DIBMA Glucosamine, HEPES

Descripción

Con ácido diisobutileno-maleico (DIBMA) puede extraer directamente proteínas de membrana de las células sin un paso intermedio de solubilización con detergente, como con SDS que normalmente interferiría con la función de las proteínas. Otra ventaja de DIBMA como herramienta para la solubilización de proteínas es la falta de un máximo de absorbancia a 280 nm. En comparación con los SMA, esto normalmente interferiría con la cuantificación de proteínas, ya que los aminoácidos aromáticos se absorben en el mismo espectro.

PureCube DIBMA se liofiliza a partir de dos soluciones buffer diferentes (HEPES o TRIS) para garantizar un pH estable de 7.5, que es ideal para la mayoría de las solubilizaciones de proteínas. Una buena publicación para leer aún más detalles sobre DIBMA es Oluwole et al. 2017.

Un desafío cuando se trabaja con DIBMA tradicional es su sensibilidad a la presencia de iones dentro del buffer/medio. La razón de esto es la propia carga de DIBMA que le permite interactuar con estos iones. Esto conduce a la precipitación de DIBMA y por lo tanto a la pérdida de su función. Para superar este problema, modificamos DIBMA para que tenga una carga reducida para reducir drásticamente la afinidad con los iones. Esto se consiguió añadiendo glucosamina o un diol funcionalizado con amino a DIBMA. Este DIBMA modificado se puede utilizar para experimentos en los que la presencia de iones es crucial para su éxito.

Catalogo	Producto	Presentación
CU-18041	DIBMA Glucosamine, HEPES	10 x 50 mg
CU-18042	DIBMA Glucosamine, HEPES	1 g
CU-18061	DIBMA Glucosamine, HEPES	10 x 1g

Caracteristicas

Usage	Protein solubilization
Formula Weight	~10,000 or 12,000 g/mol
pH	7.5 in buffer
dn/dc	1.35 M-1
Solubility	> 10 % in H2O
Absorbance at 280 nm	< 0.3 (1 % solution)
Mg2+ Tolerance	Dependend on DIBMA product Increased with less charged DIBMAs
Ca2+ Tolerance	Dependend on DIBMA product Increased with less charged DIBMAs
Structure

Envio y Almacenamiento

Este producto se envia a temperatura ambiente. Almacenamiento de copolímero disuelto: a 2-8°C. . Almacenamiento de copolímero liofilizado a tiempo largo: a -20°C.

Resultado de Laboratorio

Durante mucho tiempo, la ciencia detrás de las proteínas de membrana se basó en detergentes tanto para la solubilización como para la estabilización. Sin embargo, los detergentes como DDM o LMNG vienen con una serie de problemas. Se puede evitar un proceso de selección que requiere mucho tiempo para encontrar el detergente correcto y la necesidad constante de agregarlo a todos los tampones. Pero esto se aplica a todos los nanodiscos sintéticos.

La Figura 1 muestra la cantidad de proteína de membrana de interés que se estabilizó con un DIBMALP en comparación con una construcción que usaba el detergente DDM. Como se puede ver claramente, DDM tiene muchas menos bandas específicas en los valores de kDA deseados de alrededor de 40-60 kDa.

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Una alternativa a los DIBMA tradicionales y su sensibilidad a la presencia de iones dentro de un tampón, son nuestros DIBMA modificados con glucosamina añadida o diol funcionalizado con amino. Como indica la figura 2, es necesaria una mayor tolerancia de Ca2+. Normalmente, DIBMA comienza a precipitar en tampones de retención de Ca2+ en concentraciones de alrededor de 25 mM. Usando DIBMA-Glicerol esta tolerancia aumenta a 50 mM. No hay precipitado visible en el fondo del tubo. En comparación, el DIBMA normal muestra un precipitado visible a 25 mM. En términos de tolerancia al Mg2+, tanto el DIBMA tradicional como el Glycerol-DIBMA muestran una alta tolerancia por encima de 50 mM.

Fig. 2 Precipitación de DIBMA en relación con la concentración de iones. Las concentraciones que se muestran comienzan en 5 mM y aumentan en pasos de 5 mM hasta 50 mM.

VIDEO

Vea nuestro video sobre cómo el nanodisco puede ayudarlo a superar uno de los desafíos más difíciles en las ciencias de las proteínas.

Bibliografía

STABILIZED PROTEIN	YEAR	AUTHOR
–	2021	Brown C.J. , Trieber C., Overdiun M.13
Env-protein of HIV	2023	Zhou R., Zhang S., Nguyen H.T., Ding H., Gaffney A., Kappes J.C.,Smith Ill A.B.S, Sodroski J.G.

FAQ

– ¿Está el copolimero DIBMA de Cube Biotech listo para usar?

R: Sí, el producto DIBMA está listo para usar. Puede comenzar directamente con la solubilización. Lee nuestro protocolo para más información.

– ¿Qué pH es adecuado para DIBMA?

R: Desde un pH 7.5 en adelante. DIBMA no se solubiliza si el pH es inferior a 6.5.

– ¿Que concentraciones de DIBMA debo usar mi proteína?

R: En general, le recomendamos que agregue un 2.5 % de DIBMA a su solución. Pero las condiciones óptimas las tienes que examinar usted.

– Usé DIBMA para la solubilización de proteínas y apareció un precipitado blanco. ¿Qué pasó?

DIBMA probablemente se precipito. Debe verificar el pH y asegurarse de que nunca baje de 6.5.