Kit de ensayo de calcio sin probenecid y sin lavado Modelo Screen Quest™ Calbryte-520. Este kit proporciona el método de ensayo más optimizado para monitorear los receptores acoplados a proteína G (GPCR) y los canales de calcio con líneas celulares frágiles o difíciles.
Descripción
Los ensayos de flujo de calcio son los métodos preferidos en el descubrimiento de fármacos para la detección de receptores acoplados a proteína G (GPCR). El kit de ensayo de calcio Screen Quest™ Calbryte-520 sin probenecid y sin lavado proporciona un ensayo homogéneo más robustobasado en fluorescencia para detectar la movilización de calcio intracelular.
Las células que expresan GPCR de interés que señaliza a través del calcio están precargadas con nuestro Calbryte™-520 AM patentado que puede atravesar la membrana celular. Calbryte™-520 AM es el indicador de calcio más brillante disponible para la detección HTS. Una vez dentro de la célula, los grupos bloqueadores lipofílicos de Calbryte™-520 AM son escindidos por esterasa celular no específica, lo que da como resultado un tinte fluorescente cargado negativamente que permanece dentro de las células y su fluorescencia aumenta considerablemente al unirse al calcio. Cuando las células se estimulan con compuestos de detección, el receptor señala la liberación de calcio intracelular, lo que aumenta en gran medida la fluorescencia de Calbryte™-520 AM. Las características de su excelente retención celular, alta sensibilidad y aumentos de fluorescencia de 100 a 250 veces (cuando forma complejos con calcio) hacen de Calbryte™-520 AM un indicador ideal para la medición de calcio celular. Calbryte™-520 AM es el único tinte de calcio que no requiere probenecid para una mejor retención celular.
Este kit de ensayo de calcio Screen Quest™ Calbryte-520 sin probenecid y sin lavado proporciona el método de ensayo más optimizado para monitorear los receptores acoplados a proteína G (GPCR) y los canales de calcio con líneas celulares frágiles o difíciles. El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pozos o de 384 pozos y se puede adaptar fácilmente a la automatización.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-36317 | Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit | 1 placa |
| AAT-36318 | Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit | 10 placas |
| AAT-36319 | Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit | 100 placas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 490 nm |
| Emisión | 525 nm |
| Cutoff | 515 nm |
| Placa recomendada | Paredes negras, fondo claro |
| Especificaciones instrumento | Modo de lectura inferior / Manejo de líquidos programable |
Otros Instrumentos: ArrayScan, FDSS, FLIPR, FlexStation, IN Cell Analyzer, NOVOStar, ViewLux
Componentes
| Componente A: Calbryte™ 520 AM | 1 vial |
| Componente B: 10X Pluronic® F127 Plus | 1 vial (1 ml) |
| Componente C: HHBS (Hanks’ buffer con 20 mM Hepes) | 1 vial (9 ml) |
Espectro
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Propiedades espectrales
| Excitación (nm) | 493 |
| Emisión (nm) | 515 |
| Rendimiento cuántico | 0.751 |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre Calbryte™ 520 AM
Agregue 20 µL (Cat. # 36317) o 200 µL (Cat. # 36318 y # 36319) de DMSO en el vial de Calbryte™ 520 AM (Componente A) y mezcle bien.
Tenga en cuenta que 20 µL de solución madre Calbryte™ 520 AM es suficiente para una placa. La solución madre de Calbryte™ 520 AM sin usar se puede dividir en alícuotas y almacenar a < -20 °C durante más de un mes si los tubos están sellados herméticamente.
Nota Proteger de la luz y evitar ciclos repetidos de congelación-descongelación. - Buffer de ensayo (1X)
Mezcle 9 mL de HHBS (Componente C, no incluido en el kit Cat. # 36319) con 1 mL de 10X Pluronic® F127 Plus (10X) (Componente B) y mezcle bien.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Solución de carga de tinte Calbryte™ 520 AM
Agregue 20 µL de solución madre Calbryte™ 520 AM en 10 mL de buffer de ensayo (1X) y mezcle bien.
Nota: Esta solución de trabajo es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.
Tenga en cuenta que 10 ml de solución de carga de colorante son suficientes para una placa de 96 pocillos.
Para obtener guia sobre la preparación de muestras de células, visite
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagenes
Figura 1. Comparación de la respuesta de la señal fluorescente del receptor P2Y endógeno al ATP en células CHO-K1. Se sembraron 50.000 células CHO-K1/100 µl/poczo durante la noche a en una placa costar de 96 pozos s de pared negra/fondo transparente. La respuesta del flujo de calcio se midió con Screen Quest™ Calbryte™ 520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit, FLIPR Calcium 4 Assay Kit y Fluo-4 Direct Calcium Assay kit. FlexStation 3 añadió ATP (50 µl/pozo) para alcanzar las concentraciones finales indicadas.
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Bibliografía
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Referencias
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Application Notes (en Ingles)
A Novel NO Wash Probeniceid-Free Calcium Assay for Functional Analysis of GPCR and Calcium Channel Targets
Introducing Calbryte™ Series
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