El kit de tinción de lisosomas Cell Navigator® en particular está diseñado para etiquetar lisosomas de células vivas en fluorescencia verde.
Descripción
Kit de tinción de lisosomas Cell Navigator® fluorescencia verde, excitación de 405nm
Nuestros kits de imágenes de fluorescencia Cell Navigator® son un conjunto de herramientas de imágenes de fluorescencia para etiquetar orgánulos subcelulares como membranas, lisosomas, mitocondrias y núcleos, etc.
El etiquetado selectivo de compartimentos de células vivas proporciona un método poderoso para estudiar eventos celulares en un contexto espacial y temporal. Este kit en particular está diseñado para etiquetar lisosomas de células vivas en fluorescencia verde. El kit utiliza un tinte lisotrópico patentado que se acumula selectivamente en los lisosomas probablemente a través del gradiente de pH de los lisosomas.
El indicador lisotrópico es un compuesto hidrofóbico que permea fácilmente las células vivas intactas y queda atrapado en los lisosomas después de ingresar a las células. Su fluorescencia mejora significativamente al ingresar a los lisosomas. Esta característica clave aumenta significativamente su selectividad para los lisosomas.
El protocolo de etiquetado es sólido y requiere un tiempo mínimo de práctica. Se puede adaptar fácilmente para una amplia variedad de plataformas de fluorescencia, como ensayos de microplacas, inmunocitoquímica y citometría de flujo. Es útil para una variedad de estudios, incluidos la adhesión celular, la quimiotaxis, la resistencia a múltiples fármacos, la viabilidad celular, la apoptosis y la citotoxicidad.
El kit proporciona todos los componentes esenciales con un protocolo de marcaje celular optimizado. Es adecuado para células proliferantes y no proliferantes, y se puede utilizar tanto para células en suspensión como para células adherentes.
Este kit está optimizado para citómetros de flujo equipados con excitación láser violeta a 405 nm y emisión alrededor de 500 nm.
Nombre en ingles: Cell Navigator® Lysosome Staining Kit *Green Fluorescence with 405 nm Excitation*
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| 22651 | Kit de tinción de lisosomas Cell Navigator® fluorescencia verde, excitación de 405nm | 500 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Microscopio de Fluorescencia
| Excitación | 405 nm |
| Emisión | 480 nm |
| Placa recomendada | Pared negra / fondo claro |
| Especificaciones instrumento | Juego de filtros Violeta |
Componentes
| Componente A: LysoBrite™ VLG26 | 1 vial (100 µL, 500X DMSO stock solution) |
| Componente B: Live Cell Staining Buffer | 1 botella (50 mL) |
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 20 µL de solución madre 500X LysoBrite™ VLG26 (Componente A) a 10 mL de buffer de tinción de células vivas (Componente B) y mezcle bien para preparar la solución de trabajo LysoBrite™ VLG26. Protéjalo de la luz. Nota: 20 µL de solución madre 500X LysoBrite™ VLG26 (Componente A) son suficientes para una placa de 96 pocillos. La concentración óptima del indicador fluorescente de lisosomas varía según la aplicación específica. Las condiciones de tinción se pueden modificar según el tipo de célula en particular y la permeabilidad de las células o tejidos a la sonda.
PREPARACION DE CELULAS
Para guias en la preparacion de muestras celulares, por favor visite: https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagenes
Figura 1. Imagen de células U2OS teñidas con el kit de tinción lisosomal Cell Navigator® en una placa Costar de 96 pocillos con pared negra y fondo transparente.
Figura 2. Para determinar si la genisteína o la PP2 alteran la distribución de las partículas BmCPV internalizadas, utilizamos microscopía confocal para localizar viriones BmCPV internalizados y lisosomas. La genisteína y la PP2 dirigen a BmCPV al destino equivocado: los lisosomas. (a) Las células BmN normales (control) se incubaron con viriones BmCPV marcados con A546 y un agente de tinción lisosomal durante 3 h; (b) Las células BmN se trataron con PP2 (0,16 μM) durante 30 min, seguido de una incubación con viriones BmCPV marcados con A546 y un agente de tinción lisosomal durante 3 h;
(c) Las células BmN se trataron con genisteína (50 μg/mL) durante 1 h, seguida de una incubación con viriones de BmCPV marcados con A546 y un agente de tinción lisosomal durante 3 h; (d) cuantificación de la superposición espectral de partículas de BmCPV con lisosomas. La superposición espectral se presenta como el porcentaje de colocalización (n = 21 células). Las barras de error indican desviaciones estándar. ***P < 0,001. Fuente: Clathrin-mediated endocytosis is a candidate entry sorting mechanism for Bombyx mori cypovirus por Chen et al., Scientific Reports, mayo de 2018.
Figura 3. Colocalización de BAPC con dsRNA en lisosomas. Se combinaron 2,5 μg de dsRNA con 50 μM de BAPC y se incubaron con células Sf9 durante 1 h. Los lisosomas se tiñeron con Cell Navigator. Se utilizó microscopía confocal para comprobar la colocalización de los complejos en los lisosomas. (A) Representación esquemática de las vías endocíticas y el proceso de maduración de los endosomas. (B) Rh–BAPC (rojo), (C) lisosomas (verde), (D) campo claro y (E) imagen de fusión que muestra la colocalización de BAPC y lisosomas (amarillo).
Fuente: Insight into Cellular Uptake and Transcytosis of Peptide Nanoparticles in Spodoptera frugiperda Cells and Isolated Midgut de McGraw et. al., ACS Omega, marzo de 2022.
Formatos Alternativos
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Bibliografia
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Referencias
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