Indicadores de Calcio

Indicadores de Calcio

Los indicadores de calcio son moléculas que exhiben un aumento de fluorescencia al unirse a Ca²⁺.

Indicadores de calcio fluorescentes

• Una extensa investigación, incluidas contribuciones fundamentales de los principales científicos de ION, ha permitido obtener una gran cantidad de excelentes sensores de Ca²⁺ compatibles con células. Estas moléculas son pequeños fluorocromos sintéticos que incorporan un resto de unión a Ca²⁺ con excelente selectividad por Ca²⁺ sobre otros cationes divalentes fisiológicamente relevantes, p. Mg²⁺. En condiciones en las que Ca²⁺ no está unido, la fluorescencia del sensor se apaga significativamente. Cuando se une Ca²⁺, se alivia la extinción y la fluorescencia del sensor aumenta drásticamente.

• Para algunos sensores, la unión de Ca²⁺ también produce un cambio en las propiedades espectrales del indicador. Por ejemplo, en el caso de Fura-2 (abajo), la unión de Ca²⁺ da como resultado un cambio del espectro de excitación del indicador desde un pico a 380 nm en la forma libre de Ca²⁺ a 340 nm en la forma unida a Ca²⁺. Estos indicadores se utilizan a menudo en modo “ratiométrico”, donde los cambios dependientes de la unión de Ca²⁺ en las propiedades espectrales proporcionan un medio para controlar aspectos como el fotoblanqueo del indicador y la longitud variable del camino óptico a través de las muestras.

Células HeLa cargadas con Fluo-4 en presencia (+) o ausencia (-) de 500 nM del ionóforo Ca²⁺ ionomicina.

• Los indicadores fluorescentes sensibles al calcio son compatibles con una amplia variedad de detectores, incluidos microscopios fluorescentes, lectores de placas, citómetros de flujo y sensores de estado sólido dopados con indicadores fluorescentes. Durante los últimos 30 años, los indicadores sensibles al Ca²⁺ han encontrado numerosos usos que van desde imágenes de alta resolución espacial de la actividad sináptica hasta mediciones de alto rendimiento de los aumentos provocados por la activación del receptor acoplado a proteína G (GPCR) en el Ca²⁺ intracelular para el descubrimiento de fármacos. .

Seleccionar un indicador de Calcio

Elegir el indicador correcto es crucial para el éxito de un experimento. Varios factores influyen en la decisión, incluidas las longitudes de onda de excitación y emisión del indicador, su afinidad por Ca²⁺, así como su carga, retención y localización celular. ION proporciona una variedad de los sensores y reactivos fluorescentes de Ca²⁺ más populares y útiles para ayudar a facilitar y potenciar su investigación.

Formatos y configuraciones de indicadores de Calcio.

Proporcionamos nuestros indicadores de calcio en varios formatos para adaptarse mejor a la aplicación prevista, incluidas formas permeables a la membrana, formas impermeables a la membrana e indicadores empaquetados con otros reactivos clave en kits de ensayo de calcio que están optimizados y validados para garantizar un rendimiento excelente. Obtenga más información sobre nuestros kits de ensayo de calcio.

• Indicadores de Calcio de longitud de onda única

Estas son las configuraciones más populares de indicadores fluorescentes sensibles al Ca²⁺. Poseen una variedad de afinidades de Ca²⁺ y la más amplia compatibilidad con instrumentos. Ofrecemos indicadores con propiedades espectrales que se adaptan bien a los microscopios de fluorescencia, lectores de placas y citómetros de flujo comunes que utilizan la óptica compatible con FITC más disponible (Fluo-2, Fluo-3 y Fluo-4), mientras que las fuentes de excitación y los filtros para YFP y Texas Red son compatibles con Fluo-gold e ICR-1, respectivamente.

