PureCube Ni-NTA MagBeads, estas perlas fueron desarrolladas para la purificación por afinidad de proteínas portadoras de etiqueta de polihistidina.
Descripción
Las perlas magnéticas PureCube Ni-NTA / MagBeads fueron desarrolladas por Cube Biotech para la purificación de proteínas His-tag. Nuestra experiencia de un año en la fabricación de resina de agarosa condujo al alto rendimiento de 80 mg de proteína por ml de resina, que es líder en el mercado en comparación con otros proveedores de Ni-NTA.
Los productos Ni-NTA de Cube Biotech también están disponibles como perlas de resina de agarosa o como perlas magnéticas XL. Para su comodidad, Cube Biotech también ofrece su propio separador MagBead para usar con nuestras perlas magnéticas.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| CU-31201 | PureCube Ni-NTA MagBeads, 30µm | 1 ml |
| CU-31205 | PureCube Ni-NTA MagBeads, 30µm | 5 ml |
| CU-31215 | PureCube Ni-NTA MagBeads, 30µm | 25 ml |
| CU-31290 | PureCube Ni-NTA MagBeads, 30µm | 4 x 25ml |
Hojas de Datos / Protocolos
- Ni-NTA MagBeads Datasheet
- Native Purification Protocol
- Denaturing Purification Protocol
- Washing & Regeneration Protocol
- His-tag Westernblot Protocol
Caracteristicas
| Usage | Specific binding and purification of 6x His tagged proteins |
| Specificity | Affinity to His tagged proteins |
| Binding capacity | >80 mg/ml |
| Bead Ligand | Ni-NTA |
| Bead size | 30 μm |
| Chelator stability | Stable in buffer containing 10 mM DTT and 1 mM EDTA |
| Filling quantity | Delivered as a 25 % suspension |
| pH stability | 2-14 |
| Other stabilities | 100% methanol, 100% ethanol, 8 M urea, 6 M guanidinium hydrochloride, 30% (v/v) acetonitrile |
Envio y Almacenamiento
Este producto se envia a temperatura ambiente. Almacenamiento de corto plazo: En buffer neutral a 4°C.. Almacenamiento a largo plazo: En buffer neutral con 20% etanol a 4°C.
Resultado de Laboratorio
Alto rendimiento y pureza
Nuestro exclusivo proceso de producción produce una agarosa Ni-NTA que exhibe una capacidad de unión a proteínas > 20 % más alta que la de dos productos líderes de la competencia. La Figura 1 muestra la SDS-PAGE de GFP expresada en E. coli y purificada en columnas de gravedad con PureCube Ni-NTA Agarosa y la resina Ni-NTA de Competitor G y Competitor Q. El rendimiento de proteína en 4 eluciones (E1-E4, Cube ) fue de 80 mg/mL, en comparación con 65 y 48 mg/mL obtenidos con las resinas alternativas (E1-E4, Competidor G, Competidor Q). Se obtuvieron resultados similares (10-18 % más de capacidad de unión; datos no mostrados aquí) al comparar la purificación de JNK1 (quinasa, 48 kDa) en PureCube Ni-NTA y Ni-NTA de proveedores líderes.
Figura 1: Más de un 20 % más de rendimiento obtenido con PureCube Ni-NTA Agarose. SDS-PAGE de GFP expresada en E. coli y purificada en columnas de gravedad con agarosa PureCube Ni-NTA y resina Ni-NTA del competidor Q. Se obtuvo un rendimiento de proteína de 80 mg/mL con agarosa PureCube Ni-NTA (E1–E4, Cube ) en comparación con 65 y 48 mg/mL, respectivamente, con las resinas alternativas G y Q ampliamente utilizadas (E1–E4, Competitor G / Competitor Q).
Estabilidad superior de DTT y EDTA
La agarosa PureCube Ni-NTA es muy robusta en presencia de DTT y EDTA. En una prueba de estabilidad, la agarosa PureCube Ni-NTA se expuso a concentraciones crecientes de DTT o EDTA durante 1 h. Posteriormente, las resinas se usaron para purificar GFP-His expresada en E. coli en columnas de gravedad. La capacidad de unión de la resina disminuyó en presencia tanto de DTT como de EDTA, pero la velocidad de descomposición fue superficial. En presencia de DTT, la agarosa PureCube Ni-NTA perdió en promedio un 8 % de capacidad de unión con cada aumento en la concentración de DTT, lo que resultó en una disminución general del 22 % a 10 mM. Incluso con EDTA 1,5 mM, la resina aún exhibe el 54 % de su capacidad de unión máxima (Fig. 2).
