Los avances modernos en citometría de flujo, combinados con la aparición continua de nuevos marcadores fluorescentes, han permitido un nivel de análisis sin precedentes en biología celular, inmunología y microbiología, así como en estudios de investigación clínica y de cáncer. Con estas herramientas, se pueden examinar y caracterizar distintas poblaciones de células, célula por célula, para detectar rasgos específicos y biológicamente significativos, incluidos marcadores de superficie celular y marcadores secretados, dianas intracelulares, actividad enzimática, contenido de ácido nucleico, apoptosis y mucho más. más.
AAT Bioquest proporciona una cartera completa de reactivos de citometría de flujo que van desde etiquetas fluorescentes y conjugados de anticuerpos CD hasta tintes de viabilidad reparables, tintes de proliferación celular y herramientas para monitorear la apoptosis.
Tintes fluorescentes súper brillantes, ficobiliproteínas y tintes en tándem para citometría de flujo multicolor
Los tintes fluorescentes conjugados con anticuerpos o proteínas permiten medir propiedades biológicas y bioquímicas en una amplia gama de aplicaciones de citometría de flujo. En la mayoría de las condiciones experimentales, las ficobiliproteínas como PE y APC se encuentran entre los fluoróforos más brillantes disponibles para la citometría de flujo. Mientras que los nuevos tintes mFluor™ ofrecen a los usuarios una mayor fotoestabilidad, un brillo superior y cambios de Stoke excepcionalmente largos para análisis multiparamétrico.
Para marcar anticuerpos o proteínas primarios para citometría de flujo, AAT Bioquest ofrece una amplia selección de kits de etiquetado de anticuerpos. Nuestros kits de etiquetado de anticuerpos ReadiLink™ Rapid mFluor™ y los kits de etiquetado de anticuerpos con tinte en tándem, PE, APC y Buccutite™ permiten a los investigadores etiquetar y recuperar sin esfuerzo el 100 % de sus anticuerpos sin un paso de purificación. Produzca conjugados estables marcados covalentemente para FACS, inmunofenotipado, citometría de flujo múltiple y más.
Análisis de citometría de flujo de células PBMC humanas. Anticuerpo anti-CD4 humano preparado con el kit de etiquetado rápido de anticuerpos PE Buccutite™ (n.º de catálogo 1310) o Lightning-Link® PE. La señal de fluorescencia se controló utilizando el citómetro de flujo ACEA NovoCyte en el canal FITC.
| Labeling Kit | CD4(SK3)- Conjugate | Stain Index |
| Buccutite™ Kit | CD4-PE Conjugate | 55 |
| Lightning-Link® Kit | CD4-PE Conjugate | 28 |
Tabla 1. Buccutite™ Kits de etiquetado rápido para anticuerposNombre Ex (nm) Em (nm) Unidad Cat No. Buccutite™ Rapid Protein Crosslinking Kit *Microscale Optimized for Crosslinking 100 ug Antibody Per Reaction* - - 2 Labelings 1315 Buccutite™ Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 1 mg Protein* - - 1 Kit 5504 Buccutite™ Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 100 ug Protein* - - 1 Kit 5503 Buccutite™ Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 25 ug Protein* - - 2 Labelings 5505 Buccutite™ Rapid PE Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* 565 575 2 Labelings 1310 Buccutite™ Rapid PE Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* 565 575 2 Labelings 1312 Buccutite™ Rapid PE-Texas Red Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* 565 600 2 Labelings 1318 Buccutite™ Rapid PE-Texas Red Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* 565 600 2 Labelings 1343 Buccutite™ Rapid PE-Cy5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* 565 674 2 Labelings 1322 Buccutite™ Rapid PE-Cy5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* 565 674 2 Labelings 1340 Buccutite™ Rapid PE-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* 565 700 2 Labelings 1316 Buccutite™ Rapid PE-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* 565 700 2 Labelings 1341 Buccutite™ Rapid PE-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* 565 780 2 Labelings 1317 Buccutite™ Rapid PE-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* 565 780 2 Labelings 1342 Buccutite™ Rapid PerCP Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* 482 677 2 Labelings 1325 Buccutite™ Rapid PerCP Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* 482 677 2 Labelings 1353 Buccutite™ Rapid APC Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* 651 665 2 Labelings 1311 Buccutite™ Rapid APC Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* 651 665 2 Labelings 1313 Buccutite™ Rapid APC-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* 651 700 2 Labelings 1320 Buccutite™ Rapid APC-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* 651 700 2 Labelings 1350 Buccutite™ Rapid APC-iFluor® 700 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* 651 713 2 Labelings 1319 Buccutite™ Rapid APC-iFluor® 700 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* 651 713 2 Labelings 1347 Buccutite™ Rapid APC-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* 651 780 2 Labelings 1321 Buccutite™ Rapid APC-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* 651 780 2 Labelings 1351
Reactivos de proliferación celular para citometría de flujo
Los ensayos y reactivos de proliferación celular son herramientas importantes que se utilizan en estudios de crecimiento y diferenciación celular para monitorear la salud de las células dentro de una población heterogénea. Se han utilizado ampliamente en el desarrollo de fármacos para examinar la toxicidad de los compuestos y la inhibición del crecimiento de las células tumorales, y han demostrado ser una herramienta de diagnóstico exitosa para detectar la aparición de varios cánceres. En citometría de flujo, se pueden utilizar varios enfoques para medir la proliferación; estos incluyen ensayos de dilución de tintes y mediciones de síntesis de ADN mediante la incorporación de bromodesoxiuridina (BrdU).
Ensayos de dilución de tinte para la proliferación celular.
Los colorantes de proliferación CFSE y CytoTell™ se pueden utilizar en citometría de flujo para examinar la proliferación celular en células vivas. A medida que las células se dividen, el tinte fluorescente se distribuye uniformemente entre las células hijas, lo que da como resultado una reducción progresiva a la mitad de la intensidad de la fluorescencia con cada generación sucesiva. Estos colorantes de proliferación se pueden utilizar para rastrear la proliferación celular a largo plazo tanto in vitro como in vivo durante varias generaciones.
CFSE (diacetato de carboxifluoresceína, éster succinimidílico) es un indicador de proliferación fluorescente verde permeable a las células que emite una señal de fluorescencia a 517 nm cuando se excita a 498 nm. Este tinte se difunde pasivamente a través de las membranas celulares no comprometidas, mediante lo cual las reacciones enzimáticas con esterasas intracelulares escinden los grupos acetato de CFSE para producir una carboxifluoresceína reactiva con aminas, SE que se une covalentemente a las proteínas dentro de la célula. Si bien el CFSE sigue siendo ampliamente utilizado como indicador de proliferación fluorescente verde excitado a 498 nm, no está exento de salvedades. CFSE es altamente tóxico para las células, susceptible a la fuga de tinte de la célula y se sabe que se derrama hacia los canales PE y PE-Texas Red.
