El Kit Fluorimétrico de Detección de Endotoxinas Amplite® puede detectar una amplia gama de endotoxinas (desde 1 UE/ml hasta 0,001 UE/ml).
Descripción
El lipopolisacárido (LPS), también conocido como endotoxina, es el componente principal de la membrana externa de las bacterias Gram-negativas. El LPS es un potente estimulador del sistema inmunitario innato de los vertebrados y puede provocar fiebre, shock séptico y, finalmente, la muerte. LPS también se reconoce como un biomarcador para la detección de la invasión de patógenos bacterianos y es responsable del desarrollo de la respuesta inflamatoria y el shock endotóxico en casos extremos. La detección de LPS en materiales biológicos, como muestras de proteínas, péptidos o anticuerpos, es una tarea fundamental en la fabricación y el procesamiento biológicos.
El kit de detección de endotoxinas fluorimétricas Amplite® utiliza Endotoxin Green™, un sustrato fluorogénico sensible. Endotoxin Green™ se hidroliza en presencia de endotoxinas y del lisado de amebocitos de Limulus (LAL), un extracto de células sanguíneas de un cangrejo herradura. El producto hidrolizado de Endotoxin Green™ genera una fuerte fluorescencia verde. La actividad de la endotoxina es proporcional a la intensidad de la fluorescencia resultante de la hidrólisis de Endotoxin Green™.
El kit fluorimétrico de detección de endotoxinas Amplite® puede detectar una amplia gama de endotoxinas (desde 1 UE/ml hasta 0,001 UE/ml). Es muy sensible y puede detectar tan solo 0,001 UE/mL de endotoxina en 30 min.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-60006 | Amplite® Fluorimetric Endotoxin Detection Kit | 100 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 490 nm |
| Emisión | 525 nm |
| Cutoff | 515 nm |
| Placa recomendada | Negra sólida |
| Especificaciones Instrumento | Modo de lectura superior |
Componentes
| Componente A: Endotoxin Green™ | 1 vial |
| Componente B: Endotoxin-Free Water | 1 botella (25 mL) |
| Componente C: Limulus Amebocyte Lysate | 1 vial |
| Componente D: E.coli Endotoxin Standard | 1 vial (100 EU/mL) |
| Componente E: DMSO | 1 vial (100 µL) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre 100 X Endotoxin Green™
Agregue 50 µL de DMSO en el vial de Endotoxin Green™ (Componente A) para preparar una solución madre de Endotoxin Green™ 100X.
Nota: Mantener alejado de la luz. - Solución de lisado de amebocitos de Limulus 5X
Agregue 500 µl de agua libre de endotoxinas (componente B) en el vial de lisado de amebocitos de Limulus (componente C) para preparar una solución de lisado de amebocitos de Limulus 5X.
PREPARACION DE SOLUCION DE ESTANDAR
Para su conveniencia puede usar el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/
Solución estándar de endotoxina de E.coli
Agregue 10 µL de solución estándar de endotoxina de E.coli de 100 UE/mL a 990 µL de agua libre de endotoxinas (componente B) para generar una solución estándar de endotoxina de E.coli de 1 UE/mL (ES1). Luego tome 1 EU/mL de solución estándar de endotoxina de E.coli (ES1) y realice diluciones en serie 1:3 en agua libre de endotoxinas (componente B) para obtener estándares de endotoxina de E.coli diluidos en serie (ES2 – ES7).
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
1. Solución de trabajo Endotoxin Green™
Agregue 50 µl de solución madre de Endotoxin Green™ en 5 ml de agua libre de endotoxinas (componente B) para obtener un volumen total de 5,05 ml de solución de trabajo de Endotoxin Green™.
Nota Prepare la cantidad de solución de trabajo Endotoxin Green™ según sea necesario. Mantenga la solución de trabajo alejada de la luz.
2. Solución de trabajo de lisado de amebocitos de Limulus (LAL)
Agregue 500 µl de solución madre de lisado de amebocitos de Limulus (LAL) en 2 ml de agua libre de endotoxinas (componente B) para obtener un volumen total de 2,5 ml de solución de trabajo de lisado de amebocitos de Limulus (LAL).
Nota: Prepare la cantidad de solución de trabajo LAL según sea necesario y antes de su uso. Usando la botella o el tubo sin endotoxinas.
Imagen
Figura 1. La respuesta a la dosis de endotoxina de E. coli se midió en una placa de 96 pocillos de fondo negro/sólido usando un lector de microplacas Gemini (Molecular Devices) a Ex/Em=490/525 nm, corte=515 nm. Después de la incubación se pueden detectar tan solo 0,001 UE/mL de endotoxina de E.coli (n=3).
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Bibliografía
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