Es un indicador de calcio ideal para multiplexar ensayos intracelulares con líneas celulares GFP o anticuerpos marcados con FITC/Alexa Fluor® 488.
Descripción
Indicador de calcio Fluo-3 AM
La medición del calcio es fundamental para numerosas investigaciones biológicas. Las sondas fluorescentes que muestran respuestas espectrales al unirse al calcio han permitido a los investigadores investigar cambios en las concentraciones de calcio libre intracelular mediante el uso de microscopía de fluorescencia, citometría de flujo, espectroscopia de fluorescencia y lectores de microplacas de fluorescencia.
Rhod-2 se utiliza con mayor frecuencia entre los indicadores de calcio fluorescentes rojos. Sin embargo, Rhod-2 AM sólo es moderadamente fluorescente en células vivas tras la hidrólisis de esterasa y tiene respuestas de calcio celular muy pequeñas.
Cal-590™ ha sido desarrollado para mejorar la carga de células Rhod-2 y la respuesta de calcio mientras se mantiene la longitud de onda espectral de Rhod-2, lo que lo hace compatible con el conjunto de filtros TRITC/Cy3®. En las células CHO y HEK, Cal-590™ AM tiene una respuesta de calcio celular que es mucho más sensible que Rhod-2 AM.
Los espectros de Cal-590 están bien separados de los de FITC, Alexa Fluor® 488 y GFP, lo que la convierte en una sonda de calcio ideal para multiplexar ensayos intracelulares con líneas celulares GFP o anticuerpos marcados con FITC/Alexa Fluor® 488.
Nombre en Ingles: Cal-590™ AM
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-20510 | Indicador de calcio Cal-590™ AM | 5 x 50ug |
| AAT-20511 | Indicador de calcio Cal-590™ AM | 10 x 50ug |
| AAT-20512 | Indicador de calcio Cal-590™ AM | 1 mg |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento a <-15 °C. Minimizar exposición a la luz. Producto se entrega con geles.
Plataforma
Microscopio de Fluorescencia
| Excitación | TRITC/Cy3 |
| Emisión | TRITC/Cy3 |
| Placa recomendada | Pared negra / fondo claro |
Lector de microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 540 nm |
| Emisión | 590 nm |
| Cutoff | 570 nm |
| Placa Recomendada | Pared negra / fondo claro |
| Epecificaciones Instrumento | Modo de lectura inferior/Manejo de líquidos programable |
Calculadora
Preparación de solución madre común
Tabla 1. Volumen de DMSO necesario para reconstituir la masa específica de Cal-590™ AM a la concentración dada. Tenga en cuenta que el volumen es sólo para preparar la solución madre. Consulte el protocolo experimental de muestra para conocer los buffers experimentales/fisiológicos adecuados.
| 0.1 mg | 0.5 mg | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 78.938 µL | 394.692 µL | 789.384 µL | 3.947 mL | 7.894 mL |
| 5 mM | 15.788 µL | 78.938 µL | 157.877 µL | 789.384 µL | 1.579 mL |
| 10 mM | 7.894 µL | 39.469 µL | 78.938 µL | 394.692 µL | 789.384 µL |
Espectro
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Propiedades espectrales
| Coeficiente de Extinción (cm -1 M -1) | 780001 |
| Excitación (nm) | 574 |
| Emisión (nm) | 588 |
| Rendimiento cuántico | 0.621 |
Propiedades físicas
| Constante de disociación (Kd, nM) | 561 |
| Peso Molecular | 1266.81 |
| Solvente | DMSO |
Imagen
Figura 1. Respuesta de calcio estimulada por ATP del receptor P2Y endógeno en células CHO-K1 incubadas con Cal-590® AM o Rhod-2 AM en las mismas condiciones. Se sembraron células CHO-K1 durante la noche a razón de 50.000 células por 100 µl por pocillo en una placa Costar de 96 pocillos con pared negra y fondo transparente. Se añadieron a las células 100 µl de Cal-590® AM o Rhod-2 AM 5 µg/ml con probenecid 2,5 mM y las células se incubaron a 37 °C durante 1 hora. FlexStation (Molecular Devices) añadió ATP (50 µl/pocillo) para lograr las concentraciones finales indicadas.
Figura 2. Tinción de astrocitos con Cal-590 en la corteza de ratón in vivo. (A) Imagen de fluorescencia de dos fotones (promedio de 1200 fotogramas consecutivos) obtenida en la capa 2/3 de la corteza visual de un ratón anestesiado después de una carga masiva con Cal-590 AM. La longitud de onda de excitación fue de 1.050 nm. (B) Imagen de fluorescencia de dos fotones de la misma sección óptica que en A después de tinción adicional con sulforodamina 101 (SR 101).
Para la tinción con SR 101, utilizamos el protocolo publicado inicialmente por Nimmerjahn et al. La longitud de onda de excitación fue de 900 nm. Las flechas rojas aquí y en A indican dos astrocitos marcados. Fuente: Imágenes cerebrales profundas de dos fotones con un indicador fluorométrico de Ca2+ desplazado al rojo por Tischbirek, C., Birkner, A., Jia, H., Sakmann, B. y Konnerth, A. Proc. Nacional. Acad. Ciencia. Estados Unidos 112, 11377–11382. julio 2015
Productos alternos
| Nombre | Excitación (nm) | Emisión (nm) | Rendimiento Cuántico |
| Cal-630™ AM | 609 | 626 | 0.371 |
| Cal-520®, AM | 492 | 515 | 0.751 |
| Cal-520FF™, AM | 492 | 515 | 0.751 |
| Cal-520N™, AM | 492 | 515 | 0.751 |
| Calbryte™ 590 AM | 581 | 593 | – |
| Cal-500™ AM | 388 | 482 | 0.481 |
| Cal-520ER™ AM | 492 | 515 | – |
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Bibliografia
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