Actualizaciones CFSE de alto rendimiento para la proliferación celular
CytoTell™ son una serie de trazadores fluorescentes permeables a las células diseñados para monitorear la proliferación celular en células vivas sin ninguno de los inconvenientes asociados con CFSE. Tras la difusión pasiva a través de las membranas celulares, los colorantes CytoTell™ son hidrolizados por esterasas intracelulares para producir colorantes reactivos con aminas o tiol altamente fluorescentes que se unen covalentemente a grupos amina o tiol en proteínas intracelulares. La citotoxicidad es mínima y los tintes se retienen bien dentro de las células durante varias generaciones de división; se pueden visualizar hasta 9 generaciones utilizando CytoTell™ UltraGreen. Los tintes CytoTell™ están disponibles en 7 tintes fluorescentes que ofrecen mayor flexibilidad en el análisis multicolor y pueden fijarse y permeabilizarse para el análisis de objetivos intracelulares utilizando fijadores estándar que contienen formaldehído y tampones de permeabilización a base de saponina.
Ensayo de proliferación celular utilizando CytoTell™ Green y CFSE. Se tiñeron células Jurkat (~2×106 células/ml) con CytoTell™ Green o CFSE el día 0. Luego, las células se pasaron en serie en una proporción de 1:1 el día especificado. La intensidad de la fluorescencia se midió con un citómetro de flujo ACEA NovoCyte 3000 en el canal FITC el día del paso. Las generaciones sucesivas están representadas por picos de diferentes colores.
Tabla 2. Tintes de proliferación celular CytoTell™ y CFSE para citometría de flujoProducto Fuente de excitación (nm) Ex (nm) Em (nm) Unidad Cat No. CytoTell™ Blue Violet Laser (405 nm) 410 445 500 Tests 22251 CytoTell™ Violet 500 Violet Laser (405 nm) 415 499 500 Tests 22248 CFSE [5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester] Blue Laser (488 nm) 498 517 25 mg 22022 ReadiUse™ CFSE [5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester] Blue Laser (488 nm) 498 517 5 x 500 µg 22028 CytoTell™ Green Blue Laser (488 nm) 510 525 500 Tests 22253 CytoTell™ UltraGreen Blue Laser (488 nm) 492 519 500 Tests 22240 CytoTell™ Orange Green Laser (531 nm) 541 560 500 Tests 22257 CytoTell™ Red 590 Green Laser (531 nm) 560 574 500 Tests 22261 CytoTell™ Red 650 Red Laser (633/647 nm) 626 643 500 Tests 22255 CytoTell™ Blue Violet Laser (405 nm) 410 445 2 x 500 Tests 22252 CytoTell™ Violet 500 Violet Laser (405 nm) 415 499 1000 Tests 22249 CytoTell™ Green Blue Laser (488 nm) 510 525 2 x 500 Tests 22254 CytoTell™ UltraGreen Blue Laser (488 nm) 492 519 2 x 500 Tests 22241 CytoTell™ Orange Green Laser (531 nm) 541 560 2 x 500 Tests 22258 CytoTell™ Red 590 Green Laser (531 nm) 560 574 2 x 500 Tests 22262 CytoTell™ Red 650 Red Laser (633/647 nm) 626 643 2 x 500 Tests 22256
Tintes de viabilidad reparables para citometría de flujo
La capacidad de discriminar y excluir células muertas de células vivas permite una separación e identificación más limpia de poblaciones de células. Mejora enormemente la precisión del ensayo y elimina artefactos indeseables y falsos positivos causados por la unión no específica de varios reactivos a células muertas. Para distinguir poblaciones de células vivas y muertas a partir de lecturas de citometría de flujo, AAT Bioquest ofrece una amplia gama de colorantes de viabilidad reparables Cell Meter™ y kits de tinción de células muertas fijables Live or Dead™. El etiquetado es estable, robusto y compatible con fijadores y tampones de permeabilización, lo que permite un análisis más detallado de objetivos intracelulares.
Principio de tinción Cell Meter™. Las células viables excluirán los tintes de viabilidad reparables Cell Meter™, dejando solo aminas y tioles de la superficie celular para unirse, lo que resulta en una fluorescencia mínima. Las células muertas con integridad de membrana comprometida permitirán que el tinte penetre y tiñe proteínas que contienen aminas y tioles y otros componentes intracelulares, lo que produce una fluorescencia intensa. La diferencia en la intensidad de la señal entre las células viables y muertas es significativa, lo que facilita la exclusión de las células muertas del análisis.
Tintes de viabilidad reparables Cell Meter™
Los tintes de viabilidad fijables Cell Meter™ son una familia de tintes de viabilidad impermeables a la membrana diseñados para distinguir células vivas y muertas durante la citometría de flujo. Estos tintes penetran fácilmente en las células muertas con integridad de membrana comprometida y se unen irreversiblemente a proteínas que contienen aminas y tioles y otros componentes intracelulares, lo que facilita su exclusión del análisis. Debido a que la tinción es sólida y estable, las células marcadas con tintes de viabilidad fijables Cell Meter™ pueden fijarse, permeabilizarse y sondearse para realizar inmunofenotipado intracelular.
Los tintes de viabilidad reparables Cell Meter™ están disponibles en 9 tintes fluorescentes para brindar a los usuarios una mayor flexibilidad en el diseño de paneles multicolores. Los tintes incluidos en esta serie son excitados por las principales fuentes de excitación, incluidas las líneas láser de 405, 488, 633 y 647 nm, y emiten en canales comunes.
Detección de la viabilidad de las células Jurkat mediante el tinte de viabilidad fijable Cell Meter™. Las células Jurkat se trataron y se tiñeron con Cell Meter™ BX590 (Cat#22514), y luego se fijaron en formaldehído al 3,7 % y se analizaron mediante citometría de flujo. La población de células muertas (pico azul) se distingue fácilmente de la población de células vivas (pico rojo) con el canal PE-TexasRed, y se obtuvieron resultados casi idénticos antes y después de la fijación.
Tabla 3. Tintes de viabilidad reparables para el análisis de células vivas/muertas durante la citometría de flujoProducto Ex (nm) Em (nm) Espectro Pruebas Cat No. Cell Meter™ VX450 fixable viability dye 406 445 
200 Tests 22540 Cell Meter™ VX500 fixable viability dye 433 498 200 Tests 22542 Cell Meter™ BX520 fixable viability dye 491 516 200 Tests 22510 Cell Meter™ BX590 fixable viability dye 492 579 200 Tests 22514 Cell Meter™ BX650 fixable viability dye 518 654 200 Tests 22520 Cell Meter™ RX660 fixable viability dye 649 664 200 Tests 22530 Cell Meter™ RX700 fixable viability dye 690 713 200 Tests 22532 Cell Meter™ RX780 fixable viability dye 629 767 200 Tests 22536 Cell Meter™ IX830 fixable viability dye 811 822 200 Tests 22529 ReadiView™ Green/Red Viability Stain 100 Tests 22762
Kits de tinción Live or Dead™ de células muertas reparables
Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kits employ membrane-impermeant amine-reactive dyes to differentiate live and dead cells during flow cytometry. The dyes provided in each kit can readily permeate compromised membranes of dead cells and covalently bind to both intracellular and extracellular amine-containing proteins resulting in intense fluorescence. While on live cells, the fluorescence signal is negligible as cell surface amine-groups are only avaiable to react with the dye. The difference in signal intensity between live and dead cell populations is signifcant, making it easy to exclude dead cells from analysis. Cells labeled using Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kits can be fixed, permeabilized and probed for intracellular immunophenotyping. AAT Bioquest offers 10 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kits designed to for efficient excitation by major exciation sources including the 350, 405, 488, 532, 561, 633 and 647 nm laser lines, and emit in common channels.
