucleotide
Authors: Nie, Hongyun and Nie, Maiqian and Diwu, Zhenjun and Wang, Lei and Qiao, Qi and Zhang, Bo and Yang, Xuefu
Journal: Environmental Research (2020): 110159
Semaphorin 4D inhibits neutrophil activation and is involved in the pathogenesis of neutrophil-mediated autoimmune vasculitis
Authors: Nishide, Masayuki and Nojima, Satoshi and Ito, Daisuke and Takamatsu, Hyota and Koyama, Shohei and Kang, Sujin and Kimura, Tetsuya and Morimoto, Keiko and Hosokawa, Takashi and Hayama, Yoshitomo and others, undefined
Journal: Annals of the Rheumatic Diseases (2017): annrheumdis–2016
Hydrogen peroxide detection with high specificity in living cells and inflamed tissues
Authors: Rong, Lei and Zhang, Chi and Lei, Qi and Hu, Ming-Ming and Feng, Jun and Shu, Hong-Bing and Liu, Yi and Zhang, Xian-Zheng
Journal: Regenerative Biomaterials (2016): rbw022
Aggravation of brain infarction through an increase in acrolein production and a decrease in glutathione with aging
Authors: Uemura, Takeshi and Watanabe, Kenta and Ishibashi, Misaki and Saiki, Ryotaro and Kuni, Kyoshiro and Nishimura, Kazuhiro and Toida, Toshihiko and Kashiwagi, Keiko and Igarashi, Kazuei
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2016): 630–635
Modification of lignin in sugarcane bagasse by a monocopper hydrogen peroxide-generating oxidase from Thermobifida fusca
Authors: Chen, Cheng-Yu and Lee, Cheng-Cheng and Chen, Hung-Shuan and Yang, Chao-Hsun and Wang, Shu-Ping and Wu, Jyh-Horng and Meng, Menghsiao
Journal: Process Biochemistry (2016): 1486–1495
Dopamine-mediated oxidation of methionine 127 in α-synuclein causes cytotoxicity and oligomerization of α-synuclein
Authors: Nakaso, Kazuhiro and Tajima, Naoko and Ito, Satoru and Teraoka, Mari and Yamashita, Atsushi and Horikoshi, Yosuke and Kikuchi, Daisuke and Mochida, Shinsuke and Nakashima, Kenji and Matsura, Tatsuya
Journal: PLoS One (2013): e55068
Hydrogen peroxide stimulates the epithelial sodium channel through a phosphatidylinositide 3-kinase-dependent pathway
Authors: Ma, He-Ping
Journal: Journal of Biological Chemistry (2011): 32444–32453
Application Notes
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
A Comparison of Fluorescent Red Calcium Indicators for Detecting Intracellular Calcium Mobilization in CHO Cells
A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
A New Red Fluorescent & Robust Screen Quest™ Rhod-4™ Ca2+Indicator for Screening GPCR & Ca2+ Channel Targets
A New Robust No-Wash FLIPR Calcium Assay Kit for Screening GPCR and Calcium Channel Targets
FAQ
ROS Detection: ROS probe selection guide.
Are NADH and ROS related?
Are there any alternatives for ethidium bromide in agarose gels?
Are there any alternatives to Cy5?
Are there any calcium indicators that don’t require probenecid (PBC)?
AssayWise
Selecting the right ROS probe
Hydrogen Peroxide Detection
Intracellular Nitric Oxide (NO) Assays
Intracellular Total ROS Activity Assays
Multicolor Intracellular Calcium Detection Probes