Figura 2: NTA es robusto en presencia de agentes reductores y quelantes. GFP-His se purificó en columnas de gravedad que contenían agarosa PureCube Ni-NTA después de exponer la resina durante 1 h a 3 concentraciones de DTT o EDTA. NTA exhibe una tasa de descomposición poco profunda en la capacidad de unión.
Robusto contra la oxidación y regenerable
La agarosa PureCube Ni-NTA conserva su color y función después de la exposición a DTT de hasta 10 mM. La Figura 3 muestra una serie de fotos de la resina después de una exposición de 1 h a DTT 5 mM. A diferencia de otras resinas, la agarosa PureCube Ni-NTA no se volvió marrón (A). La resina aún podía unirse a GFP (B), con una capacidad de unión medida de 65 mg/mL (ver Fig. 2). Luego, la resina podría regenerarse quitando el NTA, volviendo la resina blanca (C) y recargándola con iones de níquel (D). El protocolo para regenerar PureCube Ni-NTA Agarosa se puede descargar.
Figura 3: PureCube Ni-NTA Agarose es resistente a la oxidación y regenerable. La agarosa PureCube Ni-NTA se expuso a DTT 5 mM durante 1 h (A). Después de demostrar que aún podía unirse a GFP (B), la resina se lavó, se decaparon (C) y se recargaron con Ni2+ (D) siguiendo el protocolo estándar de Cube (ver Protocolos y hojas de datos de Cube).
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FAQ
– ¿Cuáles son las razones de la unión no específica?
R: Aunque Co-NTA es la forma más pura de purificación de etiquetas His, algunas proteínas no deseadas aún pueden unirse a las perlas. Pero el lavado con NaOH después de la elución de la proteína de interés elimina las proteínas unidas inespecíficas de la resina.
– Quiero usar una alta concentración de EDTA y DTT. ¿Es posible utilizar Ni-NTA de Cube Biotech?
R: No, no se recomienda porque los iones de cobalto se reducen con DTT o se disuelven con EDTA. Si desea utilizar altas concentraciones de EDTA y DTT, debe utilizar nuestra resina Indigo.
-¿Cómo es la capacidad de flujos elevados?
R: Si se desean velocidades de flujo más altas, recomendamos usar perlas con diámetros más grandes.
Ofrecemos perlas de Co-NTA con diámetros medios de 40 µm, 100 µm y 400 µm (XL).
Con cada aumento de tamaño, las velocidades de flujo también aumentan debido al espacio proporcionalmente creciente entre las perlas. Sin embargo, la superficie de las perlas no aumenta a la misma velocidad que el diámetro (ley del cuadrado-cubo). Eso da como resultado cantidades decrecientes de proteína purificada por ml de perlas mientras aumenta el tamaño de las perlas.
Para 40 µm de perlas de 100 µm, ambos tenemos cantidades de purificación promedio de ~30 µg de proteína/mL de perlas. Con perlas de 400 µm (XL), esto disminuye a una cantidad no especificada.
Recomendamos leer el apartado correspondiente de la guía “Introducción a las matrices de agarosa” sobre este tema para obtener información más detallada.
– Después de usar DTT mi resina cambió de color. ¿Cómo regenerarlo?
R: Seguramente la TDT ha dañado las perlas. Las perlas de Co-NTA solo tienen una tolerancia DTT limitada de aproximadamente 1 mM. Sin embargo, puede regenerarlos para recuperar su funcionalidad. Lea nuestro protocolo detallado para obtener más información al respecto.
Sin embargo, recomendamos usar productos Ni-INDIGO en su lugar. Trabajan con los mismos buffers y protocolos que los productos Ni-NTA pero tienen una tolerancia DTT de 20 mM.
Bibliografía
Descargo de responsabilidad:
Nuestros productos están destinados para investigación en aplicaciones de biología molecular. Estos productos no están destinados al diagnóstico, prevención o tratamiento de una enfermedad.
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