Colorante iFluor® 546 Styramide

El colorante iFluor® 546 Styramide es reemplazo superior para tiramida Alexa Fluor 546 u otros conjugados de tiramida fluorescente espectralmente similares o reactivos TSA.

Descripción

Colorante iFluor® 546 Styramide

El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados.

En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC.

El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.

En comparación con los reactivos de tiramida, los conjugados Styramide™ tienen la capacidad de marcar el objetivo con mayor eficiencia y, por lo tanto, generar una señal de fluorescencia significativamente mayor. Los conjugados de Styramide™ también permiten un consumo significativamente menor de anticuerpo primario en comparación con el método de conjugado directo estándar o la amplificación de tiramida con el mismo nivel de sensibilidad.

iFluor® 546 Styramide es un reemplazo superior para la tiramida Alexa Fluor 546 u otros conjugados de tiramida fluorescente espectralmente similares o reactivos TSA.

CatalogoProductoPresentación
AAT-45025iFluor® 546 Styramide100 slides

Importante, Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento a largo plazo: Congelar a  < -15 °C. Minimizar la exposición a la luz.

Plataforma

Microscopio de Flourescencia

ExcitaciónJuego de filtros Cy3/TRITC
EmisiónJuego de filtros Cy3/TRITC
Placa recomendada Pared negra/fondo transparente
Especificaciones instrumentoJuego de filtros Cy3/TRITC

Espectro

Abrir en Advanced Spectrum Viewer

Propiedades Espectrales

Factor de correción (260 nm)0.25
Factor de correción (280 nm)0.15
Coeficiente de extinción (cm -1 M -1)1000001
Excitación (nm)541
Emisión (nm)557
Rendimiento cuántico0.671
1 Buffer acuoso (pH 7.2)

Preparación de Soluciones de Stock

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

  1. Solución madre de Styramide™ (100X)
    Agregue 100 µL de DMSO en el vial de conjugado de Styramide™ marcado con colorante iFluor™ para preparar una solución madre de Styramide™ 100X. Nota: Haga alícuotas de un solo uso y almacene la solución madre 100X sin usar a 2-8 oC en un lugar oscuro y evite repetir los ciclos de congelación y descongelación.
  2. Solución madre de H2O2
    Agregue 10 µL de peróxido de hidrógeno al 3 % (no incluido) a 90 µL de ddH2O. Nota: Prepare la solución 100X H2O2 fresca el día de su uso.

Preparación de Soluciones de Trabajo

  1. Solución de trabajo de Styramide™ (1X)
    Cada 1 ml de buffer de reacción requiere 10 µl de solución madre de Styramide™ y 10 µl de solución madre de H2O2. Nota: Styramide™ proporcionado es suficiente para 100 pruebas en base a 100 µL de solución de trabajo de Styramide™ necesarios por cubreobjetos o por pocillo en una microplaca de 96 pocillos. Nota: La solución de trabajo Styramide™ debe usarse dentro de las 2 horas posteriores a la preparación y evitar la exposición directa a la luz.
  2. Solución de trabajo de anticuerpo secundario-HRP
    Realice la concentración adecuada de la solución de trabajo de anticuerpo secundario-HRP según las recomendaciones del fabricante.

Calculadora

Preparación de la solución de stock común

Volumen de DMSO necesario para reconstituir la masa específica de iFluor® 546 Styramide (Reemplazo superior para Alexa Fluor 546 tyramide) a la concentración dada. Tenga en cuenta que el volumen es solo para preparar la solución madre. Consulte el protocolo experimental de muestra para conocer los buffers experimentales/fisiológicos apropiados.

s.

0.1 mg0.5 mg1 mg5 mg10 mg
1 mM75.376 µL376.878 µL753.756 µL3.769 mL7.538 mL
5 mM15.075 µL75.376 µL150.751 µL753.756 µL1.508 mL
10 mM7.538 µL37.688 µL75.376 µL376.878 µL753.756 µL

Imagenes

Fig. 1

Figura 1. El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados .

En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC. El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.

Fig. 2

Figura 2. Los microtúbulos de células HeLa fijadas se marcaron con mAb de ratón anti-α tubulina seguido de IgG anti-ratón de cabra marcada con HRP (Cat No. 16728). La señal de fluorescencia se desarrolló con Alexa Fluor® 546 tyramide o iFluor® 546 styramide™ (Cat No. 45025) y se detectó con un juego de filtros TRITC/Cy3. iFluor® 546 styramide™ muestra una intensidad de fluorescencia significativamente mayor que Alexa Fluor® 546 tyramide en las mismas condiciones.

Fig. 3

Figura 3. Se marcó tejido pulmonar humano fijado con formalina e incluido en parafina (FFPE) con mAb de ratón anti-EpCAM seguido de IgG anti-ratón de cabra marcado con HRP (n.º de cat. 16728). La señal de fluorescencia se desarrolló utilizando iFluor® 546 styramide (Cat No. 45025) y se detectó con un juego de filtros TRITC/Cy3. Los núcleos (azul) se contratiñeron con DAPI (Cat No. 17507).

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NameExcitation (nm)Emission (nm)Extinction coefficient (cm -1 M -1)Quantum yieldCorrection Factor (260 nm)Correction Factor (280 nm)
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iFluor® 546 Tyramide54155710000010.6710.250.15
iFluor® 450 Styramide *Superior Replacement for Opal Polaris 480*4515024000010.8210.450.27
iFluor® 514 Styramide *Superior Replacement for Opal 540*5115277500010.8310.2650.116
iFluor® 532 Styramide5375609000010.6810.260.16
iFluor® 633 Styramide *Superior Replacement for Opal 650*64065425000010.2910.0620.044
iFluor® 440 Styramide4344804000010.6710.3520.229
iFluor® 460 Styramide468493800001~0.810.980.46
iFluor® 610 Styramide61062811000010.8510.320.49
iFluor® 660 Styramide66367825000010.2610.070.08
iFluor® 405 Styramide4034273700010.9110.480.77
iFluor® 546 maleimide54155710000010.6710.250.15
1 Aqueous buffer (pH 7.2), 2 PBS
iFluor® A7 SE
iFluor® 350 maleimide
iFluor® 488 maleimide
iFluor® 555 maleimide
iFluor® 647 maleimide
iFluor® 680 maleimide
iFluor® 750 maleimide
iFluor® 350 amine
iFluor® 405 amine
iFluor® 488 amine
iFluor® 555 amine
iFluor® 647 amine
iFluor® 680 amine
iFluor® 700 amine
iFluor® 710 amine
iFluor® 750 amine
iFluor® 350 hydrazide
iFluor® 488 hydrazide
iFluor® 555 hydrazide
iFluor® 647 hydrazide
iFluor® 680 hydrazide
iFluor® 700 hydrazide
iFluor® 750 hydrazide
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iFluor® 647 azide
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iFluor® 790 hydrazide
iFluor® 790 maleimide
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Application notes (en Ingles)

A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
A New Protein Crosslinking Method for Labeling and Modifying Antibodies
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides
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FAQ

Are there any alternatives to BrdU (Bromodeoxyuridine)?

Can DAPI bind to RNA?
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Are there any alternatives to indocyanine green (ICG)?
Can DAPI stain dead cells?

AssayWise (en Ingles)

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