Agarosa Ni-NTA PureCube

Agarosa Ni-NTA

Resina de agarosa PureCube Ni-NTA, desarrollada para la purificación por afinidad de proteínas portadoras de etiqueta de polihistidina.

Descripción

Nuestras resinas de agarosa PureCube Ni-NTA son su mejor opción para purificar proteínas marcadas con His mediante FPLC, Batch spin o cromatografía en columna. Su tamaño varía desde los diámetros estándar del mercado de 40 µm y 100 µm hasta los 400 µm (XL).

Estas tres opciones brindan muchas posibilidades para elegir la resina de agarosa correcta para su propósito. Elija perlas más pequeñas para una mayor estabilidad mecánica y un mayor rendimiento de proteínas. Mientras tanto, las perlas más grandes proporcionan velocidades de flujo más rápidas y la posibilidad de trabajar con medios celulares muy viscosos.

Además, también puede obtener estas perlas preempaquetadas en una columna/cartucho o como perlas magnéticas.

CatalogoProductoPresentación
CU-31103PureCube 100 Ni-NTA Agarose, 30-40µm10 ml
CU-31105PureCube 100 Ni-NTA Agarose, 30-40µm50 ml
CU-31110PureCube 100 Ni-NTA Agarose, 30-40µm250 ml

Para Agarosa de 90-100µm, visite esta página.

Para Agarosa de 400µm, visite esta página.

Hojas de Datos / Protocolos

Caracteristicas

UsageSpecific binding and purification of 6x His tagged proteins
SpecificityAffinity to His tagged proteins
Binding capacity20 – 80 mg/ml, depending on bead size
Bead LigandNi-NTA
Bead size30-40 μm
Chelator stabilityStable in buffer containing 10 mM DTT and 1 mM EDTA
Filling quantityDelivered as a 50 % suspension
Required equipmentLysis Buffer
Wash Buffer
Elution Buffer
Ice bath
Refrigerated centrifuge for 50 mL tube (min 10,000 x g)
50 mL centrifuge tube
Micropipettor and Micropipetting tips
Disposable gravity flow columns with capped bottom outlet, 2 ml
pH meter
End-over-end shaker
SDS-PAGE buffers, reagents and equipment Optional: Western Blot reagents and equipment

Envio y Almacenamiento

Este producto se envia a temperatura ambiente. Almacenamiento de corto plazo: En buffer neutral. Almacenamiento a largo plazo: En buffer neutral con 20% etanol a 4°C.

Resultado de laboratorio

Alto rendimiento y pureza

Nuestro exclusivo proceso de producción produce una agarosa Ni-NTA que exhibe una capacidad de unión a proteínas > 20 % más alta que la de dos productos líderes de la competencia. La Figura 1 muestra la SDS-PAGE de GFP expresada en E. coli y purificada en columnas de gravedad con PureCube Ni-NTA Agarosa y la resina Ni-NTA de Competitor G y Competitor Q. El rendimiento de proteína en 4 eluciones (E1-E4, Cube ) fue de 80 mg/mL, en comparación con 65 y 48 mg/mL obtenidos con las resinas alternativas (E1-E4, Competidor G, Competidor Q). Se obtuvieron resultados similares (10-18 % más de capacidad de unión; datos no mostrados aquí) al comparar la purificación de JNK1 (quinasa, 48 kDa) en PureCube Ni-NTA y Ni-NTA de proveedores líderes.

Figura 1: Más de un 20 % más de rendimiento obtenido con PureCube Ni-NTA Agarose. SDS-PAGE de GFP expresada en E. coli y purificada en columnas de gravedad con agarosa PureCube Ni-NTA y resina Ni-NTA del competidor Q. Se obtuvo un rendimiento de proteína de 80 mg/mL con agarosa PureCube Ni-NTA (E1–E4, Cube ) en comparación con 65 y 48 mg/mL, respectivamente, con las resinas alternativas G y Q ampliamente utilizadas (E1–E4, Competitor G / Competitor Q).

