El kit iFluor® 350 PSA™ con cabra anti-conejo IgG y es un reemplazo muy superior para el kit basado en tiramida Alexa Fluor 350 u otros kits de tiramida fluorescente o TSA espectralmente similares.
Descripción
Kit de imágenes iFluor® 350 PSA™ con cabra anti-conejo IgG
El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados.
En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC.
El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.
En comparación con los reactivos de tiramida, los conjugados Styramide™ tienen la capacidad de marcar el objetivo con mayor eficiencia y, por lo tanto, generar una señal de fluorescencia significativamente mayor. Los conjugados de Styramide™ también permiten un consumo significativamente menor de anticuerpo primario en comparación con el método de conjugado directo estándar o la amplificación de tiramida con el mismo nivel de sensibilidad.
El kit iFluor® 350 PSA es un reemplazo muy superior para el kit basado en tiramida Alexa Fluor 350 u otros kits de tiramida fluorescente o TSA espectralmente similares.
Nombre en ingles: iFluor® 350 PSA™ Imaging Kit with Goat Anti-Rabbit IgG
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-45200 | Kit de imágenes iFluor® 350 PSA™ con cabra anti-conejo IgG | 100 pruebas |
Importante, Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento a largo plazo: Congelar a < -15 °C. Minimizar la exposición a la luz.
Plataforma
Microscopio de Fluorescencia
| Excitación | Juego de filtros DAPI |
| Emisión | Juego de filtros DAPI |
| Placa recomendada | Pared negra/fondo transparente |
| Especificaciones instrumento | Juego de filtros DAPI |
Componentes
| Componente A: iFluor™ 350 Styramide™ conjugate | 1 vial (polvo liofilizado) |
| Componente B: Styramide™ Reaction Buffer | 1 botella (10 mL) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (100 µL) |
| Componente D: Secondary Antibody-HRP (Goat Anti-Rabbit IgG-HRP) | 1 vial (100 µL) (100X) |
| Componente E: Stabilized 3% Hydrogen Peroxide (H2O2) | 1 botella (11 mL) |
Espectro
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Propiedades Espectrales
| Factor de corrección (260 nm) | 0.83 |
| Factor de corrección (280 nm) | 0.23 |
| Coeficiente de extinción (cm -1 M -1) | 200001 |
| Excitación (nm) | 345 |
| Emisión (nm) | 450 |
| Rendimiento cuántico | 0.951 |
Preparación de Soluciones de Stock
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
1. Solución madre de Styramide™ (100X)
Agregue 100 µL de DMSO en el vial de conjugado de Styramide™marcado con iFluor™ 350 (Componente A) para preparar una solución madre de Styramide™ 100X. Nota: Haga alícuotas de un solo uso y almacene la solución madre 100X sin usar a 2-8 °C en un lugar oscuro y evite repetir los ciclos de congelación y descongelación.
2. Solución de H2O2 (100X)
Agregue 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3% (Componente E) a 9 mL de ddH2O. Nota: Prepare la solución 100X H2O2 fresca el día de su uso.
Preparación de Soluciones de Trabajo
1. Solución de trabajo de Styramide™ (1X)
Cada 1 ml de buffer de reacción requiere 10 µl de solución madre de Styramide™ y 10 µl de solución madre de H2O2. Nota: El Styramide™ proporcionado es suficiente para 100 pruebas basadas en 100 µL de solución de trabajo de Styramide™ necesarios por cubreobjetos o por pocillo en una microplaca de 96 pocillos. Nota: La solución de trabajo Styramide™ debe usarse dentro de las 2 horas posteriores a la preparación y evitar la exposición directa a la luz
2. Solución de H2O2 (100X)
Agregue 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3% (Componente E) a 9 mL de ddH2O. Nota: Prepare la solución 100X H2O2 fresca el día de su uso.
Calculadora
Preparación de la solución de stock común
Volumen de DMSO necesario para reconstituir la masa específica de iFluor® 350 PSA™ Imaging Kit con Goat Anti-Rabbit IgG a la concentración dada. Tenga en cuenta que el volumen es solo para preparar la solución madre. Consulte el protocolo experimental de muestra para conocer los buffers experimentales/fisiológicos apropiados.
| 0.1 mg | 0.5 mg | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 107.396 µL | 536.982 µL | 1.074 mL | 5.37 mL | 10.74 mL |
| 5 mM | 21.479 µL | 107.396 µL | 214.793 µL | 1.074 mL | 2.148 mL |
| 10 mM | 10.74 µL | 53.698 µL | 107.396 µL | 536.982 µL | 1.074 mL |
Imagenes
Figura 1. El sistema Power Styramide™ Signal Amplification (PSA™) es uno de los métodos más sensibles que pueden detectar objetivos de abundancia extremadamente baja en células y tejidos con una señal de fluorescencia mejorada de 10 a 50 veces mayor que los reactivos de tiramida (TSA) ampliamente utilizados . En combinación con nuestros colorantes superiores iFluor® que tienen mayor intensidad de fluorescencia, mayor fotoestabilidad y mayor solubilidad en agua, los conjugados de Styramide™ marcados con colorantes iFluor® pueden generar señales de fluorescencia con una precisión y sensibilidad significativamente mayores (más de 100 veces) que el estándar ICC/ IF/IHC. El PSA utiliza la actividad catalítica de la peroxidasa de rábano picante (HRP) para la deposición covalente de fluoróforos in situ. Los radicales PSA tienen una reactividad mucho mayor que los radicales tiramida, lo que hace que el sistema PSA sea mucho más rápido, robusto y sensible que los reactivos TSA tradicionales.
Figura 2. Imágenes de fluorescencia de células HeLa marcadas con anticuerpo primario anti-tubulina de conejo. A continuación, las células se tiñeron con un anticuerpo secundario IgG anti-conejo de cabra marcado con HRP seguido de iFluor® 350 Styramide™ (izquierda) o Alexa Fluor® 350 tiramida (centro y derecha), respectivamente. Las imágenes de fluorescencia se tomaron utilizando el conjunto de filtros DAPI y el tiempo de exposición se marcó en consecuencia. iFluor® 350 Styramide™ muestra una intensidad de fluorescencia significativamente mayor que Alexa Fluor® 350 tyramide si se encuentra bajo el mismo tiempo de exposición (25 ms). La tiramida Alexa Fluor® 350 requiere un tiempo de exposición superior (125 ms) para visualizar la tinción.
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Annexin V
FAQ
Are there any alternatives to BrdU (Bromodeoxyuridine)?
Are there any alternatives to Cy5?
Are there any alternatives to indocyanine green (ICG)?
Can DAPI bind to RNA?
Can DAPI stain dead cells?
AssayWise (en Ingles)
HRP Antibody Labeling Using Buccutite™ Crosslinking Technology
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Peroxidase Detection
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