Kit de ensayo colorimétrico de peróxido de hidrógeno Amplite® utiliza nuestro exclusivo sustrato de peroxidasa IR Amplite® para cuantificar el peróxido de hidrógeno en soluciones y extractos celulares.
Descripción
Kit de ensayo colorimétrico de peróxido de hidrógeno Amplite®
El peróxido de hidrógeno (H2O2) es un subproducto metabólico del oxígeno reactivo que sirve como regulador clave para una serie de estados relacionados con el estrés oxidativo. Está implicado en una serie de acontecimientos biológicos que se han relacionado con el asma, la aterosclerosis, la vasculopatía diabética, la osteoporosis, una serie de enfermedades neurodegenerativas y el síndrome de Down.
Quizás el aspecto más intrigante de la biología del H2O2 es el informe reciente de que los anticuerpos tienen la capacidad de convertir el oxígeno molecular en peróxido de hidrógeno para contribuir a los procesos normales de reconocimiento y destrucción del sistema inmunológico. La medición de esta especie reactiva ayudará a determinar cómo el estrés oxidativo modula diversas vías intracelulares.
Este kit de ensayo colorimétrico de peróxido de hidrógeno Amplite® utiliza nuestro exclusivo sustrato de peroxidasa IR Amplite® para cuantificar el peróxido de hidrógeno en soluciones y extractos celulares. Tras la oxidación del peróxido de hidrógeno, el Amplite® IR incoloro genera un producto de color azul intenso que es independiente del pH de 4 a 10.
Los ensayos colorimétricos de peróxido de hidrógeno existentes (de otros proveedores) a menudo tienen graves interferencias en las muestras causadas por la absorción inherente de las muestras biológicas. . La absorción del infrarrojo cercano del producto Amplite® IR minimiza el fondo del ensayo que, dado que las muestras biológicas rara vez absorben luz más allá de 600 nm.
También se puede utilizar para detectar una variedad de actividades oxidasas mediante reacciones acopladas a enzimas. El kit es un ensayo optimizado de “mezclar y leer” que es compatible con los instrumentos de manipulación de líquidos HTS.
Nombre en Ingles: Amplite® Colorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-11500 | Amplite® Colorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit | 500 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Componentes
| Componente A: Amplite™ IR Peroxidase Substrate | 1 vial |
| Componente B: H2O2 | 1 vial (3% stabilized solution, 200 μL) |
| Componente C: Assay Buffer | 1 bottle (100 mL) |
| Componente D: Horseradish Peroxidase | 1 vial (20 units) |
| Componente E: DMSO | 1 vial (0.5 mL) |
Plataforma
Lector de Microplacas de Absorbancia
| Absorbancia | 650 nm |
| Placa recomendada | Fondo claro |
PREPARACION DE SOLUCIONES DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solucion madre de sustrato de peroxidasa IR Amplite (100X) Agregue 250 µL de DMSO (Componente E) al vial de sustrato de peroxidasa IR Amplite™ (Componente A).
Solución madre de peroxidasa (20 U/mL):
Agregue 1 ml de buffer de ensayo (componente C) al vial de peroxidasa de rábano picante (componente D).
Solución estándar de H2O2 (20 mM):
Agregue 22,7 µL de H2O2 al 3 % (0,88 M, componente B) en 977 µL de buffer de ensayo (componente C). Nota: la solución de H2O2 diluida no es estable. Las porciones no utilizadas deben desecharse.
PREPARACION DE SOLUCION ESTANDAR
Estándar de H2O2
Para su conveniencia puede usar el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/11500
Agregue 5 µL de solución estándar de H2O2 de 20 mM a 995 µL de buffer de ensayo (Componente C) para obtener un estándar de H2O2 de 100 µM (HS7). Tome 200 l de estándar H2O2 de 100 m para realizar diluciones en serie 1:2 para obtener diluciones en serie del estándar H2O2 (HS6 – HS1).
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 50 µL de solución madre de sustrato de peroxidasa IR Amplite™ (100X) y 200 µL de solución madre de peroxidasa (20 U/mL) a 4,75 ml de buffer de ensayo (Componente C) para obtener un volumen total de 5 ml. Nota: Mantener alejado de la luz.
Para guia sobre la preparación de muestras de células, visite: https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagenes
Figura 1. La respuesta a la dosis de peróxido de hidrógeno se midió en una placa de 96 pocillos de pared blanca/fondo transparente con el kit de ensayo colorimétrico de peróxido de hidrógeno Amplite® utilizando un lector de microplacas de absorbancia Spectramax (Molecular Devices).
Otro Productos
| Name | Excitation (nm) | Emission (nm) |
| Amplite® Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Red Fluorescence* | 571 | 584 |
| Amplite® Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Near Infrared Fluorescence* | 648 | 668 |
Bibliografía
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Referencias
Ver todas las 152 referencias: Citation Explorer
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Specific aquaporins facilitate the diffusion of hydrogen peroxide across membranes
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Simple and rapid determination of hydrogen peroxide using phosphine-based fluorescent reagents with sodium tungstate dihydrate
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Cardioprotective role of endogenous hydrogen peroxide during ischemia-reperfusion injury in canine coronary microcirculation in vivo
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Effect of antisense oligonucleotide against Smac/DIABLO on inhibition of hydrogen peroxide induced myocardial apoptosis of neonatal rats
Authors: Liang PF, Huang XY, Long JH, Xiao MZ, Yang XH, Zhang PH.
Journal: Zhonghua Shao Shang Za Zhi (2006): 175
Application Notes
Dopamine-Mediated Oxidation of Methionine 127 in α-Synuclein
Hydrogen peroxide detection with high specificity in living cells and inflamed tissues
A Library of Well-Defined and Water-Soluble Poly(alkyl phosphonate)s with Adjustable Hydrolysis
Acetylcholinesterase Inhibitory Activity of Pigment Echinochrome A
Ameliorative Effect of Novel Vitamin Formula with Herbal Extracts on Scopolamine-Induced Alzheimer’s Disease
FAQ
Are coumarins water-soluble?
Are NADH and ROS related?
Can I measure NADPH without lysing my cells?
Can I use Amplite Fluorimetric Glutamic Acid Assay Kit with an absorbance microplate reader?
How are fatty acids activated?
AssayWise
Hydrogen Peroxide Detection
Selecting the right ROS probe
Acetylcholinesterase Quantification
Acetylcholinesterase Assays
Glycerol 3-Phosphate Assays