Estabilidad superior de DTT y EDTA

La agarosa PureCube Ni-NTA es muy robusta en presencia de DTT y EDTA. En una prueba de estabilidad, la agarosa PureCube Ni-NTA se expuso a concentraciones crecientes de DTT o EDTA durante 1 h. Posteriormente, las resinas se usaron para purificar GFP-His expresada en E. coli en columnas de gravedad. La capacidad de unión de la resina disminuyó en presencia tanto de DTT como de EDTA, pero la velocidad de descomposición fue superficial. En presencia de DTT, la agarosa PureCube Ni-NTA perdió en promedio un 8 % de capacidad de unión con cada aumento en la concentración de DTT, lo que resultó en una disminución general del 22 % a 10 mM. Incluso con EDTA 1,5 mM, la resina aún exhibe el 54 % de su capacidad de unión máxima (Fig. 2).

Figura 2: NTA es robusto en presencia de agentes reductores y quelantes. GFP-His se purificó en columnas de gravedad que contenían agarosa PureCube Ni-NTA después de exponer la resina durante 1 h a 3 concentraciones de DTT o EDTA. NTA exhibe una tasa de descomposición poco profunda en la capacidad de unión.

Robusto contra la oxidación y regenerable

La agarosa PureCube Ni-NTA conserva su color y función después de la exposición a DTT de hasta 10 mM. La Figura 3 muestra una serie de fotos de la resina después de una exposición de 1 h a DTT 5 mM. A diferencia de otras resinas, la agarosa PureCube Ni-NTA no se volvió marrón (A). La resina aún podía unirse a GFP (B), con una capacidad de unión medida de 65 mg/mL (ver Fig. 2). Luego, la resina podría regenerarse quitando el NTA, volviendo la resina blanca (C) y recargándola con iones de níquel (D). El protocolo para regenerar PureCube Ni-NTA Agarosa se puede descargar.

Figura 3: PureCube Ni-NTA Agarose es resistente a la oxidación y regenerable. La agarosa PureCube Ni-NTA se expuso a DTT 5 mM durante 1 h (A). Después de demostrar que aún podía unirse a GFP (B), la resina se lavó, se decaparon (C) y se recargaron con Ni2+ (D) siguiendo el protocolo estándar de Cube (ver Protocolos y hojas de datos de Cube).
Video

VIDEOS

Video Guide – Column Chromatography
Video Guide – Batch Spin Chromatography
Video Guide – FPLC

FAQ

– ¿Cuáles son las razones de la unión no específica?

R: Aunque Co-NTA es la forma más pura de purificación de etiquetas His, algunas proteínas no deseadas aún pueden unirse a las perlas. Pero el lavado con NaOH después de la elución de la proteína de interés elimina las proteínas unidas inespecíficas de la resina.

– Quiero usar una alta concentración de EDTA y DTT. ¿Es posible utilizar Ni-NTA de Cube Biotech?

R: No, no se recomienda porque los iones de cobalto se reducen con DTT o se disuelven con EDTA. Si desea utilizar altas concentraciones de EDTA y DTT, debe utilizar nuestra resina Indigo.

-¿Cómo es la capacidad de flujos elevados?

R: Si se desean velocidades de flujo más altas, recomendamos usar perlas con diámetros más grandes.

Ofrecemos perlas de Co-NTA con diámetros medios de 40 µm, 100 µm y 400 µm (XL).

Con cada aumento de tamaño, las velocidades de flujo también aumentan debido al espacio proporcionalmente creciente entre las perlas. Sin embargo, la superficie de las perlas no aumenta a la misma velocidad que el diámetro (ley del cuadrado-cubo). Eso da como resultado cantidades decrecientes de proteína purificada por ml de perlas mientras aumenta el tamaño de las perlas.

Para 40 µm de perlas de 100 µm, ambos tenemos cantidades de purificación promedio de ~30 µg de proteína/mL de perlas. Con perlas de 400 µm (XL), esto disminuye a una cantidad no especificada.

Recomendamos leer el apartado correspondiente de la guía “Introducción a las matrices de agarosa” sobre este tema para obtener información más detallada.

Después de usar DTT mi resina cambió de color. ¿Cómo regenerarlo?

R: Seguramente la TDT ha dañado las perlas. Las perlas de Co-NTA solo tienen una tolerancia DTT limitada de aproximadamente 1 mM. Sin embargo, puede regenerarlos para recuperar su funcionalidad. Lea nuestro protocolo detallado para obtener más información al respecto.

Sin embargo, recomendamos usar productos Ni-INDIGO en su lugar. Trabajan con los mismos buffers y protocolos que los productos Ni-NTA pero tienen una tolerancia DTT de 20 mM.

