Este kit de ensayo fluorométrico se basa en la detección de cambios en el potencial de la membrana mitocondrial en las células mediante el tinte catiónico lipofílico JC-10.
Descripción
Kit de análisis del potencial de membrana mitocondrial JC-10 de Cell Meter™ Optimizado para ensayos de citometría de flujo
Aunque JC-1 se usa ampliamente en muchos laboratorios, su poca solubilidad en agua causa inconvenientes extraordinarios. Incluso a una concentración de 1 µM, JC-1 tiende a precipitar en un buffer acuoso. JC-10 está desarrollado para ser una alternativa superior a JC-1 donde se desea una alta concentración de colorante.
En comparación con JC-1, JC-10 tiene una mejor solubilidad en agua . JC-10 es capaz de entrar selectivamente en las mitocondrias y cambia reversiblemente su color de verde a naranja a medida que aumentan los potenciales de membrana. Esta propiedad se debe a la formación reversible de agregados JC-10 tras la polarización de la membrana que provoca cambios en la luz emitida de 520 nm (es decir, emisión de forma monomérica JC-10) a 570 nm (es decir, emisión de agregado J). Cuando se excita a 490 nm, el color de JC-10 cambia reversiblemente de verde a naranja verdoso a medida que la membrana mitocondrial se vuelve más polarizada.
Ambos colores se pueden detectar utilizando los filtros montados comúnmente en todos los citómetros de flujo, de modo que se puede analizar la emisión verde en el canal de fluorescencia 1 (FL1) y la emisión naranja verdosa en el canal 2 (FL2). Además de su uso potencial en citometría de flujo, también se puede utilizar en imágenes de fluorescencia y plataforma de microplaca de fluorescencia.
Este kit proporciona todos los componentes esenciales con un método de ensayo optimizado para la detección de apoptosis en células con pérdida del potencial de membrana mitocondrial. Este ensayo fluorométrico se basa en la detección de cambios en el potencial de la membrana mitocondrial en las células mediante el tinte catiónico lipofílico JC-10. En células normales, JC-10 se concentra en la matriz mitocondrial donde forma agregados rojos fluorescentes.
Sin embargo, en células apoptóticas y necróticas, JC-10 existe en forma monomérica y tiñe las células con fluorescencia verde. El kit está optimizado para la detección de activadores e inhibidores de la apoptosis mediante citometría de flujo. También ofrecemos un práctico kit de formato de placa de microtitulación de fluorescencia de 96 y 384 pozos (Cat. No. 22800) para la detección de alto rendimiento.
Nombre en ingles: Cell Meter™ JC-10 Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Optimized for Flow Cytometry Assays*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| 22801 | Kit de análisis del potencial de membrana mitocondrial JC-10 Cell Meter™ optimizado para ensayos de citometria de flujo | 100 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Citómetro de Flujo
| Excitación laser | 488 nm |
| Emisión filtro | 530/30 nm, 575/26 nm |
| Especificaciones Instrumento | Canal FITC, PE |
Componentes
| Componente A: 200X JC-10 in DMSO | 1 vial (250 µL) |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (50 mL) |
Espectro
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Propiedades Espectrales
| Excitación (nm) | 508 |
| Emisión (nm) | 524 |
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 50 µl de 200X JC-10 (componente A) en 5 ml de buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para preparar la solución de trabajo con colorantes JC-10. Proteger de la luz.
Para guias sobre la preparación de muestras de células, visite
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagen
Figura 1. Efecto del cambio de potencial de membrana mitocondrial inducido por FCCP en células Jurkat. Las células Jurkat se cargaron con colorante JC-10 junto con DMSO (superior) o FCCP 5 µM (inferior) durante 10 minutos. Las intensidades de fluorescencia tanto para los agregados J como para las formas monoméricas de JC-10 se midieron con un citómetro de flujo FACSCalibur (Becton Dickinson) usando canales FL1 y FL2. Los datos no compensados (columna izquierda) se compararon con los datos compensados (columna derecha).
Producto Alternativo
Cell Meter™ JC-10 Mitochondrion Membrane Potential Assay Kit *Optimized for Microplate Assays*
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Bibliografías
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