iFluor® 555™ PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Mouse IgG

iFluor® 555 PSA es reemplazo superior para tiramida Alexa Fluor 555 u otros conjugados de tiramida fluorescente espectralmente similares o reactivos TSA.

Descripción

El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados.

En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC.

El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.

En comparación con los reactivos de tiramida, los conjugados Styramide™ tienen la capacidad de marcar el objetivo con mayor eficiencia y, por lo tanto, generar una señal de fluorescencia significativamente mayor. Los conjugados de Styramide™ también permiten un consumo significativamente menor de anticuerpo primario en comparación con el método de conjugado directo estándar o la amplificación de tiramida con el mismo nivel de sensibilidad. iFluor® 555 PSA kit es un reemplazo superior para la tiramida Alexa Fluor 555 u otros conjugados de tiramida fluorescente espectralmente similares o reactivos TSA.

CatalogoProductoPresentación
AAT-45270iFluor 555™ PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Mouse IgG100 pruebas

Importante, Solo para uso en investigación (RUO).

Plataforma

Microscopio de Flourescencia

ExcitaciónJuego de filtros Cy3/TRITC
EmisiónJuego de filtros Cy3/TRITC
Placa recomendada Pared negra/fondo transparente
Especificaciones instrumentoJuego de filtros Cy3/TRITC

Componentes

Componente A: iFluor™ 555 Styramide™ conjugate1 vial (polvo liofilizado)
Componente B: Styramide™ Reaction Buffer1 botella (10 mL)
Componente C: DMSO1 vial (100 µL)
Componente D: Secondary Antibody-HRP (Goat Anti-Mouse IgG-HRP)1 vial (100 µL) (100X)
Componente E: Stabilized 3% Hydrogen Peroxide (H2O2)1 botella (11 mL)

Espectro

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Propiedades Espectrales

Factor de corrección (260 nm)0.23
Factor de corrección (280 nm)0.14
Coeficiente de extinción (cm -1 M -1)1000001
Excitación (nm)557
Emisión (nm)570
Rendimiento cuántico0.641
1 Buffer acuoso (pH 7.2)

Preparación de Soluciones de Stock

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

  1. Solución madre de Styramide™ (100X)
    Agregue 100 µL de DMSO en el vial de  iFluor™ 555-labeled Styramide™ conjugate (Componente A)  para preparar una solución madre de Styramide™ 100X. Nota: Haga alícuotas de un solo uso y almacene la solución madre 100X sin usar a 2-8 oC en un lugar oscuro y evite repetir los ciclos de congelación y descongelación.
  2. Solución de H2O2 (100X)
    Agregue 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3% (Componente E) a 9 mL de ddH2O. Nota: Prepare la solución 100X H2O2 fresca el día de su uso.

Preparación de Soluciones de Trabajo

  1. Solución de trabajo de Styramide™ (1X)
    Cada 1 ml de buffer de reacción requiere 10 µl de solución madre de Styramide™ y 10 µl de solución madre de H2O2. Nota: El Styramide™ proporcionado es suficiente para 100 pruebas en base a 100 µL de solución de trabajo de Styramide™ necesarios por cubreobjetos o por pocillo en una microplaca de 96 pocillos. Nota: La solución de trabajo Styramide™ debe usarse dentro de las 2 horas posteriores a la preparación y evitar la exposición directa a la luz.

2. Solución de trabajo de anticuerpo secundario-HRP
Diluya la solución madre de anticuerpo secundario-HRP 100X 1:100 en PBS con BSA al 1%.
Nota: El anticuerpo secundario-HRP provisto en este kit es suficiente para 100 pruebas basadas en 100 µL de solución de trabajo de HRP por cubreobjetos o por pocillo en una microplaca de 96 pocillos.

Imagenes

Fig. 1

Figura 1. El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados . En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC. El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.

Fig. 2

Figura 2. IHC de fluorescencia para la detección de HER2/ErbB2 en tejido de cáncer de mama fijado en formaldehído e incluido en parafina. Se incubaron secciones de tejido positivas para Her2/Neu humano (c-erbB-2) con mAb de conejo HER2/ErbB2 diluido 1:5000 (arriba) o 1:250 (abajo), respectivamente. A continuación, el tejido se incubó con anticuerpo secundario IgG anti-conejo de cabra marcado con HRP seguido de iFluor® 555 Styramide™ (arriba) o Alexa Fluor® 555 tiramida (abajo), respectivamente. En comparación con la amplificación de tiramida, el aumento de la sensibilidad de la amplificación de súper señal de Styramide™ permite el uso de menos anticuerpos primarios. Se puede lograr el mismo nivel de sensibilidad con una reducción significativa en la cantidad de anticuerpo diana utilizado (10-50 veces). El núcleo de la célula se cotiñó con DAPI (Cat No. 17507).

