Ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™

Este Kit es de Fluorescencia verde y utiliza nuestro exclusivo sensor de ROS para cuantificar ROS en células vivas.

Descripción

Las especies reactivas de oxígeno (ROS) son subproductos naturales del metabolismo normal del oxígeno y juegan un papel importante en la señalización celular. Sin embargo, los niveles de ROS pueden aumentar dramáticamente durante los estados relacionados con el estrés oxidativo, lo que resulta en un daño significativo a las estructuras celulares. Ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico.

El papel del estrés oxidativo en las enfermedades cardiovasculares, la diabetes, la osteoporosis, los accidentes cerebrovasculares, las enfermedades inflamatorias, las enfermedades neurodegenerativas y el cáncer ha sido bien establecido. A través de las mediciones de ROS, los investigadores pueden determinar cómo el estrés oxidativo modula diversas vías intracelulares.

El kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ utiliza nuestro exclusivo sensor de ROS, Amplite® ROS Red, para cuantificar ROS en células vivas. Amplite® ROS Red es permeable a las células y genera fluorescencia roja cuando reacciona con ROS. El ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ es fácil de realizar utilizando un formato optimizado de mezcla y lectura. Proporciona un ensayo fluorimétrico sensible de un solo paso para detectar ROS intracelulares en células vivas con 1-2 horas de incubación.

El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pocillos o de 384 pocillos y se puede adaptar fácilmente a la automatización sin un paso de separación. Su señal se puede leer fácilmente utilizando un lector de microplacas de fluorescencia o un microscopio de fluorescencia. Se puede utilizar para cuantificar las actividades de ROS o detectar inhibidores de ROS. 

Nombre en Ingles: Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit *Red Fluorescence*

CatalogoProductoPresentación
AAT-22901Ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™200 pruebas

Importante: Solo para uso en investigación (RUO).

Plataforma

Microscopio de Flourescencia

Excitación520 nm
Emisión605 nm
Placa recomendadaPared negra, fondo claro
Especificaciones instrumentoJuego de filtros Texas Red

Lector de Microplacas de Flourescencia

Excitación520 nm
Emisión605 nm
Cutoff590 nm
Placa recomendadaPared negra, fondo claro
Especificaciones instrumentoModo de lectura inferior

Componentes

Componente A: Amplite™ ROS Red1 vial
Componente B: Buffer de ensayo1 botella (20 mL)
Componente C: DMSO1 vial (200 µL)

PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

  1. Solución madre Amplite™ ROS Red (500X):
    Agregue 40 µL de DMSO (Componente C) en el vial de Amplite™ ROS Red (Componente A) y mezcle bien para preparar una solución madre de Amplite™ ROS Red 500X. Proteger de la luz. Nota: 20 µL de solución madre 500X Amplite™ ROS Red es suficiente para 1 placa. Nota: la porción no utilizada puede dividirse en alícuotas y almacenarse a < -20 °C durante más de un mes si los tubos se sellan herméticamente y se mantienen alejados de la luz. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO

Agregue 20 µL de solución madre 500X Amplite™ ROS Red en 10 mL de buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para preparar la solución de trabajo Amplite™ ROS Red. Nota: Esta solución de trabajo Amplite™ ROS Red es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.

Para obtener pautas sobre la preparación de muestras de células, visite

https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

Imagen

Figura 1. Detección de ROS en células Jurkat con el kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™. Se sembraron a 300.000 células  Jurkat el mismo día /(100 µl/pozo) en una placa Costar de 96 pozos de pared negra/fondo transparente. Se añadió la solución de carga del ensayo de ROS (100 µl/pozo) y se incubó a 37 °C con CO2 al 5 % durante 1 hora. Las células se trataron con 1 mM de H2O2 o sin H2O2 (control) durante 2 horas. La señal de fluorescencia se controló a Ex/Em = 520/605 nm (corte = 590 nm) con el modo de lectura inferior utilizando un lector de microplacas FlexStation (Molecular Devices).

Productos Alternativos

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Bibliografía

Ver todas las 25 bibliografias: Citation Explorer

Automatic flow injection based methodologies for determination of scavenging capacity against biologically relevant reactive species of oxygen and nitrogen
Authors: Magalhaes LM, Lucio M, Segundo MA, Reis S, Lima JL.
Journal: Talanta (2009): 1219

Diabetes and the impairment of reproductive function: possible role of mitochondria and reactive oxygen species
Authors: Amaral S, Oliveira PJ, Ramalho-Santos J.
Journal: Curr Diabetes Rev (2008): 46

Virion disruption by ozone-mediated reactive oxygen species
Authors: Murray BK, Ohmine S, Tomer DP, Jensen KJ, Johnson FB, Kirsi JJ, Robison RA, O’Neill KL.
Journal: J Virol Methods (2008): 74

The role of mitochondria in reactive oxygen species metabolism and signaling
Authors: Starkov AA., undefined
Journal: Ann N Y Acad Sci (2008): 37

Sensitive determination of reactive oxygen species by chemiluminescence methods and their application to biological samples and health foods
Authors: Wada M., undefined
Journal: Yakugaku Zasshi (2008): 1031

Reactive oxygen species and yeast apoptosis
Authors: Perrone GG, Tan SX, Dawes IW.
Journal: Biochim Biophys Acta (2008): 1354

Measurement of reactive oxygen species in cells and mitochondria
Authors: Armstrong JS, Whiteman M.
Journal: Methods Cell Biol (2007): 355

Role of reactive oxygen species in mediating hepatic ischemia-reperfusion injury and its therapeutic applications in liver transplantation
Authors: Zhang W, Wang M, Xie HY, Zhou L, Meng XQ, Shi J, Zheng S.
Journal: Transplant Proc (2007): 1332

Superoxide and derived reactive oxygen species in the regulation of hypoxia-inducible factors
Authors: Gorlach A, Kietzmann T.
Journal: Methods Enzymol (2007): 421

Reactive oxygen species and superoxide dismutases: role in joint diseases
Authors: Afonso V, Champy R, Mitrovic D, Collin P, Lomri A.
Journal: Joint Bone Spine (2007): 324

Referencias

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Authors: Magalhaes LM, Lucio M, Segundo MA, Reis S, Lima JL.
Journal: Talanta (2009): 1219

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Authors: Starkov AA., undefined
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Application Notes (en Ingles)

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