Detección de la viabilidad de las células Jurkat mediante los kits de tinción de células muertas fijables Live or Dead™. Las células Jurkat se trataron, se tiñeron y luego se fijaron en formaldehído al 3,7% y se analizaron mediante citometría de flujo.
Tabla 4. Kits de tinción Live or Dead™ de células muertas fijables para análisis de células vivas/muertas durante la citometría de flujo
Kit Laser (nm) Ex/Em (nm) Multiplex Fijables Pruebas Cat No. Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Blue Fluorescence* UV (350 nm) 353/442 Yes Yes 200 Tests 22600 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Blue Fluorescence with 405 nm Excitation* Violet (405 nm) 410/450 Yes Yes 200 Tests 22500 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Green Fluorescence with 405 nm Excitation* Violet (405 nm) 408/512 Yes Yes 200 Tests 22501 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Green Fluorescence* Blue (488 nm) 498/521 Yes Yes 200 Tests 22601 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Orange Fluorescence with 405 nm Excitation* Violet (405 nm) 398/550 Yes Yes 200 Tests 22502 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Orange Fluorescence* Green/Yellow (532/561 nm) 547/573 Yes Yes 200 Tests 22602 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Red Fluorescence* Yellow (561 nm) 583/603 Yes Yes 200 Tests 22603 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Blue/Green (488/532 nm) 523/617 Yes Yes 200 Tests 22599 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Red (635 nm) 649/660 Yes Yes 200 Tests 22604 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Red (635 nm) 749/775 Yes Yes 200 Tests 22605
Ensayos de ciclo celular fijo y vivo para citometría de flujo
El análisis de cambios en el contenido de ADN durante la citometría de flujo es un método poderoso que se usa comúnmente para identificar células en diferentes etapas del ciclo celular. Esta técnica utiliza tintes fluorescentes de unión al ADN, que se unen al ADN estequiométricamente, generando una señal de fluorescencia que es directamente proporcional a la cantidad de ADN presente en la célula. De esta manera, cuando la densidad del ADN aumenta a medida que las células avanzan de la fase G1 a la fase G2 del ciclo celular, las células absorberán proporcionalmente hasta que hayan duplicado su contenido de ADN. Como resultado, las células en la fase G2 tendrán una fluorescencia dos veces más intensa que las células en la fase G1.
Perfil de ADN en células Jurkat en crecimiento y tratadas con nocodazol. Las células Jurkat se trataron sin (A) o con 100 ng/ml de nocodazol (B) en una incubadora a 37 °C y 5 % de CO2 durante 24 horas, y luego se cargaron el tinte con Nuclear Green™ LCS1 durante 30 minutos. La intensidad de fluorescencia de Nuclear Green™ LCS1 se midió con un citómetro de flujo ACEA NovoCyte con el canal de FITC. En células Jurkat en crecimiento (A), la tinción nuclear con Nuclear Green™ LCS1 muestra las fases G1, S y G2. En las células G2 detenidas tratadas con nocodazol (B), la frecuencia de las células G2 aumentó drásticamente y la frecuencia de la fase S de G1 disminuyó significativamente.
AAT Bioquest ofrece una selección de 4 ensayos del ciclo celular, 3 de los cuales están diseñados para análisis de células vivas y 1 para células fijadas. Los kits de ensayo fluorimétrico del ciclo celular vivo Cell Meter™ utilizan colorantes de unión al ADN permeables a la membrana para monitorear la progresión y proliferación del ciclo celular, y pueden usarse para investigar los aspectos cinéticos y temporales del ciclo celular. Después de la tinción, las células se pueden fijar y permeabilizar. El kit de ensayo de ciclo celular fijo fluorimétrico Cell Meter™ utiliza nuestro colorante de unión al ADN impermeable a la membrana Nuclear Red™ CCS1. Antes de la tinción, las células deben fijarse o permeabilizarse para que todo el tinte entre en la célula. Cada kit incluye un protocolo de tinción sólido y todos los componentes necesarios para 200 pruebas. AAT Bioquest también ofrece una gran selección de colorantes de unión al ADN independientes para el análisis del ciclo celular, incluidos yoduro de propidio, 7-AAD, DAPI, Hoechst 33342, 33258, S769121, 34580 y TWO-PRO™ 1 y TWO-PRO™ 3. .
Tabla 5. Ensayos de ciclo celular vivo y fijo para citometría de flujoProducto Fuente de excitación (nm) Ex (nm) Em (nm) Pruebas Cat No. Cell Meter™ Fluorimetric Live Cell Cycle Assay Kit *Optimized for 405 nm Violet Laser Excitation* Violet Laser (405 nm) 401 460 100 Tests 22845 Cell Meter™ Fluorimetric Live Cell Cycle Assay Kit *Green Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Blue Laser (488 nm) 503 527 100 Tests 22841 Cell Meter™ Fluorimetric Live Cell Cycle Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Blue Laser (488 nm) 488 615 100 Tests 22860 Cell Meter™ Fluorimetric Fixed Cell Cycle Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Blue/Green Laser (488/532 nm) 537 682 100 Tests 22842
Tabla 6. Kits de seguimiento Cell Explorer™ de células vivas Producto Ex (nm) Em (nm) Pruebas Cat No. Cell Explorer™ Fixable Live Cell Tracking Kit *Green Fluorescence* 488 530 200 Tests 22621 Cell Explorer™ Fixable Live Cell Tracking Kit *Red Fluorescence* 488 610 200 Tests 22625 Cell Explorer™ Live Cell Tracking Kit *Blue Fluorescence* 405 450 200 Tests 22620 Cell Explorer™ Live Cell Tracking Kit *Deep Red Fluorescence* 640 660 200 Tests 22624 Cell Explorer™ Live Cell Tracking Kit *Orange Fluorescence* 488 576 200 Tests 22622 Cell Explorer™ Live Cell Tracking Kit *Red Fluorescence* 488 610 200 Tests 22623
Ensayo de apoptosis para citometría de flujo
La citometría de flujo es una de las aplicaciones más versátiles y de alto rendimiento para estudiar las complejidades de la apoptosis. No solo permite a los investigadores analizar células individualmente de poblaciones complejas, sino que la naturaleza multiparamétrica de la citometría de flujo permite examinar varios indicadores y marcadores apoptóticos simultáneamente. Con nuestra amplia selección de ensayos de apoptosis por citometría de flujo, investigue cambios en la conformación de la membrana plasmática, la pérdida del potencial de la membrana mitocondrial, la activación de caspasas, la condensación nuclear o utilice una combinación de técnicas para el análisis de apoptosis multiparamétrico.
Ensayos de Anexina V para la detección de apoptosis mediante citometría de flujo.
Los conjugados de anexina V se utilizan habitualmente para investigar la externalización de residuos de fosfatidilserina (PS), una característica clave en la apoptosis en etapa temprana. A medida que las células inician la muerte celular programada, pierden la asimetría de la membrana plasmática y los residuos de PS se trasladan de la valva interna a la externa de la membrana plasmática. La exposición de residuos de PS en la superficie celular se puede detectar por su afinidad por la anexina V, y cuando se pueden usar conjugados de anexina V marcados con fluorescencia para identificar células apoptóticas en citometría de flujo.
