Kit de ensayo colorimétrico de peróxido de hidrógeno Amplite® utiliza nuestro exclusivo sustrato de peroxidasa IR Amplite® para cuantificar el peróxido de hidrógeno en soluciones y extractos celulares.
Descripción
Kit de ensayo fluorimétrico Amplite®de peróxido de hidrógeno Fluorescencia infrarroja cercana
El peróxido de hidrógeno (H2O2) es un subproducto metabólico del oxígeno reactivo que sirve como regulador clave para una serie de estados relacionados con el estrés oxidativo. Está implicado en una serie de acontecimientos biológicos que se han relacionado con el asma, la aterosclerosis, la vasculopatía diabética, la osteoporosis, una serie de enfermedades neurodegenerativas y el síndrome de Down.
Quizás el aspecto más intrigante de la biología del H2O2 es el informe reciente de que los anticuerpos tienen la capacidad de convertir el oxígeno molecular en peróxido de hidrógeno para contribuir a los procesos normales de reconocimiento y destrucción del sistema inmunológico. La medición de esta especie reactiva ayudará a determinar cómo el estrés oxidativo modula diversas vías intracelulares.
Este kit de ensayo de peróxido de hidrógeno Amplite® utiliza nuestro exclusivo sustrato de peroxidasa IR Amplite® para cuantificar el peróxido de hidrógeno en soluciones y extractos celulares. Amplite® IR genera fluorescencia que es independiente del pH de 4 a 10. Por lo tanto, es una alternativa superior al ADHP (Amplex Red™) para las detecciones que requieren un pH bajo donde ADHP (Amplex Red™) tiene una fluorescencia reducida.
Además, Amplite® IR genera un producto que tiene una absorción máxima de 647 nm con una emisión máxima a 670 nm. Esta absorción y fluorescencia del infrarrojo cercano minimizan el fondo del ensayo que a menudo es causado por la autofluorescencia de muestras biológicas que rara vez absorben luz más allá de 600 nm.
También se puede utilizar para detectar una variedad de actividades oxidasas mediante reacciones acopladas a enzimas. El kit es un ensayo optimizado de “mezclar y leer” que es compatible con los instrumentos de manipulación de líquidos HTS.
Nombre en Ingles: Amplite® Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Near Infrared Fluorescence*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-11502 | Kit de ensayo fluorimétrico Amplite®de peróxido de hidrógeno | 500 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Componentes
| Componente A: Amplite™ IR Peroxidase Substrate | 1 vial |
| Componente B: H2O2 | 1 vial (3% stabilized solution, 200 μL) |
| Componente C: Assay Buffer | 1 bottle (100 mL) |
| Componente D: Horseradish Peroxidase | 1 vial (20 units) |
| Componente E: DMSO | 1 vial (0.5 mL) |
Plataforma
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 640 nm |
| Emisión | 680 nm |
| Cutoff | 665 nm |
| Placa recomendada | Negra solida |
PREPARACION DE SOLUCIONES DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solucion madre de sustrato de peroxidasa IR Amplite (100X) Agregue 250 µL de DMSO (Componente E) al vial de sustrato de peroxidasa IR Amplite™ (Componente A). Nota: El sustrato de peroxidasa Amplite™ IR (componente A) es inestable en presencia de tioles como DTT y β mercaptoetanol. Si la concentración final de los tioles es superior a 10 µM, disminuiría significativamente el rango dinámico del ensayo.
Solución madre de peroxidasa (20 U/mL):
Agregue 1 ml de buffer de ensayo (componente C) al vial de peroxidasa de rábano picante (componente D) para preparar una solución madre de peroxidasa de 20 U/ml.
Solución estándar de H2O2 (20 mM):
Agregue 22,7 µL de H2O2 al 3 % (0,88 M, componente B) en 977 µL de buffer de ensayo (componente C) para preparar una solución estándar de H2O2 de 20 mM. Nota: la solución de H2O2 diluida no es estable. Las porciones no utilizadas deben desecharse.