Bibliografía

PURIFIED PROTEINYEARAUTHORBEAD SIZE
Glutamyl (aspartyl) specific aminopeptidase2016Stressler, T., Ewert, J., Merz, M., Funk, J., Claaßen, W., Lutz-Wahl, S., & Fischer, L. 40 µm
Histidine kinase domain of Ethylene Response Sensor 12016Hsieh, Y. L., Lu, C. F., Chiang, B. Y., Liao, S. C., Chen, R. P. Y., Lin, C. S., … & Yang, C. C. 40 µm
Diacylglycerol kinase2016Rues, R. B., Henrich, E., Boland, C., Caffrey, M., & Bernhard, F. 40 µm
Channelrhodopsin 22017Volkov, O., Kovalev, K., Polovinkin, V., Borshchevskiy, V., Bamann, C., Astashkin, R., & Büldt, G. 40 µm
PepA from Lactobacillus delbrueckii2017Ewert, J., Glück, C., Strasdeit, H., Fischer, L., & Stressler, T. 40 µm
Geobacillus sp. Manganese catalase2017Li, H. C., Yu, Q., Wang, H., Cao, X. Y., Ma, L., & Li, Z. Q.40 µm
HrpII2017Bauer W.S., Richardson K.A., Adams N.M., Ricks K.M., Gasperino D.J., Ghionea S.J., Rosen M., Nichols K.P., Weigl B.H., Haselton F.R., Wright D.W.,40 µm
Plasmodium falciparum 6- phosphogluconate dehydrogenase2018Haeussler, K., Fritz-Wolf, K., Reichmann, M., Rahlfs, S., & Becker, K. 40 µm
mCherry protein2018Wang, X., Liu, Y., Liu, J., & Chen, Z.40 µm
Arylsulfatase from Kluyveromyces lactis2018Stressler, T., Reichenberger, K., Glück, C., Leptihn, S., Pfannstiel, J., Swietalski, P., & Fischer, L. 40 µm
eIF3B2; eIF4A2; eIFiso4G1 and eIFiso4G22018Cho H.-Y., Lu M.-Y. J., Shih M-C.40 µm
flavin-dependent tryptophan 6-halogenase Thal2018Moritzer A.-C., Minges H., Prior T., Frese M., Seewald N., Niemann H.H.40 µm
CagL2019Buß M., Tegtmeyer., Schnieder J., Dong X., Li J., Springer T.A., Backert S., Niemann H.H.40 µm
PvG6PD2019Haessler K., Berneburg I., Jortzik E., Hahn J., Rahbari M., Schulz N., Preuss J., Zapol’skii V.A., Bode L., Pinkerton A.B., Kaufmann D.E., Rahlfs S., Becker K.,40 µm
Human serotonin transporter2019Worms D., Maertens B., Kubicek J., Subhramanyam U.K.T., Labahn J.40 µm
CagL variants2019Buß M., Tegtmeyer N., Schnieder J., Dong X., Li J., Springer T.A., Backert S., Niemann H.H.40 µm
AtEDS12019Voß M., Tölzer C., Bhandari D., Parker J., Niefind K.40 µm
PMMoV-CP2019Phatsaman T., Hongprayoon R., Wasee S.40 µm
Metal Binding Phages2019Matys S., Schönberger N., Lederer F., Pollmann K.40 µm
cysteine-less split intein2019Bhagawati M., Terhorst T., Füsser F., Hoffmann S., Pasch T., Pietrokovski S., Mootz H.40 µm
Several different proteins2020Casas M.G., Stargargt P., Marihofer J., Wiltschi B.40 µm
His-tagged proteins in inclusion bodies2020Lukas P.100 µm
Helirhodopsin 48C122020Kovalev K., Volkov D., Astashkin R., Alekseev A., Gushchin I., Haro-Moreno J.M., Chizhov I., Siletsky S., mamedov M., Rogachev A.V., Balandin T., Borshchevskiy V., Nopov A.N., Bourenkov G.P., Bamberg E., Rodriguez-Valera F., Büldt G., Gordeliy.,40 µm
MyBPC C2 and C0–22021Schwäbe F.V., Peter E.K., Taft M.H., Manstein D.J100 µm
BMP-7 CPLX2021Furlan A.G., Spanou C.E.S., Godwin A.R.F., Wohl A.P., Zimmermann L-M A., Imhof T., Koch M., Baldock C., Sengle G.40 µm
