Este kit de ensayo de calcio sin probenecid y sin lavado proporciona el método de ensayo más optimizado para monitorear GPCR y canales de calcio con líneas celulares frágiles o difíciles.
Descripción
Los ensayos de flujo de calcio son los métodos preferidos para la detección de receptores acoplados a proteína G (GPCR) en el descubrimiento de fármacos. El kit de ensayo de calcio sin probenecid y sin lavado Screen Quest™ Calbryte-590™ proporciona el ensayo basado en fluorescencia roja homogéneo más sólido para detectar la movilización de calcio intracelular.
Las células que expresan un GPCR de interés que emite señales a través del calcio están precargadas con nuestro Calbryte-590 AM patentado que puede atravesar la membrana celular. Calbryte-590 AM es el indicador de calcio más brillante disponible para la detección de HTS. Una vez dentro de la célula, los grupos bloqueadores lipofílicos de Calbryte-590 AM son escindidos por esterasa celular no específica, lo que da como resultado un tinte fluorescente con carga negativa que permanece dentro de las células y su fluorescencia aumenta considerablemente al unirse al calcio.
Cuando las células se estimulan con compuestos de detección, el receptor señala la liberación de calcio intracelular, lo que aumenta en gran medida la fluorescencia de Calbryte-590 AM. Las características de su excelente retención celular, alta sensibilidad y aumentos de fluorescencia de 100 a 250 veces (cuando forma complejos con calcio) hacen de Calbryte-590 AM un indicador ideal para la medición de calcio celular ya que es el único tinte de calcio rojo que no requiere probenecid para mejorar la retención celular.
Este kit de ensayo de calcio Screen Quest™ Calbryte-590™ sin probenecid y sin lavado proporciona el método de ensayo más optimizado para monitorear GPCR y canales de calcio con líneas celulares frágiles o difíciles. En comparación con los ensayos de calcio basados en fluorescencia verde, este kit de ensayo tiene menos interferencia de los compuestos coloreados de una biblioteca de compuestos. También es compatible con líneas celulares GFP para análisis de alto contenido.
El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pocillos o de 384 pocillos y se puede adaptar fácilmente a la automatización.
Nombre en ingles: Screen Quest™ Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| 36200 | Kit de análisis de calcio sin probenecid ni lavado Screen Quest™ Calbryte-590 Screen Quest™ | 1 placa |
| 36201 | Kit de análisis de calcio sin probenecid ni lavado Screen Quest™ Calbryte-590 Screen Quest™ | 10 placas |
| 36202 | Kit de análisis de calcio sin probenecid ni lavado Screen Quest™ Calbryte-590 Screen Quest™ | 100 placas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 540 nm |
| Emisión | 590 nm |
| Cutoff | 570 nm |
| Placa recomendada | Pared negra / fondo claro |
| Especificaciones instrumento | Modo de lectura inferior/Manejo de líquidos programable |
Otros Instrumentos
ArrayScan, FDSS, FLIPR, FlexStation, IN Cell Analyzer, NOVOStar, ViewLux
Componentes
| Componente A: Calbryte™ 590 AM | 10 viales |
| Componente B: 10X Pluronic® F127 Plus | 10 botellas (10 mL/botella) |
| Componente C: HHBS (Hanks’ buffer con 20 mM Hepes) | No Incluido |
Espectro
Abrir en Advanced Spectrum Viewer
Propiedades espectrales
| Excitación (nm) | 581 |
| Emisión (nm) | 593 |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
1. Solución madre Calbryte™ 590 AM:
Agregue 20 µL (Cat. # 36200) o 200 µL (Cat. # 36201 y # 36202) de DMSO en el vial de Calbryte™ 590 AM (Componente A) y mezcle bien. Nota: 20 µL de solución madre Calbryte™ 590 AM es suficiente para una placa. La solución madre de Calbryte™ 590 AM sin usar puede dividirse en alícuotas y almacenarse a < -20 oC durante más de un mes si los tubos están sellados herméticamente. Nota: Proteger de la luz y evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.
2. Buffer de ensayo (1X):
Mezcle 9 mL de HHBS (Componente C, no incluido en el kit Cat. # 36202) con 1 mL de 10X Pluronic® F127 Plus (10X) (Componente B) y mezcle bien.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Solución de carga de tinte Calbryte™ 590 AM:
Agregue 20 µL de solución madre Calbryte™ 590 AM en 10 mL de Buffer de ensayo (1X) y mezcle bien. Nota: Esta solución de trabajo es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente. Nota: 10 ml de solución de carga de colorante es suficiente para una placa de 96 pocillos.
Para guia sobre la preparación de muestras de células, visite:
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagen
Figura 1. La gráfica ilustra la relación señal-ruido (SNR) x 100 %. La respuesta a la dosis de ATP se midió en células CHO-K1 con Screen Quest™ Calbryte 590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit. Se sembraron células CHO-K1 durante la noche a 50.000 células/100 µl/pocillo en una placa costar de 96 pocillos de pared negra/fondo transparente. Se añadieron 100 µl de solución de carga de colorante y se incubaron durante 45 min a 37 °C y 15 min a temperatura ambiente. FlexStation 3 añadió ATP (50 µl/pocillo) para alcanzar las concentraciones finales indicadas.
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Bibliografía
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Referencias
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