Kit Cell Meter™ de detección de multiplexación apoptótica y necrótica

Cell Meter

El Kit Cell Meter™ de detección de multiplexación apoptótica y necrótica *Tres colores de fluorescencia*, en particular está diseñado para monitorear células apoptóticas, necróticas y sanas. 

Descripción

Kit Cell Meter™ de detección de multiplexación apoptótica y necrótica *Tres colores de fluorescencia*

Nuestros kits de ensayo Modelo Cell Meter™ son un conjunto de herramientas para monitorear la viabilidad celular. Hay una variedad de parámetros que se pueden utilizar. Este kit en particular está diseñado para monitorear células apoptóticas, necróticas y sanas.

La apoptosis se describe como un proceso activo y programado de desmantelamiento celular autónomo que evita provocar inflamación. En la apoptosis, la fosfatidilserina (PS) se transfiere a la membrana externa de la membrana plasmática. Como indicador universal de las etapas inicial/intermedia de la apoptosis celular, la aparición de fosfatidilserina en la superficie celular puede detectarse antes de que se observen los cambios morfológicos. El sensor PS utilizado en este kit tiene fluorescencia verde al unirse a la PS de la membrana.

La necrosis se ha caracterizado como muerte celular pasiva y accidental que resulta de perturbaciones ambientales con liberación incontrolada de contenidos celulares inflamatorios. La membrana impermeable pierde su integridad demostrado por la tinción del núcleo con 7-AAD  (Ex/Em = 546/647 nm), esto representa un enfoque sencillo para demostrar la apoptosis y la necrosis en etapa tardía. Además, este kit proporciona un colorante para marcar el  citoplasma de células vivas CytoCalcein™ Violet 450 (Ex/Em = 405/450 nm).

Este kit está optimizado para detectar apoptosis celular (verde), necrosis (verde y/o rojo) y células sanas (azul) con un citómetro de flujo y un microscopio de fluorescencia. 

Nombre en Inlges: Cell Meter™ Apoptotic and Necrotic Multiplexing Detection Kit *Triple Fluorescence Colors*

CatalogoProductoPresentación
AAT-22840Kit Cell Meter™ de detección de multiplexación apoptótica y necrótica *Colores de fluorescencia triple*100 pruebas

pdfSDSpdfProtocol

Importante: Solo para uso en investigación (RUO). Producto se entrega en refrigeración y se debe almacenar a <-15°C. Minimizar exposición a la luz.

Plataforma

Citómetro de flujo

Excitación405 nm, 488 nm laser
Emisión450/40 nm, 530/30 nm, 670/14 nm filter
Especificaciones instrumentoPacific Blue, FITC, canal PE-Cy5

Microscopio de Fluorescencia

ExcitaciónDAPI, FITC, filtro Texas Red
EmisiónDAPI, FITC, filtro Texas Red
Placa recomendadaPared negra, fondo claro

Componentes

Componente A: 100X Apopxin™ Green1 vial (200 µL)
Componente B: Buffer de ensayo1 botella (50 mL)
Componente C: 200X 7-AAD1 vial (100 µL)
Componente D: CytoCalcein™ Violet 4501 vial (polvo liofilizado)

PREPARACION DE SOLUCIONES DE STOCK

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

  1. Solución madre CytoCalcein™ Violet 450 (200X):
    Agregue 100 µL de DMSO en el vial de CytoCalcein™ Violet 450 (Componente D) para preparar una solución madre de CytoCalcein™ Violet 450 200X. Proteger de la luz.

Para una guia sobre la preparación de muestras de células, visite
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

Imagenes

Fig. 1

Figura 1. Las imágenes de fluorescencia que muestran células vivas (azul, teñidas con CytoCalcein™ Violet 450), apoptóticas (verde, teñidas con Apopxin™ Green) y necróticas (rojas, indicadas por tinción con 7-AAD) en células Jurkat inducidas por 1 µM de Estaurosporina durante 3 horas. Las imágenes de fluorescencia de las células se tomaron con un microscopio de fluorescencia Olympus a través del canal Violet, FITC y Texas Red respectivamente. Las imágenes individuales tomadas de cada canal de la misma población celular se fusionaron como se muestra arriba. Izquierda: células de control no inducidas; Derecha: tinción triple de células inducidas por estaurosporina.

Fig. 2

Figura 2. La detección de la actividad de unión de Apopxin™ Green a la fosfatidilserina en células Jurkat. Las células Jurkat se trataron sin (A. Blue) o con estaurosporina 1 μM (A. Red) en una incubadora de CO2 a 37oC, al 5 % durante 5 horas y luego se cargaron con Apopxin™ Green durante 30 minutos. La intensidad de fluorescencia de Apopxin™ Green se midió con un citómetro de flujo FACSCalibur (Becton Dickinson) utilizando el canal FL1.

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Bibliografía

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Referencias

Ver todas las 71 referencias: Citation Explorer

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Application Notes

Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides
Annexin V
Calcein
Human High Temperature Requirement Serine Protease A1 (HTRA1) Degrades Tau Protein Aggregates
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides

FAQ

What filters should I use for Apoptosis/Necrosis Assay Kit (Cat No. 22840)?
Are inflammasomes and caspase-1 related?
Do you offer any fluorimetric assays that measure caspase activation/activity in live cells using a flow cytometer?
Does pH and staining temperature affect Annexin V-Phosphatidylserine binding?
Does propidium iodide stain apoptotic cells?

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