Los kits de ensayo de apoptosis de unión de anexina V AAT Bioquest Cell Meter™ ofrecen un método rápido y confiable para medir células apoptóticas basado en la externalización de residuos de PS. Estos kits utilizan un conjugado de anexina V altamente fluorescente y una tinción de ADN impermeable a la membrana para diferenciar entre células vivas, muertas y apoptóticas. De esta manera, las células que son viables muestran poca o ninguna fluorescencia, las células que experimentan apoptosis temprana muestran fluorescencia del conjugado de anexina V y las células muertas muestran un doble marcaje de la tinción de ADN impermeable a la membrana y del conjugado de anexina V. Estos kits se pueden combinar con otros reactivos para el estudio multiparamétrico de la viabilidad celular y la apoptosis.
Características clave de los ensayos de apoptosis de unión a Anexina V Cell Meter™
• Alta sensibilidad: la anexina V marcada con tintes iFluor® o mFluor™ produce señales significativamente más brillantes y fotoestables que Alexa Fluor® y otros conjugados de anexina V espectralmente similares.
• Flexibilidad: amplia selección de conjugados de anexina V independientes o kits de ensayo fáciles de usar que se adaptan a cualquier configuración de instrumento
• Diseño de ensayo conveniente: protocolo simplificado que se puede completar en 30 a 60 minutos
La detección de la actividad de unión del conjugado Anexina V-mFluor™ Violet 450 a fosfatidilserina en células Jurkat. Las células Jurkat se trataron sin (verde) o con estaurosporina 1 µM (rojo) a 37 °C durante 4 horas y luego se trataron con conjugado Anexina V-mFluor™ Violet 450 durante 30 minutos. La intensidad de la fluorescencia se midió utilizando el citómetro de flujo ACEA NovoCyte en el canal Pacific Blue.
Tabla 8. Guía de selección de ensayos Cell Meter™ de apoptosis de unión a Anexina V Annexin V Conjugate Dead Cell Stain Annexin V Conjugate Ex/Em Dead Cell stain Ex/Em Unit Size Cat No. Annexin V-iFluor® 488 PI 490/ 520 nm 534/617 nm 100 Tests 22824 Annexin V-iFluor® 555 None 554/578 nm *** 100 Tests 22825 Annexin V-iFluor® 594 None 590/610 nm *** 100 Tests 22826 Annexin V-iFluor® 647 None 650/668 nm *** 100 Tests 22827 Annexin V-mFluor™ Violet 450 PI 405/450 nm 534/617 nm 100 Tests 22828 Annexin V-mFluor™ Violet 500 PI 414/508 nm 534/617 nm 100 Tests 22829 Annexin V-mFluor™ Violet 550 PI 424/560 nm 534/617 nm 100 Tests 22830 Annexin V-APC PI 651/662 nm 534/617 nm 100 Tests 22837 Annexin V-PE Nuclear Red™ DCS1 565/575 nm 631/651 nm 100 Tests 22838 Annexin V-FITC PI 490/520 nm 534/617 nm 100 Tests 22839
Nota: Para Cat No. 22825, 22826 y 22827, utilice Nuclear Blue™ DCS1 como tinte de células muertas.
Ensayos de potencial de membrana de mitocondrias para citometría de flujo.
La pérdida del potencial de membrana mitocondrial es una característica distintiva de las primeras etapas de la apoptosis. En la citometría de flujo, se pueden utilizar sondas catiónicas permeables a la membrana para identificar cambios en el potencial de la membrana mitocondrial en tiempo real y discriminar células apoptóticas de poblaciones de células vivas. AAT Bioquest ofrece una amplia selección de reactivos y ensayos dinámicos diseñados para monitorear el potencial de membrana mitocondrial, estos incluyen indicadores radiométricos como JC-10™, indicadores de emisión única y kits de ensayo de potencial de membrana mitocondrial Cell Meter™ optimizados para aplicaciones de citometría de flujo.
JC-10™
AAT Bioquest JC-10™ es un nuevo indicador radiométrico diseñado para monitorear el potencial de la membrana mitocondrial con mayor precisión y sensibilidad que su predecesor JC-1. Al igual que JC-1, JC-10™ exhibe una acumulación dependiente potencial. En células sanas, JC-10™ se acumula selectivamente en las mitocondrias generando agregados J anaranjados que exhiben un amplio espectro de excitación y un máximo de emisión a 590 nm. Por el contrario, en células apoptóticas y necróticas con bajo potencial de membrana mitocondrial, JC-10™ se difunde fuera de las mitocondrias y se generan monómeros de JC-10™, lo que da como resultado un cambio a emisión verde (525 nm). JC-10™ permite la visualización tanto cualitativa como cuantitativa de los cambios potenciales de la membrana mitocondrial, considerando el cambio de la emisión de fluorescencia naranja a verde y la relación de intensidad de fluorescencia, respectivamente. El tinte JC-10™ está disponible como reactivo independiente o en el kit de ensayo de potencial de membrana mitocondrial Cell Meter™ JC-10 *Optimizado para ensayos de citometría de flujo*
Efecto del cambio de potencial de membrana de las mitocondrias inducido por FCCP en células Jurkat. Las células Jurkat se cargaron con tinte con solución de trabajo de tinte JC-10 junto con DMSO (superior) o FCCP 5 µM (bajo) durante 10 minutos. Las intensidades de fluorescencia tanto para los agregados J como para las formas monoméricas de JC-10 se midieron con un citómetro de flujo FACSCalibur (Becton Dickinson) utilizando canales FL1 y FL2. Los datos no compensados (columna izquierda) se compararon con los datos compensados (columna derecha).
Características clave de JC-10™ y del kit de ensayo Cell Meter™ JC-10™
La disminución de la intensidad de fluorescencia de MitoTell™ Red en respuesta al tratamiento con CCCP en células Jurkat. Las células Jurkat se cargaron con MitoTell™ Red solo (azul) o en presencia de CCCP 20 µM (verde) o 50 µM (rojo) durante 30 minutos. La intensidad de fluorescencia de MitoTell™ Red se midió utilizando el citómetro de flujo ACEA NovoCyte en el canal APC.
• Fácil de usar: JC-10™ no precipita cuando se diluye en tampones acuosos, lo que elimina los artefactos.
• Robusto: JC-10™ tiene desviaciones de ensayo más pequeñas debido a su solubilidad mejorada en medios acuosos y su mayor sensibilidad.
• Señal mejorada: JC-10™ tiene una relación señal-fondo más alta que JC-1.
• Sensibilidad mejorada: JC-10™ tiene la capacidad de detectar cambios sutiles en la pérdida de ΔΨm mejor que JC-1 en todas las líneas celulares probadas.
Tintes potenciales de membrana mitocondrial de emisión única
Otros reactivos y ensayos que se pueden utilizar para monitorear dinámicamente los cambios en el potencial de membrana de las mitocondrias incluyen TMRE, TMRM y los kits de ensayo de potencial de membrana de mitocondrias Cell Meter™ disponibles en naranja, rojo y fluorescencia de infrarrojo cercano. En las células sanas con mitocondrias en funcionamiento, estos tintes permeables a la membrana son fácilmente secuestrados por las mitocondrias activas y emiten una fluorescencia brillante. Cuando el potencial de membrana de las mitocondrias colapsa, cesa la acumulación y los colorantes se liberan por todo el citosol, lo que provoca la pérdida de fluorescencia.
