Los indicadores Fluo-3 se utilizan ampliamente en citometría de flujo y microscopía de barrido láser confocal.
Descripción
Indicador de calcio Fluo-3, AM *CAS 121714-22-5*
La medición del calcio es fundamental para numerosas investigaciones biológicas. Las sondas fluorescentes que muestran respuestas espectrales al unirse a Ca2+ han permitido a los investigadores investigar cambios en las concentraciones intracelulares de Ca2+ libre mediante el uso de microscopía de fluorescencia, citometría de flujo, espectroscopia de fluorescencia y lectores de microplacas de fluorescencia.
Fluo-3 y Rhod-2 se utilizan con mayor frecuencia entre los indicadores de calcio excitables por luz visible. Los indicadores Fluo-3 se utilizan ampliamente en citometría de flujo y microscopía de barrido láser confocal.
Más recientemente, Fluo-3, AM se ha utilizado ampliamente en ensayos de detección de alto rendimiento basados en células para ensayos de GPCR funcionales. Fluo-3 es esencialmente no fluorescente a menos que esté unido a Ca2+ y exhibe un rendimiento cuántico al saturar Ca2+ de ~0,14 y una Kd para Ca2+ de 390 nM.
Nombre en Ingles: Fluo-3, AM *CAS 121714-22-5*
Catalogo | Producto | Presentación |
---|---|---|
AAT-21010 | Indicador de calcio Fluo-3 AM *Grado Ultrapuro* | 1 mg |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento a <-15 °C. Minimizar exposición a la luz. Producto se entrega con geles.
Plataforma
Microscopio de Fluorescencia
Excitación | FITC |
Emisión | FITC |
Placa recomendada | Pared negra / fondo claro |
Lector de microplacas de Fluorescencia
Excitación | 490 nm |
Emisión | 525 nm |
Cutoff | 515 nm |
Placa Recomendada | Pared negra / fondo claro |
Epecificaciones Instrumento | Modo de lectura inferior/Manejo de líquidos programable |
Calculadora
Preparación de solución madre común
Tabla 1. Volumen de DMSO necesario para reconstituir la masa específica de Fluo-3, AM *CAS 121714-22-5* a la concentración dada. Tenga en cuenta que el volumen es sólo para preparar la solución madre. Consulte el protocolo experimental de muestra para conocer los buffers experimentales/fisiológicos adecuados.
0.1 mg | 0.5 mg | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
1 mM | 88.507 µL | 442.537 µL | 885.073 µL | 4.425 mL | 8.851 mL |
5 mM | 17.701 µL | 88.507 µL | 177.015 µL | 885.073 µL | 1.77 mL |
10 mM | 8.851 µL | 44.254 µL | 88.507 µL | 442.537 µL | 885.073 µL |
Espectro
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Propiedades espectrales
Coeficiente de Extinción (cm -1 M -1) | 860001 |
Excitación (nm) | 506 |
Emisión (nm) | 515 |
Rendimiento cuántico | 0.151 |
Propiedades físicas
Constante de disociación (Kd, nM) | 390 |
Peso Molecular | 1129.85 |
Solvente | DMSO |
Imagen
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Figura 1. Efecto del aumento de [Ca2+]i sobre la localización subcelular de CacyBP/SIP en células SW480 de cáncer de colon. (A) Efecto de diferentes concentraciones de ionomicina sobre la localización de CacyBP/SIP endógena. Las células se trataron con ionomicina durante 30 minutos, seguido de inmunotinción con anti-CacyBP/SIP, y se tomaron imágenes con microscopía confocal. CacyBP/SIP se translocó a la región perinuclear en células SW480. Después de la estimulación con una cantidad creciente de ionomicina (0, 1, 2, 5, 10 μmol/L) durante 30 minutos a 37°C, las células SW480 se fijaron y se inmunotiñeron usando CacyBP/SIP MAb (paneles a, d, g, j , y m), y los núcleos se marcaron con DAPI (paneles b, e, h, k y n). Las imágenes fusionadas se muestran en los paneles c, f, i, l y o. La barra de escala representa 50 μm. (B) La intensidad de la fluorescencia de Ca2+ intracelular libre citosólico en células SW480 tratadas con ionomicina (0, 1, 2, 5, 10 μmol/L). La intensidad de fluorescencia de Fluo-3 en las células SW480 alcanzó una meseta de 5 μmol/L y 10 μmol/L de ionomicina. Se cargaron células SW480 con 20 μmol/l de Fluo-3/AM durante 45 minutos bajo un microscopio confocal (495 nm). La fluorescencia se capturó cada 2 segundos y se registró durante 3 minutos. (C) El gráfico de barras muestra la intensidad intracelular de Fluo-3. La concentración de Ca2+ aumenta con el tratamiento con 2, 5 y 10 μmol/L de ionomicina (***P<0,001). Fuente: El efecto de S100A6 en la translocación nuclear de CacyBP/SIP en células de cáncer de colon por Shanshan Feng et al., PLOS, marzo de 2018.
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Figura 2. Análisis de transitorios espontáneos de calcio. (a) Imagen de fluorescencia de Ca2+ de SVF-CM cargados con el indicador Ca2+ fluo-3/AM. (b) Se produjo una onda transitoria de calcio de la célula indicada por una flecha blanca en el panel “a” mediante un programa MATLAB personalizado. Barra de escala = 50 μm. Fuente: Obtención de células similares a cardiomiocitos que laten espontáneamente a partir de fracciones vasculares estromales derivadas de tejido adiposo cultivadas en hidrogeles de gelatina reticulados con enzimas por Yang et al., Scientific Report, febrero de 2017.
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Figura 3. Estructura quimica de Fluo-3 AM *CAS 121714-22-5*
Productos alternos (upgrades)
Productos similares
Nombre | Excitación (nm) | Emisión (nm) | Coeficiente extinción (cm -1 M -1) | Rendimiento cuántico |
Fluo-3, AM *UltraPure grade* *CAS 121714-22-5* | 506 | 515 | 86,0001 | 0.151 |
Fluo-3, AM *Bulk package* *CAS 121714-22-5* | 506 | 515 | 86,0001 | 0.151 |
Fluo-3FF, AM *UltraPure grade* *Cell permeant* | 506 | 515 | 86,0001 | 0.151 |
Fluo-8H™, AM | 495 | 516 | 23430 | 0.161 |
Fluo-8L™, AM | 495 | 516 | 23430 | 0.161 |
Fluo-8FF™, AM | 495 | 516 | 23430 | 0.161 |
Fluo-5F, AM *Cell permeant* | 494 | 516 | – | – |
Fluo-5N, AM *Cell permeant* | 494 | 516 | – | – |
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Bibliografia
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Referencias
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FAQ
How is cytosolic calcium tested?
How is intracellular calcium measured?
What is a calcium ion?
Are there any calcium indicators that don’t require probenecid (PBC)?
Are there any substitutes for probenecid in calcium assays?
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