El kit de detección de radicales hidroxilo mitocondriales Cell Meter™ de AAT Bioquest está optimizado para detectar radicales hidroxilo en las mitocondrias.
Descripción
Kit de detección de radicales hidroxilo mitocondriales Cell Meter™ fluorescencia roja
La detección de radicales hidroxilo intracelulares es de vital importancia para comprender la regulación redox celular adecuada y el impacto de su desregulación en diversas patologías. El radical hidroxilo (‘OH) es una de las especies reactivas de oxígeno (ROS) altamente reactiva con otras moléculas para lograr la estabilidad.
En general, el radical hidroxilo se considera un subproducto nocivo del metabolismo oxidativo, que puede causar daños moleculares en el sistema vivo. Muestra una vida útil promedio de 10 a 9 nanosegundos y puede reaccionar con casi todas las biomoléculas, como el ADN nuclear, el ADN mitocondrial, las proteínas y los lípidos de membrana.
El kit de detección de radicales hidroxilo mitocondriales Cell Meter™ de AAT Bioquest está optimizado para detectar radicales hidroxilo en las mitocondrias. MitoROS™ OH580 es una sonda permeable de células vivas y puede dirigirse rápida y selectivamente al radical hidroxilo en células vivas. Genera fluorescencia roja cuando reacciona con ‘OH y se puede leer fácilmente.
Este kit Cell Meter™ proporciona una sonda fluorimétrica sensible para detectar OH’ en células vivas con una hora de incubación. Este kit se puede utilizar para lectores de microplacas de fluorescencia y aplicaciones de microscopía de fluorescencia.
Nombre en Ingles: Cell Meter™ Mitochondrial Hydroxyl Radical Detection Kit *Red Fluorescence*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-16055 | Kit de detección de radicales hidroxilo mitocondriales Cell Meter™ fluorescencia roja | 200 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Microscopio de Flourescencia
| Excitación | Juego de filtros Cy3/TRITC |
| Emisión | Juego de filtros Cy3/TRITC |
| Placa recomendada | Pared negra, fondo claro |
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 540 nm |
| Emisión | 590 nm |
| Cutoff | 570 nm |
| Placa Recomemdada | Pared negra/fondo claro |
| Especificaciones Instrumento | Modo lectura inferior |
Componentes
| Componente A: MitoROS™ OH580 | 1 vial |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (50 mL) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (100 µL) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución madre de MitoROS™ OH580 (500X):
Agregue 50 µL de DMSO (Componente C) en el vial de MitoROS™ OH580 (Componente A) y mézclelos bien. Nota: 25 uL de solución madre es suficiente para 1 placa. Nota: La porción no utilizada puede dividirse en alícuotas y almacenarse a ≤ -20 ºC durante más de un mes si los tubos están sellados herméticamente y protegidos de la luz. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 25 μL de solución madre de MitoROS™ OH580 reconstituida con DMSO 500X en 10 mL de buffer de ensayo (componente B). Mezclar bien. Nota: Esta solución de trabajo es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.
Para obtener guia sobre la preparación de muestras de células, visite
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Espectro
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Propiedades Espectrales
| Excitación (nm) | 576 |
| Emisión (nm) | 598 |
Imagenes
Figura 1. Imágenes de fluorescencia de la medición de radicales hidroxilo en células HeLa usando MitoROS™ OH580 (Cat#16055). Las células HeLa se incubaron con la solución de trabajo MitoROS™ OH580 a 37 °C durante 1 hora y luego se lavaron una vez con HHBS. Reacción de Fenton: A continuación, las células se trataron con CuCl2 10 µM y H2O2 100 µM en buffer 1X HBSS a 37 °C durante 1 hora. Control: las células HeLa se mantuvieron en buffer 1X HBSS sin tratamiento.
Después de lavar 3 veces con HHBS, las células HeLa se midieron usando un microscopio de fluorescencia con un conjunto de filtros TRITC (rojo). Los núcleos celulares se tiñeron con Hoechst 33342 (Cat#17530, azul).
Figura 2. Detección de radicales hidroxilo intracelulares en células RAW 264.7 usando MitoROS™OH580 (Cat#16055). Las células se incubaron con la solución de trabajo MitoROS™ OH580 a 37 ºC durante 1 hora y luego se lavaron una vez con HHBS. A continuación, las células se incubaron sin o con PMA (forbol 12-miristato 13-acetato, 10 a 500 ng/mL) en medio de cultivo a 37ºC durante 4 horas. Después de lavar 3 veces con HHBS, las células HeLa se midieron usando un microscopio de fluorescencia con un juego de filtros TRITC.
Figura 3. El NAC antioxidante invierte parcial y significativamente el aumento de la fosforilación de ERK1/2 mediado por H2O2 en células FLS1. (A) Las células se cultivaron (Aa) sin o (Ab) con H2O2 (500 μM) durante 24 h, y luego se visualizó con fluorescencia la producción de OH∙ en las células. La detección de radicales hidroxilo en células FLS1 se realizó utilizando un kit de detección de radicales hidroxilo mitocondriales (OH∙) Cell Meter™ bajo un microscopio de fluorescencia.
Los núcleos se contrateñeron con Hoechst 33342 (azul). Barra de escala, 50 μm. Fuente: El estrés oxidativo inducido por peróxido de hidrógeno promueve la expresión de ARNm de CXCL15/Lungkine de manera dependiente de MEK/ERK en sinoviocitos similares a fibroblastos derivados de la articulación temporomandibular de ratón por Asanuma, Kanna et.al., Journal of Oral Biosciences, marzo de 2023
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Bibliografía
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Referencias
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