Fluo-4

(EX 490 nm/Em 515 nm, Kd 355 nM) es el indicador de Ca²⁺ de longitud de onda única más utilizado y más confiable. Ha sido el indicador elegido para innumerables estudios de investigación básica y se ha utilizado para detectar decenas de millones de compuestos mediante detección de alto rendimiento (HTS) para descubrir herramientas farmacológicas y fármacos para GPCR y una amplia variedad de Ca²⁺. Canales iónicos permeables y transportadores. Fluo-4 es un indicador de calcio fluorescente de color verde. Permeable a la membrana. Una solución popular para ensayos de flujo de calcio de alto rendimiento y ensayos de GPCR. Ver Producto

Fluo-3

(EX 505 nm/Em 525 nm, Kd 390 nM) es un predecesor estructuralmente relacionado de Fluo-4 que tiene una afinidad ligeramente menor por Ca²⁺ y un espectro de excitación y emisión ligeramente desplazado al rojo. Durante casi 10 años fue el sensor de Ca²⁺ de longitud de onda única más utilizado. En la mayoría de los tipos de células, Fluo-4 y Fluo-2 muestran una carga superior en comparación con Fluo-3; sin embargo, algunos han informado que Fluo-3 es superior en ciertos casos. Fluo-3 AM es un indicador de calcio fluorescente de color verde. Permeable a la membrana. Ver Producto

Fluo-2

(EX 490 nm/Em 515 nm, Kd 290 nM) También conocido como Fluo-2 HA, Fluo-2 ofrece las mismas propiedades espectrales que Fluo-4 combinadas con una carga superior en muchos tipos de células, así como una afinidad de Ca²⁺ ligeramente mayor. La carga mejorada y el aumento de la afinidad pueden dar como resultado una sensibilidad superior. Fluo-2 AM es un indicador de calcio fluorescente de color verde. Permeable a la membrana. Mayor afinidad por el calcio que Fluo-4, con carga intracelular superior. Ver Producto

Fluo Gold

(EX 525 nm/Em 550 nm, Kd 400 nM) Fluo-Gold es un indicador de calcio intracelular fluorescente de oro. Diseñado para medir el flujo de calcio intracelular en aplicaciones de microscopía de fluorescencia y detección de alto rendimiento. La excitación y emisión desplazadas al rojo de Fluo-Gold permiten la multiplexación con células que expresan GFP u otros indicadores fluorescentes verdes y minimiza la interferencia de los compuestos fluorescentes verdes. Ver Producto

ICR-I

(EX 580 nm/Em 660 nm, Kd 480 nM) representa una nueva generación de indicadores fluorescentes de Ca²⁺ largamente buscados que emiten en la porción roja del espectro. Debido a las propiedades espectrales únicas del rojo verdadero de ICR-1, proporciona una penetración tisular más profunda y una reducción espectacular del fondo en tejidos que tienen alta autofluorescencia, en presencia de suero o compuestos fluorescentes. ICR-1 también es particularmente adecuado para su uso con las proteínas fluorescentes más comunes (por ejemplo, GFP/YFP), así como con muchas herramientas optogenéticas. A diferencia de algunos indicadores sensibles a Ca²⁺ emisores de rojo anteriores (por ejemplo, Rhod-2) que se concentran en las mitocondrias, ICR-1 disfruta de una localización predominantemente citoplasmática similar a la familia de indicadores Fluo, lo que lo hace ideal para la mayoría de las mediciones de Ca²⁺ intracelular. Ver Producto

BAPTA JF™549

Indicador de calcio con una estructura de colorante Janelia Fluor® que proporciona excelente brillo y fotoestabilidad. Útil para medir la dinámica rápida del calcio en neuronas y cardiomiocitos. Desplazado hacia el rojo para minimizar la autofluorescencia de fondo, ideal para su uso con imágenes multicolor y herramientas optogenéticas. Ver producto

• Indicadores ratiométricos de Calcio.

Estos indicadores son particularmente útiles cuando se desea una cuantificación más precisa de las concentraciones de Ca²⁺. Sin embargo, para utilizar los beneficios de las imágenes radiométricas, se requiere un instrumento (por ejemplo, un microscopio de fluorescencia) capaz de cambiar rápidamente la longitud de onda. En el caso de Fura-2 (abajo), se requieren una fuente de excitación y una óptica compatible con iluminación de 340 nm y 380 nm y contenedores de muestras compatibles con luz ultravioleta (UV) (por ejemplo, portaobjetos de microscopio).

