Kit de ensayo fluorimétrico de NADH Amplite® *Fluorescencia roja*. Este kit de ensayo proporciona un método conveniente para la detección sensible de NADH.
Descripción
El dinucleótido de nicotinamida y adenina (NAD+) y el fosfato de dinucleótido de nicotinamida y adenina (NADP+) son dos cofactores importantes que se encuentran en las células. NADH es la forma reducida de NAD+, y NAD+ es la forma oxidada de NADH. Forma NADP con la adición de un grupo fosfato a la posición 2′ del nucleótido de adenilo a través de un enlace éster. El NADP se utiliza en reacciones biológicas anabólicas, como la síntesis de ácidos grasos y ácidos nucleicos, que requieren NADPH como agente reductor. En los cloroplastos, el NADP es un agente oxidante importante en las reacciones preliminares de la fotosíntesis. El NADPH producido por la fotosíntesis se usa luego como poder reductor para las reacciones biosintéticas en el ciclo de Calvin de la fotosíntesis.
Los ensayos tradicionales de NAD/NADH y NADP/NADPH se realizan monitoreando la absorción de NADH o NADPH a 340 nm. Este método es de baja sensibilidad y alta interferencia ya que el ensayo se realiza en el rango UV que requiere una microplaca de cuarzo costosa.
Este kit de ensayo Amplite® NADH proporciona un método conveniente para la detección sensible de NADH. Las enzimas del sistema reconocen específicamente el NADH en una reacción de ciclo enzimático. La reacción del ciclo enzimático aumenta significativamente la sensibilidad de detección.
Nombre en Ingles: Amplite® Fluorimetric NADH Assay Kit *Red Fluorescence*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-15261 | Kit Amplite® de ensayo fluorimétrico de NADH, Fluorescencia Roja | 400 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 540 nm |
| Emisión | 590 nm |
| Cutoff | 570 nm |
| Placa recomendada | Negra sólida |
Componentes
| Componente A: NADH Recycling Enzyme Mix | 2 botellas (polvo liofilizado) |
| Componente B: NADH Buffer de ensayo | 1 botella (20 mL) |
| Componente C: NADH Estandar | 1 vial (142 µg) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución estándar de NADH (1 mM)
Agregue 200 µl de buffer PBS en el vial de estándar de NADH (componente C) para preparar una solución estándar de NADH de 1 mM (1 nmol/µl).
PREPARACION DE SOLUCION DE ESTANDAR
Para su conveniencia puede usar el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/15261
Tome la solución estándar de NADH y utilice el tampón PBS para generar una solución estándar de NADH de 100 µM (NS7). Luego realice diluciones en serie 1:3 para obtener las diluciones en serie restantes del estándar NADH (NS6 – NS1). Nota: La solución estándar de NADH diluida es inestable y debe usarse dentro de las primeras 4 horas.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 10 ml de buffer de ensayo Amplite™ NADH (componente B) a la botella de mezcla de enzimas de reciclaje de NADH (componente A) y mezcle bien. Nota: Esta solución de trabajo de NADH es suficiente para dos placas de 96 pocillos o cuatro de 384 pocillos. La solución de trabajo no es estable, utilícela inmediatamente y evite la exposición directa a la luz.
Imagen
Figura 1. La respuesta a la dosis de NADH se midió con el kit de ensayo de NADH fluorimétrico Amplite® en una placa negra sólida de 96 pocillos utilizando un lector de microplacas NOVOStar (BMG Labtech). RFU medido sobre Ex/Em = 540/590 nm.
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Bibliografía
Ver todas las 59 bibliografías: Citation Explorer
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