PREPARACION DE SOLUCION ESTANDAR
Estándar de H2O2
Para su conveniencia puede usar el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/11502
Agregue 1 µL de solución estándar de H2O2 de 20 mM a 1999 µL de buffer de ensayo (Componente C) para obtener un estándar de H2O2 de 10 µM (HS7). Tome el estándar de H2O2 10 µM (HS7) y realice diluciones en serie 1:3 para obtener el estándar de H2O2 diluido en serie (HS6 – HS1) con tampón de ensayo (componente C).
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 50 µL de solución madre de sustrato de peroxidasa IR 100X Amplite™ y 200 µL de solución madre de peroxidasa de 20 U/mL a 4,75 ml de buffer de ensayo (Componente C) para preparar una solución de trabajo de H2O2 . Mantener alejado de la luz.
Para guia sobre la preparación de muestras de células, visite: https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagenes
Figura 1. La respuesta a la dosis de peróxido de hidrógeno se midió en una placa negra sólida de 96 pocillos con el kit de ensayo fluorimétrico de peróxido de hidrógeno Amplite®.
Otro Productos
| Name | Excitation (nm) | Emission (nm) |
| Amplite® Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Red Fluorescence* | 571 | 584 |
Bibliografía
Pleiotropic Microenvironment Remodeling Micelles for Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury Therapy by Inhibiting Neuronal Ferroptosis and Glial Overactivation
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Redox-channeling polydopamine-ferrocene (PDA-Fc) coating to confer context-dependent and photothermal antimicrobial activities
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VMAT2 Safeguards $\beta$-Cells Against Dopamine Cytotoxicity Under High-Fat Diet–Induced Stress
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Suppressing hydrogen peroxide generation to achieve oxygen-insensitivity of a [NiFe] hydrogenase in redox active films
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Authors: Yi, Zhengjun and Wang, Shuhui and Meng, Xiangying and Wu, Anqi and Li, Qian and Song, Yongjie and Zhao, Ronglan and Qiao, Jinjuan
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Inhibitory Effects of Free and Nano-Liposomal-Loaded Resveratrol on Sodium Nitroprusside-Induced Rabbit Chondrocyte Apoptosis
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Referencias
Ver todas las 152 referencias: Citation Explorer
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Fluorescent quenching method for determination of trace hydrogen peroxide in rain water
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A parallel proteomic and metabolomic analysis of the hydrogen peroxide- and Sty1p-dependent stress response in Schizosaccharomyces pombe
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Comparative effects of alpha-tocopherol and gamma-tocotrienol against hydrogen peroxide induced apoptosis on primary-cultured astrocytes
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Enzymatic oxidation of dipyridamole in homogeneous and micellar solutions in the horseradish peroxidase-hydrogen peroxide system
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Specific aquaporins facilitate the diffusion of hydrogen peroxide across membranes
Authors: Bienert GP, Moller AL, Kristiansen KA, Schulz A, Moller IM, Schjoerring JK, Jahn TP.
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Simple and rapid determination of hydrogen peroxide using phosphine-based fluorescent reagents with sodium tungstate dihydrate
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Cardioprotective role of endogenous hydrogen peroxide during ischemia-reperfusion injury in canine coronary microcirculation in vivo
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Effect of antisense oligonucleotide against Smac/DIABLO on inhibition of hydrogen peroxide induced myocardial apoptosis of neonatal rats
Authors: Liang PF, Huang XY, Long JH, Xiao MZ, Yang XH, Zhang PH.
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Application Notes
Dopamine-Mediated Oxidation of Methionine 127 in α-Synuclein
Hydrogen peroxide detection with high specificity in living cells and inflamed tissues
A Library of Well-Defined and Water-Soluble Poly(alkyl phosphonate)s with Adjustable Hydrolysis
Acetylcholinesterase Inhibitory Activity of Pigment Echinochrome A
Ameliorative Effect of Novel Vitamin Formula with Herbal Extracts on Scopolamine-Induced Alzheimer’s Disease
FAQ
Are coumarins water-soluble?
Are NADH and ROS related?
Can I measure NADPH without lysing my cells?
Can I use Amplite Fluorimetric Glutamic Acid Assay Kit with an absorbance microplate reader?
How are fatty acids activated?
AssayWise
Hydrogen Peroxide Detection
Selecting the right ROS probe
Acetylcholinesterase Quantification
Acetylcholinesterase Assays
Glycerol 3-Phosphate Assays