Fig. 3

Figura 3. Inmunotinción secuencial de adenocarcinoma de pulmón humano incluido en parafina y fijado con formaldehído utilizando dos kits de imágenes iFluor® PSA™. Las EpCam se marcaron con anticuerpos anti-EpCam de conejo y el iFluor® 488 PSA™ Imaging Kit con IgG anti-conejo de cabra, seguido de lavado. La pan-queratina se marcó con anticuerpos anti-pan-queratina de ratón y el iFluor® 555 PSA™ Imaging Kit con IgG anti-ratón de cabra. Los núcleos se marcaron con DAPI. Las imágenes fueron adquiridas en un microscopio confocal.

Fig. 4

Figura 4. IHC de fluorescencia de fijado en formaldehído, incluido en parafina utilizando métodos amplificados PSA ™ y TSA. Las secciones de tejido positivas de adenocarcinoma de pulmón humano se tiñeron con anticuerpo anti-EpCam de ratón y luego se siguieron con el método PSA™ utilizando el kit de imágenes iFluor 555™ PSA™ con Goat Anti-Mouse IgG (n.° de cat. 45270) o el método TSA con Alexa Fluor® 555 tyramide respectivamente . Las imágenes mostraron que la superamplificación de la señal de PSA™ puede aumentar la sensibilidad de la IHC de fluorescencia sobre el método Alexa Fluor® 555 TSA. El núcleo celular se tiñó con Nuclear Blue™ DCS1 (Cat#17548).

Productos Relacionados

NameExcitation (nm)Emission (nm)Extinction coefficient (cm -1 M -1)Quantum yieldCorrection Factor (260 nm)Correction Factor (280 nm)
iFluor® 555 PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Rabbit IgG55757010000010.6410.230.14
iFluor 350™ PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Mouse IgG3454502000010.9510.830.23
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iFluor 594™ PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Mouse IgG58860418000010.5310.050.04
iFluor 647™ PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Mouse IgG65667025000010.2510.030.03
1 Aqueous buffer (pH 7.2)
iFluor® A7 SE
iFluor® 350 maleimide
iFluor® 488 maleimide
iFluor® 555 maleimide
iFluor® 647 maleimide
iFluor® 680 maleimide
iFluor® 700 maleimide
iFluor® 750 maleimide
iFluor® 350 amine
iFluor® 405 amine
iFluor® 488 amine
iFluor® 555 amine
iFluor® 647 amine
iFluor® 660 amine
iFluor® 680 amine
iFluor® 700 amine
iFluor® 710 amine
iFluor® 750 amine
iFluor® 350 hydrazide
iFluor® 488 hydrazide
iFluor® 555 hydrazide
iFluor® 647 hydrazide
iFluor® 680 hydrazide
iFluor® 700 hydrazide
iFluor® 750 hydrazide
iFluor® 647 alkyne
iFluor® 647 azide
iFluor® 790 acid
iFluor® 790 amine
iFluor® 790 hydrazide
iFluor® 790 maleimide
iFluor® 488 tyramide
iFluor® 350 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 405 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 488 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 514 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 532 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 555 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 594 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 633 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 647 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 680 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 700 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 750 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 790 goat anti-mouse IgG (H+L)
iFluor® 350 goat anti-mouse IgG (H+L) *Cross Adsorbed*

Application notes

A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
A New Protein Crosslinking Method for Labeling and Modifying Antibodies
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides
Annexin V

FAQ

Are there any alternatives to BrdU (Bromodeoxyuridine)?
Are there any alternatives to Cy5?
Are there any alternatives to indocyanine green (ICG)?
Can DAPI bind to RNA?
Can DAPI stain dead cells?

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HRP Antibody Labeling Using Buccutite™ Crosslinking Technology
iFluor® 700 Dyes
Hydroxyl Radical Detection
Peroxidase Detection
Buccutite™ Conjugation Kits: Quick and Easy Antibody Labeling