Este kit de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico es de florecencia naranja y proporciona un ensayo fluorimétrico sensible de un solo paso para detectar ROS intracelulares (especialmente superóxido y radical hidroxilo) en células vivas dentro de 1 hora de incubación.
Descripción
Kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ Fluorescencia naranja
Las especies reactivas de oxígeno (ROS) son subproductos naturales del metabolismo normal del oxígeno y juegan un papel importante en la señalización celular. La acumulación de ROS da como resultado un daño significativo a las estructuras celulares. El papel del estrés oxidativo en las enfermedades cardiovasculares, la diabetes, la osteoporosis, los accidentes cerebrovasculares, las enfermedades inflamatorias, una serie de enfermedades neurodegenerativas y el cáncer ha sido bien establecido.
La medición de ROS ayudará a determinar cómo el estrés oxidativo modula diversas vías intracelulares. El kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ utiliza nuestro sensor patentado ROS Brite™ 570 para cuantificar ROS en células vivas. El ROS Brite™ 570, permeable a las células y no fluorescente, exhibe una fuerte señal de fluorescencia al reaccionar con ROS. El sensor ROS Brite™ 570 está localizado en el citoplasma. La señal de fluorescencia del sensor ROS Brite™ 570 se puede medir mediante microscopía de fluorescencia, imágenes de alto contenido, fluorometría de microplaca o citometría de flujo.
El kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ proporciona un ensayo fluorimétrico sensible de un solo paso para detectar ROS intracelulares (especialmente superóxido y radical hidroxilo) en células vivas dentro de 1 hora de incubación.
El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pocillos o de 384 pocillos utilizando un lector de microplacas de fluorescencia o un microscopio de fluorescencia con filtro TRITC.
Nombre en Ingles: Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit *Orange Fluorescence*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-22902 | Ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ | 200 ensayos |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 540 nm |
| Emisión | 570 nm |
| Cutoff | 500 nm |
| Placa Recomendada | Paredes negras / fondo claro |
| Especificaciones Instrumento | Modo de lectura inferior |
Citómetro de flujo
| Excitación | Laser 488 nm o 532 nm |
| Emisión | Filtro 576/26 nm |
| Especificaciones Instrumento | Canal PE |
Microscopio de Flourescencia
| Excitación | Filtro TRITC |
| Emisión | Filtro TRITC |
| Especificaciones Instrumento | Paredes negras / fondo claro |
Componentes
| Componente A: ROS Brite™ 570 | 1 vial |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (20ml) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (100 µL) |
Preparación de Solución de Stock
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución madre ROS Brite™ 570 (500X)
Agregue 40 µL de DMSO (Componente C) en el vial de ROS Brite™ 570 (Componente A) y mezcle bien para preparar una solución madre de 500X ROS Brite™ 570. Proteger de la luz.
Tenga en cuenta que 20 µL de solución madre 500X ROS Brite™ 570 es suficiente para 1 placa. Para el citómetro de flujo, la solución madre 500X ROS Brite™ 570 se puede diluir en 5 carpetas a 100X en DMSO para mayor comodidad. Para el almacenamiento, selle los tubos herméticamente.
Preparación de Solución de Trabajo
Agregue 20 µl de solución madre 500X ROS Brite™ 570 a 10 ml de buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para preparar la solución de trabajo ROS Brite™ 570.
Nota: Esta solución de trabajo ROS Brite™ 570 es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.
Preparación de células
Para guias sobre la preparación de muestras de células, visite https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagenes
Figura 1. Imágenes de células HeLa teñidas con el kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ en una placa de 96 pocillos de pared negra/fondo transparente Costar. A: Células de control no tratadas. B: Células tratadas con hidroperóxido de terc-butilo (TBHP) 100 µM durante 30 minutos antes de la tinción.
Figura 2. Imágenes de células HeLa teñidas con el kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ en una placa de 96 pocillos de pared negra/fondo transparente Costar. A: Células de control no tratadas. B: Células tratadas con hidroperóxido de terc-butilo (TBHP) 100 µM durante 30 minutos antes de la tinción.
Figura 3. Detección de ROS en células Jurkat. Las células Jurkat se trataron sin (verde) o con hidroperóxido de terc-butilo (TBHP) 100 µM (rojo) durante 30 minutos a 37 °C y luego se cargaron con ROS Brite™ 570 en una incubadora con CO2 al 5 %, 37 °C durante 1 hora. Las intensidades de fluorescencia se midieron con un citómetro de flujo Acea utilizando el canal PE.
Formatos Alternativos
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Bibliografía
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Referencias
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FAQ
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Are there any calcium indicators that don’t require probenecid (PBC)?
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Intracellular Total ROS Activity Assays
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Selecting the right ROS probe
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