iFluor® 750 Styramide

iFluor® 750 Styramide es un reemplazo ideal de Alexa Fluor 750 u otros conjugados de tiramida fluorescente espectralmente similares o reactivos TSA.

Descripción

El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados.

En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC.

El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.

En comparación con los reactivos de tiramida, los conjugados Styramide™ tienen la capacidad de marcar el objetivo con mayor eficiencia y, por lo tanto, generar una señal de fluorescencia significativamente mayor. Los conjugados de Styramide™ también permiten un consumo significativamente menor de anticuerpo primario en comparación con el método de conjugado directo estándar o la amplificación de tiramida con el mismo nivel de sensibilidad. iFluor® 750 Styramide es un reemplazo superior para la tiramida Alexa Fluor 750 u otros conjugados de tiramida fluorescente espectralmente similares o reactivos TSA.

Catalogo	Producto	Presentación
AAT-45065	iFluor® 750 Styramide	100 slides

SDS

Protocol

Importante, Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento a largo plazo: Congelar a < -15 °C. Minimizar la exposición a la luz.

Plataforma

Microscopio de Flourescencia

Excitación	Juego de filtros Cy7
Emisión	Juego de filtros Cy7
Placa recomendada	Pared negra/fondo transparente
Especificaciones instrumento	Juego de filtros Cy7

Espectro

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Propiedades Espectrales

Factor de corrección (260 nm)	0.044
Factor de corrección (280 nm)	0.039
Factor de corrección (565 nm)	0.0250
Factor de corrección (650 nm)	0.1413
Coeficiente de extinción (cm ^-1 M ^-1)	275000¹
Excitación (nm)	757
Emisión (nm)	779
Rendimiento cuántico	0.12¹

¹ Buffer acuoso (pH 7.2)

Preparación de Soluciones de Stock

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

Solución madre de Styramide™ (100X)
Agregue 100 µL de DMSO en el vial de conjugado de Styramide™ marcado con colorante iFluor™ para preparar una solución madre de Styramide™ 100X. Nota: Haga alícuotas de un solo uso y almacene la solución madre 100X sin usar a 2-8 oC en un lugar oscuro y evite repetir los ciclos de congelación y descongelación.
Solución madre de H₂O₂
Agregue 10 µL de peróxido de hidrógeno al 3 % (no incluido) a 90 µL de ddH₂O. Nota: Prepare la solución 100X H₂O₂ fresca el día de su uso.

Preparación de Soluciones de Trabajo

Solución de trabajo de Styramide™ (1X)
Cada 1 ml de buffer de reacción requiere 10 µl de solución madre de Styramide™ y 10 µl de solución madre de H2O2. Nota: Styramide™ proporcionado es suficiente para 100 pruebas en base a 100 µL de solución de trabajo de Styramide™ necesarios por cubreobjetos o por pocillo en una microplaca de 96 pocillos. Nota: La solución de trabajo Styramide™ debe usarse dentro de las 2 horas posteriores a la preparación y evitar la exposición directa a la luz.
Solución de trabajo de anticuerpo secundario-HRP
Realice la concentración adecuada de la solución de trabajo de anticuerpo secundario-HRP según las recomendaciones del fabricante.

Imagenes

Figura 1. IHC de fluorescencia de tejido positivo para adenocarcinoma de pulmón humano incluido en parafina y fijado con formaldehído usando métodos amplificados de PSA ™ y TSA. Secciones de tejido positivas para adenocarcinoma de pulmón humano se tiñeron con anticuerpo anti-EpCAM de ratón o IgG de ratón y luego se incubaron con anticuerpo secundario IgG de cabra anti-ratón marcado con HRP seguido de iFluor® 750 Styramide™ (Cat#45065) o Alexa Fluor® 750 tinción de tiramida respectivamente. Las imágenes mostraron que la superamplificación de señal iFluor® 750 PSA™ puede aumentar la sensibilidad de la IHC de fluorescencia sobre el método Alexa Fluor® 750 TSA.

Figura 2. El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados . En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC. El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.

Figura 3. Imágenes de fluorescencia de células HeLa marcadas con anticuerpo primario anti-tubulina de ratón. A continuación, las células se tiñeron con un anticuerpo secundario IgG anti-ratón de cabra marcado con HRP seguido de iFluor® 750 Styramide™ (izquierda) o Alexa Fluor® 750 tiramida (derecha), respectivamente. Las imágenes de fluorescencia se tomaron utilizando el conjunto de filtros Cy7. iFluor® 750 Styramide™ muestra una intensidad de fluorescencia significativamente mayor que la tiramida Alexa Fluor® 750 si se encuentra bajo el mismo tiempo de exposición.

Productos Relacionados

Name	Excitation (nm)	Emission (nm)	Extinction coefficient (cm ^-1 M ^-1)	Quantum yield	Correction Factor (260 nm)	Correction Factor (280 nm)
iFluor® 750 maleimide	757	779	275000¹	0.12¹	0.044	0.039
iFluor® 750 amine	757	779	275000¹	0.12¹	0.044	0.039
iFluor® 750 hydrazide	757	779	275000¹	0.12¹	0.044	0.039
iFluor® 350 Styramide Superior Replacement for Alexa Fluor 350 tyramide	345	450	20000¹	0.95¹	0.83	0.23
iFluor® 488 Styramide Superior Replacement for Alexa Fluor 488 tyramide and Opal 520	491	516	75000¹	0.9¹	0.21	0.11
iFluor® 546 Styramide Superior Replacement for Alexa Fluor 546 tyramide	541	557	100000¹	0.67¹	0.25	0.15
iFluor® 555 Styramide Superior Replacement for Alexa Fluor 555 tyramide and Opal 570	557	570	100000¹	0.64¹	0.23	0.14
iFluor® 568 Styramide Superior Replacement for Alexa Fluor 568 tyramide	568	587	100000¹	0.57¹	0.34	0.15
iFluor® 594 Styramide Superior Replacement for Alexa Fluor 594 tyramide	588	604	180000¹	0.53¹	0.05	0.04
iFluor® 647 Styramide Superior Replacement for Alexa Fluor 647 tyramide	656	670	250000¹	0.25¹	0.03	0.03
iFluor® 680 Styramide Superior Replacement for Alexa Fluor 680 tyramide and Opal 690	684	701	220000¹	0.23¹	0.097	0.094
iFluor® 700 Styramide Superior Replacement for Alexa Fluor 700 tyramide	690	713	220000¹	0.23¹	0.09	0.04
iFluor® 790 Styramide Superior Replacement for Alexa Fluor 790 tyramide	787	812	250000¹	0.13¹	0.1	0.09
iFluor® 450 Styramide Superior Replacement for Opal Polaris 480	451	502	40000¹	0.82¹	0.45	0.27
iFluor® 514 Styramide Superior Replacement for Opal 540	511	527	75000¹	0.83¹	0.265	0.116
iFluor® 532 Styramide	537	560	90000¹	0.68¹	0.26	0.16
iFluor® 633 Styramide Superior Replacement for Opal 650	640	654	250000¹	0.29¹	0.062	0.044
iFluor® 440 Styramide	434	480	40000¹	0.67¹	0.352	0.229
iFluor® 460 Styramide	468	493	80000¹	~0.8¹	0.98	0.46
iFluor® 610 Styramide	610	628	110000¹	0.85¹	0.32	0.49
iFluor® 660 Styramide	663	678	250000¹	0.26¹	0.07	0.08
iFluor® 405 Styramide	403	427	37000¹	0.91¹	0.48	0.77