Fura-2

(Ex 340/380 nm/505 nm, Kd 145 nM) es, con diferencia, el indicador fluorescente sensible a Ca²⁺ de excitación de longitud de onda dual más utilizado. Si bien la afinidad de Fura-2 por el Ca²⁺ es mayor que cualquiera de los indicadores de longitud de onda única descritos anteriormente, sigue siendo muy adecuado para medir cambios en el Ca²⁺ citoplasmático en la mayoría de las condiciones y al mismo tiempo disfrutar de los beneficios de la radiometría. Indicador ratiométrico de calcio verde (Ca²⁺), excitable por UV, permeable a la membrana. Ver Producto

Fura-2 LR

(Ex 340/380 nm/505 nm, Kd 145 nM) Con propiedades espectrales idénticas a Fura-2, también ofrecemos Fura-2 LR, una variante resistente a fugas. Fura-2 LR se retiene mejor en algunas líneas celulares y puede proporcionar resultados superiores para aplicaciones de imágenes de calcio donde se necesita retención de tinte intracelular.

Indicador ratiométrico de calcio (Ca²⁺), resistente a fugas y permeable a la membrana. Ver Producto

Ésteres del grupo acetoximetilo (AM), permeables a las células

Cuando se introdujo por primera vez, cargar los indicadores fluorescentes sensibles a Ca²⁺ con carga altamente negativa fue un gran desafío, ya que solo existían como sales impermeables a la membrana con carga altamente negativa. Sin embargo, el desarrollo de formas de estas moléculas donde las cargas negativas están enmascaradas por restos unidos a ésteres no polares (ésteres AM) permite que las moléculas ingresen a las células mediante difusión pasiva. Una ventaja adicional de la forma AM es que tampoco son fluorescentes y no se unen a Ca²⁺. Una vez dentro de la célula, las ubicuas enzimas esterasas intracelulares promueven la rápida hidrólisis de los ésteres de AM, dejando la forma activa y altamente polar del indicador atrapada dentro de la célula.

Reactivos para mejorar la carga, retención y supresión de fondo del indicador.

Aunque las formas AM de los indicadores fluorescentes de Ca²⁺ de ION cruzan fácilmente la membrana plasmática, existen otros factores que pueden afectar la capacidad de carga de los indicadores en las células. Debido a que las formas AM de los indicadores son bastante hidrófobas, es común usar el tensioactivo no iónico, Pluronic F-127, para mejorar su solubilidad en solución acuosa, mejorando así su carga en las células. Pluronic F-127 en las concentraciones empleadas para cargar indicadores en las células generalmente se tolera bien. Si bien Pluronic F-127 no es absolutamente esencial para cargar la mayoría de los indicadores fluorescentes de Ca²⁺ en las células, es muy recomendable.

Otro factor que puede afectar la carga celular y la localización intracelular es la presencia de proteínas de transporte capaces de transportar muchos indicadores fluorescentes sensibles a iones. En muchos tipos de células, la actividad de estos transportadores puede dar como resultado la compartimentación de los indicadores en compartimentos intracelulares, así como la extrusión de los indicadores fuera de la célula. Ambos procesos pueden reducir drásticamente los niveles de señal a fondo y, en algunos tipos de células (por ejemplo, células CHO), hacen que la carga adecuada de indicadores fluorescentes selectivos de Ca²⁺ sea casi imposible. Afortunadamente, los inhibidores de estas proteínas de transporte pueden ser un medio eficaz para mejorar la localización citoplasmática y la retención del indicador. ION ofrece una cómoda solución inhibidora ION-Pro 100X que se puede utilizar junto con cualquiera de nuestros indicadores fluorescentes sensibles a Ca²⁺.