Tabla 9. Reactivos y ensayos para monitorear el potencial de membrana mitocondrial durante la citometría de flujoProducto Fuente de excitación (nm) Ex (nm) Em (nm) Medida Cat No. Cell Meter™ JC-10 Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Optimized for Flow Cytometry Assays* Blue Laser (488 nm) 488 530, 575 nm 100 Tests 22801 Cell Meter™ Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Orange Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Blue/Green Laser (488/532 nm) 540 590 100 Tests 22804 Cell Meter™ Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Red Laser (640 nm) 640 660 100 Tests 22806 Cell Meter™ NIR Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Optimized for Flow Cytometry* Red Laser (633-640 nm) 635 660 100 Tests 22806 JC-1 Blue Laser (488 nm) 515 530 5 mg 22200 JC-1 Blue Laser (488 nm) 515 530 50 mg 22201 JC-10™ Blue Laser (488 nm) 508 524 50 mg 22201 TMRE Green Laser (532 nm) 552 574 25 mg 22220 TMRM Green Laser (532 nm) 552 574 25 mg 22221
| Nombre | Ex (nm) | Em (nm) | Unidad | Cat No. | ||
| Buccutite™ Rapid Protein Crosslinking Kit *Microscale Optimized for Crosslinking 100 ug Antibody Per Reaction* | - | - | 2 Labelings | 1315 | ||
| Buccutite™ Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 1 mg Protein* | - | - | 1 Kit | 5504 | ||
| Buccutite™ Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 100 ug Protein* | - | - | 1 Kit | 5503 | ||
| Buccutite™ Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 25 ug Protein* | - | - | 2 Labelings | 5505 | ||
| Buccutite™ Rapid PE Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* | 565 | 575 | 2 Labelings | 1310 | ||
| Buccutite™ Rapid PE Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* | 565 | 575 | 2 Labelings | 1312 | ||
| Buccutite™ Rapid PE-Texas Red Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* | 565 | 600 | 2 Labelings | 1318 | ||
| Buccutite™ Rapid PE-Texas Red Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* | 565 | 600 | 2 Labelings | 1343 | ||
| Buccutite™ Rapid PE-Cy5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* | 565 | 674 | 2 Labelings | 1322 | ||
| Buccutite™ Rapid PE-Cy5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* | 565 | 674 | 2 Labelings | 1340 | ||
| Buccutite™ Rapid PE-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* | 565 | 700 | 2 Labelings | 1316 | ||
| Buccutite™ Rapid PE-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* | 565 | 700 | 2 Labelings | 1341 | ||
| Buccutite™ Rapid PE-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* | 565 | 780 | 2 Labelings | 1317 | ||
| Buccutite™ Rapid PE-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* | 565 | 780 | 2 Labelings | 1342 | ||
| Buccutite™ Rapid PerCP Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* | 482 | 677 | 2 Labelings | 1325 | ||
| Buccutite™ Rapid PerCP Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* | 482 | 677 | 2 Labelings | 1353 | ||
| Buccutite™ Rapid APC Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* | 651 | 665 | 2 Labelings | 1311 | ||
| Buccutite™ Rapid APC Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* | 651 | 665 | 2 Labelings | 1313 | ||
| Buccutite™ Rapid APC-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* | 651 | 700 | 2 Labelings | 1320 | ||
| Buccutite™ Rapid APC-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* | 651 | 700 | 2 Labelings | 1350 | ||
| Buccutite™ Rapid APC-iFluor® 700 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* | 651 | 713 | 2 Labelings | 1319 | ||
| Buccutite™ Rapid APC-iFluor® 700 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* | 651 | 713 | 2 Labelings | 1347 | ||
| Buccutite™ Rapid APC-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* | 651 | 780 | 2 Labelings | 1321 | ||
| Buccutite™ Rapid APC-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* | 651 | 780 | 2 Labelings | 1351 |
| Producto | Fuente de excitación (nm) | Ex (nm) | Em (nm) | Unidad | Cat No. | |
| CytoTell™ Blue | Violet Laser (405 nm) | 410 | 445 | 500 Tests | 22251 | |
| CytoTell™ Violet 500 | Violet Laser (405 nm) | 415 | 499 | 500 Tests | 22248 | |
| CFSE [5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester] | Blue Laser (488 nm) | 498 | 517 | 25 mg | 22022 | |
| ReadiUse™ CFSE [5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester] | Blue Laser (488 nm) | 498 | 517 | 5 x 500 µg | 22028 | |
| CytoTell™ Green | Blue Laser (488 nm) | 510 | 525 | 500 Tests | 22253 | |
| CytoTell™ UltraGreen | Blue Laser (488 nm) | 492 | 519 | 500 Tests | 22240 | |
| CytoTell™ Orange | Green Laser (531 nm) | 541 | 560 | 500 Tests | 22257 | |
| CytoTell™ Red 590 | Green Laser (531 nm) | 560 | 574 | 500 Tests | 22261 | |
| CytoTell™ Red 650 | Red Laser (633/647 nm) | 626 | 643 | 500 Tests | 22255 | |
| CytoTell™ Blue | Violet Laser (405 nm) | 410 | 445 | 2 x 500 Tests | 22252 | |
| CytoTell™ Violet 500 | Violet Laser (405 nm) | 415 | 499 | 1000 Tests | 22249 | |
| CytoTell™ Green | Blue Laser (488 nm) | 510 | 525 | 2 x 500 Tests | 22254 | |
| CytoTell™ UltraGreen | Blue Laser (488 nm) | 492 | 519 | 2 x 500 Tests | 22241 | |
| CytoTell™ Orange | Green Laser (531 nm) | 541 | 560 | 2 x 500 Tests | 22258 | |
| CytoTell™ Red 590 | Green Laser (531 nm) | 560 | 574 | 2 x 500 Tests | 22262 | |
| CytoTell™ Red 650 | Red Laser (633/647 nm) | 626 | 643 | 2 x 500 Tests | 22256 |
| Producto | Ex (nm) | Em (nm) | Espectro | Pruebas | Cat No. |
| Cell Meter™ VX450 fixable viability dye | 406 | 445 | | 200 Tests | 22540 |
| Cell Meter™ VX500 fixable viability dye | 433 | 498 | | 200 Tests | 22542 |
| Cell Meter™ BX520 fixable viability dye | 491 | 516 | | 200 Tests | 22510 |
| Cell Meter™ BX590 fixable viability dye | 492 | 579 | | 200 Tests | 22514 |
| Cell Meter™ BX650 fixable viability dye | 518 | 654 | | 200 Tests | 22520 |
| Cell Meter™ RX660 fixable viability dye | 649 | 664 | | 200 Tests | 22530 |
| Cell Meter™ RX700 fixable viability dye | 690 | 713 | | 200 Tests | 22532 |
| Cell Meter™ RX780 fixable viability dye | 629 | 767 | | 200 Tests | 22536 |
| Cell Meter™ IX830 fixable viability dye | 811 | 822 | | 200 Tests | 22529 |
| ReadiView™ Green/Red Viability Stain | 100 Tests | 22762 |
Kits de tinción Live or Dead™ de células muertas reparables
Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kits employ membrane-impermeant amine-reactive dyes to differentiate live and dead cells during flow cytometry. The dyes provided in each kit can readily permeate compromised membranes of dead cells and covalently bind to both intracellular and extracellular amine-containing proteins resulting in intense fluorescence. While on live cells, the fluorescence signal is negligible as cell surface amine-groups are only avaiable to react with the dye. The difference in signal intensity between live and dead cell populations is signifcant, making it easy to exclude dead cells from analysis. Cells labeled using Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kits can be fixed, permeabilized and probed for intracellular immunophenotyping. AAT Bioquest offers 10 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kits designed to for efficient excitation by major exciation sources including the 350, 405, 488, 532, 561, 633 and 647 nm laser lines, and emit in common channels.