Multiple proteins2021Mayerthaler F., Feldberg A.-L., Alfermann J., Sun X., Steinchen W., Yang H., Mootz H.D.40 µm
emST2021Weihou G.40 µm
LEXSY2021Zabelskii D., Dmitrieva N., Volkov O., Shevchenko V., Kovalev K., Balandin T., Dmytro S., Astashkin R., Zinovev E., Alekseev A., Round E., Polovinkin V., Chizhov I., Rogachev A., Okhrimenko I., Borshchevskiy V., Chupin V., Büldt G., Yutin N., Bamberg E., Koonin E., Valentin G.40 µm
ApoE2021Xue T., Ji J., Sun Y., Huang X., Cai Z., Yang J., Guo W., Guo R., Cheng H., Sun X.40 µm
Interferon lambda2021Kolářová L., Zahnradník J., Huličiak M., Mikulecký P., Peleg Y., Shemesh M., Schreiber G., Schneider B.40 µm
NEDD8 and NAE1/UBA32021Zhou et al.40 µm
Bo3 oxidase2022Deutschmann S.100 µm
cBag and C902022Drwesh L., Heim B., Graf M., Kehr L., Hansen-Palmus L., Franz-Wachtel M., Macek B., Kalbacher H.40 µm
Cytoskeletal actin2022Greve J.N., Schwäbe F.V., Pokrant T., Faix J., Donato N.D., Taft M.H., Manstein D.J.40 µm
Cytoskeletal actin2022Veronica Teresa Ober40 µm
Several His-tagged proteins2022Bagavant H., Cizio K., Araszkiewicz A.M., Papinska J.A., Garman L., Li G., Pezant N., Drake W. Montgomery C.G., Deshmukh U.40 µm
atEDS1, PAD4 variants and vvPAD42022Voß M.40 µm
His-tagged carboxylases2022Artan M., Hartl M., Chen W., de Bono M.40 µm
TPI12022Liu G., Yang G., Duan S., Yuan P., Zhang S., Li F., Gao X-D., Nakanishi H.40 µm
2022Fatima S., Boggs D.G., Thompson P.J., Thielges M.C., Bridwell-Rabb J., Olshansky L.40 µm
2022Huang J., Zheng C., Luo R., Cao X., Mingjiang M., Qingquan Gu. Li F., Li J., Wu X., Yang Z., Shen X., Li X.40 µm
RPA2 proteins2022Oo J.A., Pálfi K., Warwick T., Wittig I., Prieto-Gracia C., Matkovic. V., Tomašković I., Ponce J.I., Teichmann T., Petruikov K., Haydar S., Maegdefessel L., Wu Z., Pham M.D., Kirshnan J., Baker A.H., Günther S., Ulrich D.D., Dikic I., Brandes R.P.
promiscuous methyltransferase (pMT)2022Chen X., Rehka T., Esque J., Zhang C., Shukal S., Lim C. C. Ong L., Smith D., André I.40 µm
OaGH5_5P2022Moye J., Schenk T., Hess S.40 µm
Human PKL2023Nain-Perez A., Nilsson O., Lulla A., Håversen L., Brear P., Lijenberg S., Hyvonen M., Borén J., Grøtli M.40 µm
KRas2023Walker G., Brown C., Ge X., Kumar S., Muzumdar M.D., Gupta K., Bhattacharyya M.40 µm
Look in Publications2023Chazan A., Das I., Fujiwara T., Murakoshi S., Rozenberg A., Molina-Márquez A., Sano F.K., Tanaka T., Gómez-Villegas P., Larom S., Pushkarev A., Malakar P., Hasegawa M., Tsukamoto Y., Ishuzuka T., Konno Masae, Nagata T., Mizuno Y., Katayama K., Abe-Yoshizumi R., Ruhman S., Inoue K., Kandori H., León R., Shihoya W., Yoshizawa Susumu, Sheves M., Neurki Osamu, Béjà O.,40 µm
Proton Channel HV12023Boytsov D., Brescia S., Chaves G., Koefler S., Hannesschlaeger C., Siligan C., Goessweiner-Mohr N., Musset B., Pohl P.40 µm

Descargo de responsabilidad:

Nuestros productos están destinados para investigación en aplicaciones de biología molecular. Estos productos no están destinados al diagnóstico, prevención o tratamiento de una enfermedad.

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