Buccutite™ esta optimizado para el etiquetado 100ug de proteinas y es mucho más robusto y fácil de usar. Permite una conjugación más rápida y cuantitativa de biomoléculas con mayores eficiencias y rendimientos.
Descripción
Las conjugaciones proteína-proteína se realizan comúnmente con un conector bifuncional (como el SMCC de uso común), que tiene una reactividad diferente en cada extremo para unir dos proteínas diferentes. Un extremo del reticulador reacciona (a través del éster NHS) con las aminas (-NH2) que se encuentran en el aminoácido lisina y el extremo N, y el otro extremo reacciona (a través de la maleimida) con los grupos tiol (-SH) que se encuentran en el aminoácido cisteína
Sin embargo, la proteína modificada con SMCC es extremadamente inestable y, a menudo, autorreactiva, ya que las proteínas a menudo contienen grupos amina y tiol que provocan una cantidad significativa de entrecruzamiento homogéneo. Además, es bastante difícil y tedioso cuantificar el número de grupos maleimida en una proteína.
Buccutite™ Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit está diseñado para preparar conjugados de peroxidasa de horseradish (HRP) directamente a partir de proteínas, péptidos y otros ligandos que contienen un grupo amino libre. El HRP proporcionado en nuestro kit ha sido preactivado con nuestro enlazador patentado Buccutite™ FOL y puede usarse directamente para la conjugación. Todo el proceso solo requiere dos mezclas simples sin necesidad de purificación adicional. El HRP activado por FOL de Buccutite™ reacciona fácilmente con moléculas que contienen MTA de Buccutite™ en condiciones neutras extremadamente suaves sin necesidad de catalizador.
En comparación con SMCC de uso común y otras tecnologías similares, nuestro sistema de bioconjugación Buccutite™ es mucho más robusto y fácil de usar. Permite una conjugación más rápida y cuantitativa de biomoléculas con mayores eficiencias y rendimientos.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-5503 | Buccutite™ Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit | 2 labelings |
Importante, Solo para uso en investigación (RUO).
Componentes
| Componente A: Buccutite™ FOL-Activated HRP | 2 viales (liofilizado) |
| Componente B: Buccutite™ MTA | 2 viales (liofilizado) |
| Componente C: Reaction buffer | 1 vial (20 µL) |
Preparación de Soluciones de Trabajo
Solución de trabajo de anticuerpos
Para marcar 100 µg de anticuerpo (suponiendo que la concentración de anticuerpo objetivo sea de 1 mg/ml), mezcle 5 µL (5 % del volumen total de la reacción) de bufferde reacción (componente C) con 100 µL de la solución de anticuerpo objetivo.
Nota: Si tiene una concentración diferente, ajuste el volumen de anticuerpos en consecuencia para que ~100 µg de anticuerpos estén disponibles para su reacción de etiquetado.
Nota: El anticuerpo debe disolverse en buffer salina con fosfato (PBS) 1X, pH 7,2-7,4; Si el anticuerpo se disuelve en buffer de glicina, debe dializarse contra 1X PBS, pH 7.2-7.4, o usar ReadiUse™ 10KD Spin Filter (Cat. # 60502 de AAT Bioquest) para eliminar las aminas libres o las sales de amonio (como el sulfato de amonio). y acetato de amonio) que se utilizan ampliamente para la precipitación de anticuerpos.
Nota: Los anticuerpos impuros o los anticuerpos estabilizados con albúmina de suero bovino (BSA) o gelatina no estarán bien etiquetados.
Nota: La eficacia de la reacción del anticuerpo – Buccutite™ MTA se reduce significativamente si la concentración del anticuerpo es inferior a 1 mg/ml. Para un etiquetado óptimo, se recomienda el rango de concentración final de anticuerpos de 1-10 mg/mL.
Imagenes
Figura 1. El mecanismo del sistema de bioconjugación Buccutite™ utilizado para el kit de conjugación de anticuerpos contra la peroxidasa Buccutite™ (Cat# 5503).
Productos Relacionado
| Buccutite™ Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 25 ug Protein* |
| Buccutite™ Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 1 mg Protein* |
Referencias
Influence of the antibody-peroxidase coupling methods on the conjugate stability and on the methodologies for the preservation of the activity in time
Authors: Presentini R, Terrana B.
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Comparative activity of peroxidase-antibody conjugates with periodate and glutaraldehyde coupling according to an enzyme immunoassay
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Journal: Ann Biol Clin (Paris) (1995): 227
Peroxidase labelled monoclonal antibody against light chains of human cardiac myosin
Authors: Strakova Z, Barancik M, Lukacova D, Angyal R, Slosarcikova L, Horakova K.
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Highly efficient and simple methods for the preparation of peroxidase and active peroxidase-antibody conjugates for enzyme immunoassays
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Direct immunocytochemistry with a horseradish peroxidase-conjugated monoclonal antibody against substance P
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Comparison between peroxidase-conjugated antigen or antibody and peroxidase-anti-peroxidase complex in a postembedding procedure
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The unlabeled antibody enzyme method. Attempted use of peroxidase-conjugated antigen as the third layer in the technique
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Peroxidase and fluorescein isothiocyanate as antibody markers. A quantitative comparison of two peroxidase conjugates prepared with glutaraldehyde or periodate anda fluorescein conjugate
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Journal: J Histochem Cytochem (1976): 1017
Peroxidase-labeled antibody. A new method of conjugation
Authors: Nakane PK, Kawaoi A.
Journal: J Histochem Cytochem (1974): 1084
Application notes
A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
A New Protein Crosslinking Method for Labeling and Modifying Antibodies
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides
Annexin V
FAQ
Are there any alternatives to BrdU (Bromodeoxyuridine)?
Are there any alternatives to Cy5?
Are there any alternatives to indocyanine green (ICG)?
Can DAPI bind to RNA?
Can DAPI stain dead cells?
AssayWise
HRP Antibody Labeling Using Buccutite™ Crosslinking Technology
iFluor® 700 Dyes
Hydroxyl Radical Detection
Peroxidase Detection
Buccutite™ Conjugation Kits: Quick and Easy Antibody Labeling