Detección de la viabilidad de las células Jurkat mediante los kits de tinción de células muertas fijables Live or Dead™. Las células Jurkat se trataron, se tiñeron y luego se fijaron en formaldehído al 3,7% y se analizaron mediante citometría de flujo.
Tabla 4. Kits de tinción Live or Dead™ de células muertas fijables para análisis de células vivas/muertas durante la citometría de flujo
Kit Laser (nm) Ex/Em (nm) Multiplex Fijables Pruebas Cat No. Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Blue Fluorescence* UV (350 nm) 353/442 Yes Yes 200 Tests 22600 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Blue Fluorescence with 405 nm Excitation* Violet (405 nm) 410/450 Yes Yes 200 Tests 22500 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Green Fluorescence with 405 nm Excitation* Violet (405 nm) 408/512 Yes Yes 200 Tests 22501 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Green Fluorescence* Blue (488 nm) 498/521 Yes Yes 200 Tests 22601 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Orange Fluorescence with 405 nm Excitation* Violet (405 nm) 398/550 Yes Yes 200 Tests 22502 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Orange Fluorescence* Green/Yellow (532/561 nm) 547/573 Yes Yes 200 Tests 22602 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Red Fluorescence* Yellow (561 nm) 583/603 Yes Yes 200 Tests 22603 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Blue/Green (488/532 nm) 523/617 Yes Yes 200 Tests 22599 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Red (635 nm) 649/660 Yes Yes 200 Tests 22604 Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Red (635 nm) 749/775 Yes Yes 200 Tests 22605
| Kit | Laser (nm) | Ex/Em (nm) | Multiplex | Fijables | Pruebas | Cat No. |
| Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Blue Fluorescence* | UV (350 nm) | 353/442 | Yes | Yes | 200 Tests | 22600 |
| Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Blue Fluorescence with 405 nm Excitation* | Violet (405 nm) | 410/450 | Yes | Yes | 200 Tests | 22500 |
| Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Green Fluorescence with 405 nm Excitation* | Violet (405 nm) | 408/512 | Yes | Yes | 200 Tests | 22501 |
| Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Green Fluorescence* | Blue (488 nm) | 498/521 | Yes | Yes | 200 Tests | 22601 |
| Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Orange Fluorescence with 405 nm Excitation* | Violet (405 nm) | 398/550 | Yes | Yes | 200 Tests | 22502 |
| Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Orange Fluorescence* | Green/Yellow (532/561 nm) | 547/573 | Yes | Yes | 200 Tests | 22602 |
| Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Red Fluorescence* | Yellow (561 nm) | 583/603 | Yes | Yes | 200 Tests | 22603 |
| Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* | Blue/Green (488/532 nm) | 523/617 | Yes | Yes | 200 Tests | 22599 |
| Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* | Red (635 nm) | 649/660 | Yes | Yes | 200 Tests | 22604 |
| Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* | Red (635 nm) | 749/775 | Yes | Yes | 200 Tests | 22605 |
Ensayos de ciclo celular fijo y vivo para citometría de flujo
El análisis de cambios en el contenido de ADN durante la citometría de flujo es un método poderoso que se usa comúnmente para identificar células en diferentes etapas del ciclo celular. Esta técnica utiliza tintes fluorescentes de unión al ADN, que se unen al ADN estequiométricamente, generando una señal de fluorescencia que es directamente proporcional a la cantidad de ADN presente en la célula. De esta manera, cuando la densidad del ADN aumenta a medida que las células avanzan de la fase G1 a la fase G2 del ciclo celular, las células absorberán proporcionalmente hasta que hayan duplicado su contenido de ADN. Como resultado, las células en la fase G2 tendrán una fluorescencia dos veces más intensa que las células en la fase G1.
Perfil de ADN en células Jurkat en crecimiento y tratadas con nocodazol. Las células Jurkat se trataron sin (A) o con 100 ng/ml de nocodazol (B) en una incubadora a 37 °C y 5 % de CO2 durante 24 horas, y luego se cargaron el tinte con Nuclear Green™ LCS1 durante 30 minutos. La intensidad de fluorescencia de Nuclear Green™ LCS1 se midió con un citómetro de flujo ACEA NovoCyte con el canal de FITC. En células Jurkat en crecimiento (A), la tinción nuclear con Nuclear Green™ LCS1 muestra las fases G1, S y G2. En las células G2 detenidas tratadas con nocodazol (B), la frecuencia de las células G2 aumentó drásticamente y la frecuencia de la fase S de G1 disminuyó significativamente.
AAT Bioquest ofrece una selección de 4 ensayos del ciclo celular, 3 de los cuales están diseñados para análisis de células vivas y 1 para células fijadas. Los kits de ensayo fluorimétrico del ciclo celular vivo Cell Meter™ utilizan colorantes de unión al ADN permeables a la membrana para monitorear la progresión y proliferación del ciclo celular, y pueden usarse para investigar los aspectos cinéticos y temporales del ciclo celular. Después de la tinción, las células se pueden fijar y permeabilizar. El kit de ensayo de ciclo celular fijo fluorimétrico Cell Meter™ utiliza nuestro colorante de unión al ADN impermeable a la membrana Nuclear Red™ CCS1. Antes de la tinción, las células deben fijarse o permeabilizarse para que todo el tinte entre en la célula. Cada kit incluye un protocolo de tinción sólido y todos los componentes necesarios para 200 pruebas. AAT Bioquest también ofrece una gran selección de colorantes de unión al ADN independientes para el análisis del ciclo celular, incluidos yoduro de propidio, 7-AAD, DAPI, Hoechst 33342, 33258, S769121, 34580 y TWO-PRO™ 1 y TWO-PRO™ 3. .