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Productos	Excitación	Emisión	Kd
Fluo-2 AM Fluo-2 AM es un indicador de calcio fluorescente de color verde. Permeable a la membrana. Mayor afinidad por el calcio que Fluo-4, con carga intracelular superior.	490 nm	515 nm	290 nM
Fluo-3 AM Fluo-3 AM es un indicador de calcio fluorescente de color verde. Permeable a la membrana.	505 nm	525 nm	390 nM
Fura-2 LR AM Indicador ratiométrico de calcio (Ca²⁺), resistente a fugas y permeable a la membrana.	340 nm, 380 nm	505 nm	145 nM
Fura-2 AM Indicador ratiométrico de calcio verde (Ca²⁺), excitable por UV, permeable a la membrana.	340 nm, 380 nm	505 nm	145 nM
Fura-2 K⁺ Salt Indicador ratiométrico de calcio (Ca²⁺), impermeable a membrana.	340 nm, 380 nm	505 nm	145 nM
Fluo-2 K⁺ Salt Fluorescente verde, indicador de calcio (Ca²⁺), membrana impermeable. Mayor afinidad por Ca²⁺ que Fluo-4.	490 nm	515 nm	290 nM
Fluo-3 K⁺ Salt Fluorescente verde, indicador de calcio (Ca²⁺), membrana impermeable.	505 nm	525 nm	390 nM
Fura-2 LR K⁺ Salt Indicador ratiométrico de calcio (Ca²⁺), resistente a fugas, membrana impermeable.	340 nm, 380 nm	505 nm	145 nM
Fluo-4 AM Fluo-4 es un indicador de calcio fluorescente de color verde. Permeable a la membrana. Una solución popular para ensayos de flujo de calcio de alto rendimiento y ensayos de GPCR.	490 nm	515 nm	355 nM
ICR-1 AM Fluorescencia roja, indicador de calcio (Ca²⁺), permeable a la membrana. Óptimo para multiplexación e imágenes de tejidos. Duración de la fluorescencia y compatible con multifotón. Aplicaciones en Neuronas y Astrocitos Aplicaciones en cardiomiocitos de células madre Aplicaciones en células regulares ejemplificadas por las células CHO-K1 y HEK-293	580 mn	660 nm	480 nM
Fluo-Gold AM Fluo-Gold es un indicador de calcio intracelular fluorescente de oro (Ex/Em = 525/550 nm). Diseñado para medir el flujo de calcio intracelular en aplicaciones de microscopía de fluorescencia y detección de alto rendimiento. La excitación y emisión desplazadas al rojo de Fluo-Gold permiten la multiplexación con células que expresan GFP u otros indicadores fluorescentes verdes, y minimiza la interferencia de los compuestos fluorescentes verdes.	525 nm	550 nm	400 nM
Fluo-4 AM Ultrapure (>98%) Fluo-4 AM Ultrapure es nuestro grado de pureza más alto (>98%) disponible. Fluo-4 Ultrapure es el mismo indicador de calcio fluorescente verde en el que ha confiado durante décadas, con impurezas mínimas para brindarle la máxima confianza. Permeable a la membrana. La solución más popular para ensayos de flujo de calcio de alto rendimiento y ensayos de GPCR.	490 nm	515 nm	355 nM
Fluo-4 K⁺ Salt Fluorescente verde, indicador de calcio (Ca²⁺), membrana impermeable.	490 nm	515 nm	355 nM
ICR-1 K⁺ Salt Fluorescente rojo, indicador de calcio (Ca²⁺), membrana impermeable. Óptimo para multiplexación e imágenes de tejidos. Duración de la fluorescencia y compatible con multifotón. Aplicaciones en Neuronas y Astrocitos Aplicaciones en cardiomiocitos de células madre Aplicaciones en células regulares ejemplificadas por las células CHO-K1 y HEK-293	580 mn	660 nm	480 nM
BAPTA AM BAPTA AM es un quelante de calcio no fluorescente. Permeable a la membrana. Comúnmente utilizado para calibraciones de calcio intracelular.			250 nM