Screen Quest™ TR-FRET No Wash cAMP Assay Kit

Kit de ensayo TR-FRET cAMP sin lavado, Screen Quest™. Nuestro kit proporciona un método de ensayo conveniente para monitorear la activación de la adenilil ciclasa en sistemas de receptores acoplados a proteína G.

Descripción

Nuestro kit de ensayo cAMP Screen Quest™ TR-FRET sin lavado proporciona un método de ensayo conveniente para monitorear la activación de la adenilil ciclasa en sistemas de receptores acoplados a proteína G. En comparación con otros kits de ensayo de ELISA comerciales de cAMP,

Este ensayo se basa en la competencia por fijar un numero de anticuerpos anti-cAMP al sitio de unión entre el cAMP marcado con trFLour 650 y el cAMP libre no marcado. El anticuerpo anti-cAMP esta marcado con trFluor™ Eu mientras que el cAMP esta marcado con trFluor™ 650. En ausencia de cAMP, el cAMP conjugado con trFluor™ 650 esta unido al anticuerpo anti-cAMP trFluor™ Eu para tener una fuerte señal FRET. Mientras que el cAMP libre esta presente en la muestra, este compite por el sitio de unión del anticuerpo anti-cAMP marcado con trFluor™ Eu , por lo tanto, inhibe la unión de trFluor™ 650-cAMP al anticuerpo anti-cAMP. El  AMPc marcado con trFluor™ 650 solo tiene una vidamedia útil de fluorescencia de nanosegundos, mientras que el marcador de AMPc fluorescente unido a anticuerpo anti-cAMP marcado con Eu TR Fluor™ tiene una vidamedia útil de fluorescencia mucho más larga que  un fluoróforo de lantánido. La magnitud de la señal de fluorescencia resuelta tiempo-respuesta (TR-FRET) es proporcional a la concentración de cAMP en una muestra.

El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pozos o de 384 pozos, y es conveniente para monitorear la actividad de AMPc con ultraespecificidad y sensibilidad en sistemas de receptores acoplados a proteína G.

CatalogoProductoPresentación
AAT-36379Screen Quest™ TR-FRET No Wash cAMP Assay Kit1 placa
AAT-36380Screen Quest™ TR-FRET No Wash cAMP Assay Kit10 placas
AAT-36381Screen Quest™ TR-FRET No Wash cAMP Assay Kit50 placas

Importante: Solo para uso en investigación (RUO).

Plataforma

Lector de Microplacas de Fluorescencia

Placa recomendadaNegra sólida y/o Negra con fondo claro
Especificaciones instrumentoTimed-resolved

Componentes

Componente A: Anti cAMP-trFluor™ Eu5 vial
Componente B: cAMP-trFluor™ 650 5 vial
Componente C: cAMP Standard1 vial (33 µg)
Componente D: Cell Lysis Buffer5 bottle (100 mL)
Componente E: Diluent5 bottle (100 mL)

PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

Estándar de AMPc (1 mM)
Agregue 100 µL de diluyente (componente E) al estándar cAMP (componente C) y mezcle bien.
Nota: El estándar de AMPc no utilizado puede dividirse en alícuotas y almacenarse a -20 °C.


PREPARACION DE SOLUCION DE ESTANDAR

Para su conveniencia puede usar el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/36379

Estándar de AMPc
La solución madre 1 mM se puede diluir a 11200 nM seguido de diluciones 4X.


PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO

  1. Solución de trabajo Anti cAMP-trFluor™ Eu
    Agregue 50 μl de solución (componente A) a 2.5 ml de buffer de lisis celular (componente D).
    Nota: Realice la preparación justo antes de su uso y según sea necesario.
  2. Solución de trabajo cAMP-trFluor™ 650
    Agregue 50 μl de solución (componente B) a 2.5 ml de buffer de lisis celular (componente D).
    Nota: Realice la preparación justo antes de su uso y según sea necesario.

Bibliografía

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The M2 muscarinic receptors are essential for signaling in the heart left ventricle during restraint stress in mice
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Referencias

Ver todas las 132 referencias: Citation Explorer

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Changes in the Arabidopsis thaliana Proteome Implicate cAMP in Biotic and Abiotic Stress Responses and Changes in Energy Metabolism
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The pleiotropic role of exchange protein directly activated by cAMP 1 (EPAC1) in cancer: implications for therapeutic intervention
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Cardiac Hypertrophy Is Inhibited by a Local Pool of cAMP Regulated by Phosphodiesterase 2
Authors: Zoccarato A, Surdo NC, Aronsen JM, Fields LA, Mancuso L, Dodoni G, Stangherlin A, Livie C, Jiang H, Sin YY, Gesellchen F, Terrin A, Baillie GS, Nicklin SA, Graham D, Szabo-Fresnais N, Krall J, V and eput F, Movsesian M, Furlan L, Corsetti V, Hamilton G, Lefkimmiatis K, Sjaastad I, Zaccolo M.
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cAMP controls the balance of the propulsive forces generated by the two flagella of Chlamydomonas
Authors: Saegusa Y, Yoshimura K.
Journal: Cytoskeleton (Hoboken) (2015): 412

Application Notes (en Ingles)

A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
A New Protein Crosslinking Method for Labeling and Modifying Antibodies
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides
Annexin V