Calbryte™ 630 ha sido desarrollado para mejorar la carga de células x-Rhod-1 y la respuesta de calcio mientras mantiene la longitud de onda espectral de x-Rhod-1, haciéndolo compatible con el juego de filtros Texas Red®.
Descripción
La medición del calcio es fundamental para numerosas investigaciones biológicas. Las sondas fluorescentes que muestran respuestas espectrales al unirse al calcio han permitido a los cientificos investigar los cambios en las concentraciones de calcio libre intracelular mediante microscopía de fluorescencia, citometría de flujo, espectroscopía de fluorescencia y lectores de microplacas de fluorescencia. x-Rhod-1 se usa comúnmente como un indicador de calcio fluorescente rojo. Sin embargo, x-Rhod-1 es solo moderadamente fluorescente en células vivas tras la hidrólisis de esterasa y tiene respuestas de calcio celular muy pequeñas.
Calbryte™ 630 ha sido desarrollado para mejorar la carga de células x-Rhod-1 y la respuesta de calcio mientras mantiene la longitud de onda espectral de x-Rhod-1, haciéndolo compatible con el juego de filtros Texas Red®. En células CHO y HEK, Cal-630™ AM tiene una respuesta de calcio celular que es mucho más sensible que x-Rhod-1. Los espectros de Calbryte™ 630 están bien separados de los de FITC, Alexa Fluor® 488 y GFP, lo que la convierte en una sonda de calcio ideal para multiplexar ensayos intracelulares con líneas celulares GFP o anticuerpos marcados con FITC/Alexa Fluor® 488. Calbryte™ 630 es una nueva generación de indicadores fluorescentes rojos para la medición del calcio intracelular. Su relación señal/fondo muy mejorada y sus propiedades de retención intracelular hacen de Calbryte™ 630 AM el indicador fluorescente de color rojo intenso más sólido para evaluar los objetivos de GPCR y los canales de calcio, así como para detectar sus agonistas y antagonistas en células vivas.
Al igual que otras cargas de células de colorante AM, el éster Calbryte™ 630 AM no es fluorescente y una vez que ingresa a la célula, es hidrolizado por la esterasa intracelular y se activa. El indicador activado es una molécula polar que ya no es capaz de difundirse libremente a través de la membrana celular, esencialmente atrapada dentro de las células.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-20720 | Calbryte™ 630 AM | 2 x 50 ug |
| AAT-20721 | Calbryte™ 630 AM | 10 x 50 ug |
| AAT-20722 | Calbryte™ 630 AM | 1 mg |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento: Congelar a (< -15 °C), Minimizar la exposición a la luz.
Plataforma
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 600 nm |
| Emisión | 640 nm |
| Corte | 630 nm |
| Placa Recomendada | Paredes negras / fondo claro |
| Especificaciones Instrumento | Modo de lectura inferior / Manejo de líquidos programable |
Citómetro de flujo
| Laser de Excitación | 640 nm |
| Filtro de Emisión | 660/20 nm |
| Especificaciones instrumento | Canal APC |
Microscopio de Flourescencia
| Excitación | Texas Red |
| Emisión | Texas Red |
| Placa recomendada | Paredes negras / fondo claro |
Espectro
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Propiedades espectrales
| Excitación (nm) | 607 |
| Emisión (nm) | 624 |
PREPARACION DE SOLUCIONES DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución madre Calbryte™ 630 AM
Prepare una solución madre de 2 a 5 mM de Calbryte™ 630 AM en DMSO anhidro.
PREPARACION DE SOLUCIONES DE TRABAJO
Solución de trabajo Calbryte™ 630 AM
El día del experimento, disuelva Calbryte™ 630 AM en DMSO o descongele una alícuota de la solución madre indicadora a temperatura ambiente. Prepare una solución de trabajo de tinte de 2 a 20 µM en un buffer de su elección (p. ej., Hanks y Hepes) con Pluronic® F-127 al 0,04 %. Para la mayoría de las líneas celulares, se recomienda Calbryte™ 630 AM a una concentración final de 4 a 5 μM. La concentración exacta de indicadores necesarios para la carga de células debe determinarse empíricamente.
Nota: El detergente no iónico Pluronic® F-127 a veces se usa para aumentar la solubilidad acuosa de Calbryte™ 630 AM. Se puede comprar una variedad de soluciones Pluronic® F-127 de AAT Bioquest. Reprentante CIDSA Mexico.
Nota: Si sus células contienen transportadores de aniones orgánicos, se puede agregar probenecid (1-2 mM) a la solución de trabajo del colorante (la concentración final en el pocillo será de 0,5-1 mM) para reducir la fuga de los indicadores desesterificados. Se puede comprar una variedad de productos de probenecid ReadiUse™, que incluyen sal de sodio soluble en agua y solución estabilizada, en AAT Bioquest. Reprentante CIDSA Mexico.
Calculadora
Preparación de la solución de stock común
Volumen de DMSO necesario para reconstituir la masa específica de Calbryte™ 630 AM a la concentración dada. Tenga en cuenta que el volumen es solo para preparar la solución madre. Consulte el protocolo experimental de muestra para conocer los buffers experimentales/fisiológicos apropiados.
| 0.1 mg | 0.5 mg | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 80.982 µL | 404.911 µL | 809.822 µL | 4.049 mL | 8.098 mL |
| 5 mM | 16.196 µL | 80.982 µL | 161.964 µL | 809.822 µL | 1.62 mL |
| 10 mM | 8.098 µL | 40.491 µL | 80.982 µL | 404.911 µL | 809.822 µL |
Imagenes
Figura 1. La gráfica ilustra la relación señal-ruido (SNR) x 100 %. La respuesta a la dosis de ATP se midió en células CHO-K1 con Calbryte™ 630 AM. Se sembraron células CHO-K1 durante la noche a 50.000 células/100 µl/pocillo en una placa costar de 96 pocillos de pared negra/fondo transparente. Se añadieron 100 µl de 10 µg/ml de Calbryte™ 630 AM en tampón HH con probenecid y se incubaron durante 60 min a 37 °C. A continuación, la solución de carga de tinte se eliminó y se reemplazó con 200 µl de tampón HH/pocillo. FlexStation 3 añadió ATP (50 µl/pocillo) para alcanzar las concentraciones finales indicadas.
Figura 2. La liberación de calcio intracelular inducida por ATP se midió con Calbryte™ 630 AM. Las células se incubaron con colorante Calbryte™ 630 AM durante 30 min a 37 °C antes de añadir ATP 10 µM a las células. Se adquirió la línea de base y el resto de las células se analizaron después de la adición de ATP. La respuesta se midió a lo largo del tiempo. El análisis se realizó en el canal APC del citómetro de flujo NovoCyte™ 3000.
Productos Relacionados
| Name | Excitation (nm) | Emission (nm) | Quantum yield |
| Calbryte™ 520 AM | 493 | 515 | 0.751 |
| Calbryte™ 590 AM | 581 | 593 | – |
| Calbryte™-520L AM | 493 | 515 | 0.751 |
| Calbryte™-520XL AM | 493 | 515 | 0.751 |
| Cal-630™ AM | 609 | 626 | 0.371 |
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Bibliografía
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Referencias
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Aplication Notes
Calbryte™ 520, Calbryte™ 590 and Calbryte™ 630 Calcium Detection Reagents
Introducing Calbryte™ Series
Calbryte™ 520, Calbryte™ 590 and Calbryte™ 630 Calcium Detection Reagents
Introducing Calbryte™ Series
Calbryte™ 520, Calbryte™ 590 and Calbryte™ 630 Calcium Detection Reagents