ReadiUse™ Stayright™ Purple *HRP Chromogen premezclado con peróxido de hidrógeno* . Stayright™ Purple proporciona un método rápido y sencillo para desarrollar una mancha púrpura intensa y limpia en presencia de HRP con alta sensibilidad como DAB.
Descripción
La 3,3′-diaminobencidina (DAB) se ha utilizado como el cromógeno IHC más utilizado porque es económico y sensible para aplicaciones de rutina. Sin embargo, se ha demostrado que DAB es mutagénico y peligroso para los trabajadores de laboratorio y el medio ambiente. Para abordar este problema, AAT Bioquest ha desarrollado este novedoso Stayright™ Purple como un cromógeno IHC significativamente más seguro que DAB. Además, Stayright™ Purple proporciona un método rápido y sencillo para desarrollar una mancha púrpura intensa y limpia en presencia de HRP con alta sensibilidad como DAB. El sustrato Stayright™ Purple HRP listo para usar, no muestra efectos mutagénicos con una citotoxicidad mínima.
El sustrato de peroxidasa púrpura (HRP) ReadiUse™ Stayright™ es adecuado para su uso en métodos de tinción de inmunohistoquímica (IHC) e hibridación in situ (ISH) basados en peroxidasa (HRP). El sustrato es una solución premezclada estable que contiene peróxido de hidrógeno, por lo que se eliminan todos los pasos de mezcla y está listo para usar. Tras la oxidación inducida por HRP, Stayright™ Purple forma un producto precipitante insoluble de color púrpura en el sitio objetivo de su ensayo. El producto final púrpura es insoluble en solventes orgánicos y medios de montaje orgánicos, por lo que la mancha púrpura distintiva se puede mantener a pesar de los pasos de manipulación regulares de deshidratación y colocación de cubreobjetos.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-45900 | ReadiUse™ Stayright™ Purple *HRP Chromogen Premixed with Hydrogen Peroxide* | 5 ml |
| AAT-45901 | ReadiUse™ Stayright™ Purple *HRP Chromogen Premixed with Hydrogen Peroxide* | 50 ml |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento: Refrigerar (2-8 °C). Minimizar la exposición a la luz.
Plataforma
Microscopio de luz blanca
MUESTRA DE PROTOCOLO EXPERIMENTAL
1. Cubra la sección con la solución Stayright™ Purple lista para usar. Incubar a temperatura ambiente durante 5-15 minutos.
2. Sumerja los portaobjetos en dH2O para detener el desarrollo del color y controlar la intensidad de la tinción. Si la intensidad de la tinción no es lo suficientemente brillante, se necesita una incubación más prolongada. Se puede volver a aplicar la solución Stayright™ Purple para continuar con el desarrollo.
3. Lavar con dH2O durante 5-10 minutos.
4. Use una contratinción deseada si es necesario.
5. Deshidratar con etanol y montar permanentemente en medio de montaje permanente orgánico.
Imagenes
Figura 1. Detección inmunohistoquímica de EpCAM en tejido de adenocarcinoma de pulmón FFPE. Las secciones de tejido se incubaron con IgG anti-conejo de cabra conjugada con poli-HRP y luego se revelaron con Stayright™ Purple (izquierda) o DAB (derecha), respectivamente. Las células también se contrastaron con hematoxilina. Stayright™ Purple genera una mancha intensa con alta sensibilidad y resolución clara similar a DAB.
Figura 2. Se fijaron muestras de tejido de adenocarcinoma de pulmón humano y se tiñeron para EpCAM. Las secciones de tejido se incubaron con un anticuerpo monoclonal de conejo anti-EpCAM (izquierda) o isotipo IgG como control negativo (derecha). A continuación, la muestra se incubó con IgG anti-conejo de cabra conjugada con poli-HRP y la señal se desarrolló con solución Stayright™ Purple. Stayright™ Purple genera una mancha de color púrpura limpia sin fondo.
Figura 3. Comparación de los efectos citotóxicos entre Stayright™ Purple y DAB en la proliferación de células HeLa. Se utilizó el ensayo WST-8 de AAT (n.° de catálogo 22770) para determinar la viabilidad celular después del tratamiento con aproximadamente 0, 2, 6, 18, 55, 100, 150, 200, 400, 500, 800 o 1000 μg/mL de Stayright™ Púrpura o DAB durante 24 horas, respectivamente. Se determinaron los valores IC50 y se demostró que Stayright™ Purple es una alternativa significativamente más segura que DAB
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Bibliografías
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