Tabla 5. Ensayos de ciclo celular vivo y fijo para citometría de flujoProducto Fuente de excitación (nm) Ex (nm) Em (nm) Pruebas Cat No. Cell Meter™ Fluorimetric Live Cell Cycle Assay Kit *Optimized for 405 nm Violet Laser Excitation* Violet Laser (405 nm) 401 460 100 Tests 22845 Cell Meter™ Fluorimetric Live Cell Cycle Assay Kit *Green Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Blue Laser (488 nm) 503 527 100 Tests 22841 Cell Meter™ Fluorimetric Live Cell Cycle Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Blue Laser (488 nm) 488 615 100 Tests 22860 Cell Meter™ Fluorimetric Fixed Cell Cycle Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Blue/Green Laser (488/532 nm) 537 682 100 Tests 22842
| Producto | Fuente de excitación (nm) | Ex (nm) | Em (nm) | Pruebas | Cat No. |
| Cell Meter™ Fluorimetric Live Cell Cycle Assay Kit *Optimized for 405 nm Violet Laser Excitation* | Violet Laser (405 nm) | 401 | 460 | 100 Tests | 22845 |
| Cell Meter™ Fluorimetric Live Cell Cycle Assay Kit *Green Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* | Blue Laser (488 nm) | 503 | 527 | 100 Tests | 22841 |
| Cell Meter™ Fluorimetric Live Cell Cycle Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* | Blue Laser (488 nm) | 488 | 615 | 100 Tests | 22860 |
| Cell Meter™ Fluorimetric Fixed Cell Cycle Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* | Blue/Green Laser (488/532 nm) | 537 | 682 | 100 Tests | 22842 |
Tabla 6. Kits de seguimiento Cell Explorer™ de células vivas Producto Ex (nm) Em (nm) Pruebas Cat No. Cell Explorer™ Fixable Live Cell Tracking Kit *Green Fluorescence* 488 530 200 Tests 22621 Cell Explorer™ Fixable Live Cell Tracking Kit *Red Fluorescence* 488 610 200 Tests 22625 Cell Explorer™ Live Cell Tracking Kit *Blue Fluorescence* 405 450 200 Tests 22620 Cell Explorer™ Live Cell Tracking Kit *Deep Red Fluorescence* 640 660 200 Tests 22624 Cell Explorer™ Live Cell Tracking Kit *Orange Fluorescence* 488 576 200 Tests 22622 Cell Explorer™ Live Cell Tracking Kit *Red Fluorescence* 488 610 200 Tests 22623
| Producto | Ex (nm) | Em (nm) | Pruebas | Cat No. |
| Cell Explorer™ Fixable Live Cell Tracking Kit *Green Fluorescence* | 488 | 530 | 200 Tests | 22621 |
| Cell Explorer™ Fixable Live Cell Tracking Kit *Red Fluorescence* | 488 | 610 | 200 Tests | 22625 |
| Cell Explorer™ Live Cell Tracking Kit *Blue Fluorescence* | 405 | 450 | 200 Tests | 22620 |
| Cell Explorer™ Live Cell Tracking Kit *Deep Red Fluorescence* | 640 | 660 | 200 Tests | 22624 |
| Cell Explorer™ Live Cell Tracking Kit *Orange Fluorescence* | 488 | 576 | 200 Tests | 22622 |
| Cell Explorer™ Live Cell Tracking Kit *Red Fluorescence* | 488 | 610 | 200 Tests | 22623 |
Ensayo de apoptosis para citometría de flujo
La citometría de flujo es una de las aplicaciones más versátiles y de alto rendimiento para estudiar las complejidades de la apoptosis. No solo permite a los investigadores analizar células individualmente de poblaciones complejas, sino que la naturaleza multiparamétrica de la citometría de flujo permite examinar varios indicadores y marcadores apoptóticos simultáneamente. Con nuestra amplia selección de ensayos de apoptosis por citometría de flujo, investigue cambios en la conformación de la membrana plasmática, la pérdida del potencial de la membrana mitocondrial, la activación de caspasas, la condensación nuclear o utilice una combinación de técnicas para el análisis de apoptosis multiparamétrico.
Ensayos de Anexina V para la detección de apoptosis mediante citometría de flujo.
Los conjugados de anexina V se utilizan habitualmente para investigar la externalización de residuos de fosfatidilserina (PS), una característica clave en la apoptosis en etapa temprana. A medida que las células inician la muerte celular programada, pierden la asimetría de la membrana plasmática y los residuos de PS se trasladan de la valva interna a la externa de la membrana plasmática. La exposición de residuos de PS en la superficie celular se puede detectar por su afinidad por la anexina V, y cuando se pueden usar conjugados de anexina V marcados con fluorescencia para identificar células apoptóticas en citometría de flujo.
Los kits de ensayo de apoptosis de unión de anexina V AAT Bioquest Cell Meter™ ofrecen un método rápido y confiable para medir células apoptóticas basado en la externalización de residuos de PS. Estos kits utilizan un conjugado de anexina V altamente fluorescente y una tinción de ADN impermeable a la membrana para diferenciar entre células vivas, muertas y apoptóticas. De esta manera, las células que son viables muestran poca o ninguna fluorescencia, las células que experimentan apoptosis temprana muestran fluorescencia del conjugado de anexina V y las células muertas muestran un doble marcaje de la tinción de ADN impermeable a la membrana y del conjugado de anexina V. Estos kits se pueden combinar con otros reactivos para el estudio multiparamétrico de la viabilidad celular y la apoptosis.
Características clave de los ensayos de apoptosis de unión a Anexina V Cell Meter™
• Alta sensibilidad: la anexina V marcada con tintes iFluor® o mFluor™ produce señales significativamente más brillantes y fotoestables que Alexa Fluor® y otros conjugados de anexina V espectralmente similares.
• Flexibilidad: amplia selección de conjugados de anexina V independientes o kits de ensayo fáciles de usar que se adaptan a cualquier configuración de instrumento
• Diseño de ensayo conveniente: protocolo simplificado que se puede completar en 30 a 60 minutos
La detección de la actividad de unión del conjugado Anexina V-mFluor™ Violet 450 a fosfatidilserina en células Jurkat. Las células Jurkat se trataron sin (verde) o con estaurosporina 1 µM (rojo) a 37 °C durante 4 horas y luego se trataron con conjugado Anexina V-mFluor™ Violet 450 durante 30 minutos. La intensidad de la fluorescencia se midió utilizando el citómetro de flujo ACEA NovoCyte en el canal Pacific Blue.
Tabla 8. Guía de selección de ensayos Cell Meter™ de apoptosis de unión a Anexina V Annexin V Conjugate Dead Cell Stain Annexin V Conjugate Ex/Em Dead Cell stain Ex/Em Unit Size Cat No. Annexin V-iFluor® 488 PI 490/ 520 nm 534/617 nm 100 Tests 22824 Annexin V-iFluor® 555 None 554/578 nm *** 100 Tests 22825 Annexin V-iFluor® 594 None 590/610 nm *** 100 Tests 22826 Annexin V-iFluor® 647 None 650/668 nm *** 100 Tests 22827 Annexin V-mFluor™ Violet 450 PI 405/450 nm 534/617 nm 100 Tests 22828 Annexin V-mFluor™ Violet 500 PI 414/508 nm 534/617 nm 100 Tests 22829 Annexin V-mFluor™ Violet 550 PI 424/560 nm 534/617 nm 100 Tests 22830 Annexin V-APC PI 651/662 nm 534/617 nm 100 Tests 22837 Annexin V-PE Nuclear Red™ DCS1 565/575 nm 631/651 nm 100 Tests 22838 Annexin V-FITC PI 490/520 nm 534/617 nm 100 Tests 22839
| Annexin V Conjugate | Dead Cell Stain | Annexin V Conjugate Ex/Em | Dead Cell stain Ex/Em | Unit Size | Cat No. |
| Annexin V-iFluor® 488 | PI | 490/ 520 nm | 534/617 nm | 100 Tests | 22824 |
| Annexin V-iFluor® 555 | None | 554/578 nm | *** | 100 Tests | 22825 |
| Annexin V-iFluor® 594 | None | 590/610 nm | *** | 100 Tests | 22826 |
| Annexin V-iFluor® 647 | None | 650/668 nm | *** | 100 Tests | 22827 |
| Annexin V-mFluor™ Violet 450 | PI | 405/450 nm | 534/617 nm | 100 Tests | 22828 |
| Annexin V-mFluor™ Violet 500 | PI | 414/508 nm | 534/617 nm | 100 Tests | 22829 |
| Annexin V-mFluor™ Violet 550 | PI | 424/560 nm | 534/617 nm | 100 Tests | 22830 |
| Annexin V-APC | PI | 651/662 nm | 534/617 nm | 100 Tests | 22837 |
| Annexin V-PE | Nuclear Red™ DCS1 | 565/575 nm | 631/651 nm | 100 Tests | 22838 |
| Annexin V-FITC | PI | 490/520 nm | 534/617 nm | 100 Tests | 22839 |
Nota: Para Cat No. 22825, 22826 y 22827, utilice Nuclear Blue™ DCS1 como tinte de células muertas.
Ensayos de potencial de membrana de mitocondrias para citometría de flujo.
La pérdida del potencial de membrana mitocondrial es una característica distintiva de las primeras etapas de la apoptosis. En la citometría de flujo, se pueden utilizar sondas catiónicas permeables a la membrana para identificar cambios en el potencial de la membrana mitocondrial en tiempo real y discriminar células apoptóticas de poblaciones de células vivas. AAT Bioquest ofrece una amplia selección de reactivos y ensayos dinámicos diseñados para monitorear el potencial de membrana mitocondrial, estos incluyen indicadores radiométricos como JC-10™, indicadores de emisión única y kits de ensayo de potencial de membrana mitocondrial Cell Meter™ optimizados para aplicaciones de citometría de flujo.
JC-10™
AAT Bioquest JC-10™ es un nuevo indicador radiométrico diseñado para monitorear el potencial de la membrana mitocondrial con mayor precisión y sensibilidad que su predecesor JC-1. Al igual que JC-1, JC-10™ exhibe una acumulación dependiente potencial. En células sanas, JC-10™ se acumula selectivamente en las mitocondrias generando agregados J anaranjados que exhiben un amplio espectro de excitación y un máximo de emisión a 590 nm. Por el contrario, en células apoptóticas y necróticas con bajo potencial de membrana mitocondrial, JC-10™ se difunde fuera de las mitocondrias y se generan monómeros de JC-10™, lo que da como resultado un cambio a emisión verde (525 nm). JC-10™ permite la visualización tanto cualitativa como cuantitativa de los cambios potenciales de la membrana mitocondrial, considerando el cambio de la emisión de fluorescencia naranja a verde y la relación de intensidad de fluorescencia, respectivamente. El tinte JC-10™ está disponible como reactivo independiente o en el kit de ensayo de potencial de membrana mitocondrial Cell Meter™ JC-10 *Optimizado para ensayos de citometría de flujo*
Efecto del cambio de potencial de membrana de las mitocondrias inducido por FCCP en células Jurkat. Las células Jurkat se cargaron con tinte con solución de trabajo de tinte JC-10 junto con DMSO (superior) o FCCP 5 µM (bajo) durante 10 minutos. Las intensidades de fluorescencia tanto para los agregados J como para las formas monoméricas de JC-10 se midieron con un citómetro de flujo FACSCalibur (Becton Dickinson) utilizando canales FL1 y FL2. Los datos no compensados (columna izquierda) se compararon con los datos compensados (columna derecha).
Características clave de JC-10™ y del kit de ensayo Cell Meter™ JC-10™
La disminución de la intensidad de fluorescencia de MitoTell™ Red en respuesta al tratamiento con CCCP en células Jurkat. Las células Jurkat se cargaron con MitoTell™ Red solo (azul) o en presencia de CCCP 20 µM (verde) o 50 µM (rojo) durante 30 minutos. La intensidad de fluorescencia de MitoTell™ Red se midió utilizando el citómetro de flujo ACEA NovoCyte en el canal APC.
• Fácil de usar: JC-10™ no precipita cuando se diluye en tampones acuosos, lo que elimina los artefactos.
• Robusto: JC-10™ tiene desviaciones de ensayo más pequeñas debido a su solubilidad mejorada en medios acuosos y su mayor sensibilidad.
• Señal mejorada: JC-10™ tiene una relación señal-fondo más alta que JC-1.
• Sensibilidad mejorada: JC-10™ tiene la capacidad de detectar cambios sutiles en la pérdida de ΔΨm mejor que JC-1 en todas las líneas celulares probadas.
Tintes potenciales de membrana mitocondrial de emisión única
Otros reactivos y ensayos que se pueden utilizar para monitorear dinámicamente los cambios en el potencial de membrana de las mitocondrias incluyen TMRE, TMRM y los kits de ensayo de potencial de membrana de mitocondrias Cell Meter™ disponibles en naranja, rojo y fluorescencia de infrarrojo cercano. En las células sanas con mitocondrias en funcionamiento, estos tintes permeables a la membrana son fácilmente secuestrados por las mitocondrias activas y emiten una fluorescencia brillante. Cuando el potencial de membrana de las mitocondrias colapsa, cesa la acumulación y los colorantes se liberan por todo el citosol, lo que provoca la pérdida de fluorescencia.
Tabla 9. Reactivos y ensayos para monitorear el potencial de membrana mitocondrial durante la citometría de flujoProducto Fuente de excitación (nm) Ex (nm) Em (nm) Medida Cat No. Cell Meter™ JC-10 Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Optimized for Flow Cytometry Assays* Blue Laser (488 nm) 488 530, 575 nm 100 Tests 22801 Cell Meter™ Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Orange Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Blue/Green Laser (488/532 nm) 540 590 100 Tests 22804 Cell Meter™ Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* Red Laser (640 nm) 640 660 100 Tests 22806 Cell Meter™ NIR Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Optimized for Flow Cytometry* Red Laser (633-640 nm) 635 660 100 Tests 22806 JC-1 Blue Laser (488 nm) 515 530 5 mg 22200 JC-1 Blue Laser (488 nm) 515 530 50 mg 22201 JC-10™ Blue Laser (488 nm) 508 524 50 mg 22201 TMRE Green Laser (532 nm) 552 574 25 mg 22220 TMRM Green Laser (532 nm) 552 574 25 mg 22221
| Producto | Fuente de excitación (nm) | Ex (nm) | Em (nm) | Medida | Cat No. |
| Cell Meter™ JC-10 Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Optimized for Flow Cytometry Assays* | Blue Laser (488 nm) | 488 | 530, 575 nm | 100 Tests | 22801 |
| Cell Meter™ Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Orange Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* | Blue/Green Laser (488/532 nm) | 540 | 590 | 100 Tests | 22804 |
| Cell Meter™ Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* | Red Laser (640 nm) | 640 | 660 | 100 Tests | 22806 |
| Cell Meter™ NIR Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Optimized for Flow Cytometry* | Red Laser (633-640 nm) | 635 | 660 | 100 Tests | 22806 |
| JC-1 | Blue Laser (488 nm) | 515 | 530 | 5 mg | 22200 |
| JC-1 | Blue Laser (488 nm) | 515 | 530 | 50 mg | 22201 |
| JC-10™ | Blue Laser (488 nm) | 508 | 524 | 50 mg | 22201 |
| TMRE | Green Laser (532 nm) | 552 | 574 | 25 mg | 22220 |
| TMRM | Green Laser (532 nm) | 552 | 574 | 25 mg | 22221 |