Perlas Magnéticas PureCube Fe-NTA

Descripción

Estas Magnetic beads se desarrollaron para el enriquecimiento de proteínas fosforiladas. También se pueden utilizar para la purificación de sus proteínas etiquetadas como función secundaria. La matriz de afinidad se basa en un 6 % de agarosa reticulada magnetizada. El ligando de la perla es Fe-NTA y el diámetro de la partícula es de 30 µm. Son muy homogéneos en tamaño, dando un alto grado de reproducibilidad. El enriquecimiento de fosfopéptidos se puede automatizar como ya se ha demostrado en este trabajo.

Como alternativa también ofrecemos la resina de agarosa PureCube Fe-NTA y dicha resina preenvasada en cartuchos/columnas.

Catalogo	Producto	Presentación
CU-31501-Fe	Perlas Magneticas PureCube Fe-NTA	1 ml
CU-31590-Fe	Perlas Magneticas PureCube Fe-NTA	4 x 25 ml
CU-31505-Fe	Perlas Magneticas PureCube Fe-NTA	5 ml
CU-31525-Fe	Perlas Magneticas PureCube Fe-NTA	25 ml

Este protocolo está escrito para el uso de perlas magnéticas. Úselo como referencia para crear un protocolo de resina de agarosa correspondiente.

Envio y Almacenamiento

El producto se envia a temperatura ambiente. Almacenamiento a corto plazo es en buffer de equilibrio (ver protocolo). Almacenamiento a largo plazo es en etanol al 20 % a 4 °C.

Caracteristicas

Uso	Enriquecimiento de fosfopéptidos Unión específica y purificación de proteínas marcadas con 6x His
Especificidad	Afinidad a biomoléculas fosforiladas Afinidad a las proteínas marcadas con His
Bead ligand	Fe-NTA
Tamaño perla	30 µm
Filling quantity	Entrega como una suspensión del 25%
Matrix	7.5% crosslinked agarose
Chelator stability	Estable en buffer conteniendo 10 mM DTT y 1 mM EDTA
Estabilidad pH	2-14
Otras estabilidades	100% methanol, 100% ethanol, 8 M urea, 6 M guanidinium hydrochloride, 30% (v/v) acetonitrile

Resultado de Laboratorio

Fosfoproteómica automática para proyectos de alto rendimiento.

Se ha demostrado que las perlas magnéticas Fe-NTA de Cube Biotech aumentan drásticamente la velocidad de un experimento de alto rendimiento. Leutert et al. (2019) presentaron la aplicación de PureCube Fe-NTA MagBeads en un procedimiento que llamaron R2-P2, que es la abreviatura de Rapid-Robotic PhosphoProteomics. Utilizaron un KingFisherTM Flex para sus ejecuciones robóticas para automatizar completamente el proceso de enriquecimiento de fosfopéptidos.

Figura 1: Representación esquemática de la configuración de un ensayo R2-P2 utilizando un KingFisherTM Flex. La configuración robótica permite la carga de ocho placas de 96 pozos diferentes. Cada placa se puede girar a su posición debajo de un cabezal magnético de 96 pines que cae dentro de la placa de 96 pocillos para liberar, unir o agitar las microesferas magnéticas en solución. En la primera ejecución robótica, los péptidos se capturan de los lisados mediante perlas magnéticas carboxiladas, se purifican y se eluyen mediante digestión a 37 °C. Los péptidos eluidos se secan y se pueden resuspender para el análisis del proteoma total mediante LC-MS/MS y/o para el enriquecimiento automático de fosfopéptidos. Los fosfopéptidos se enriquecen mediante una segunda ejecución robótica en KingFisherTM Flex, utilizando microesferas magnéticas de Fe-IMAC, Ti-IMAC, Zr-IMAC o TiO2, y se analizan mediante LC-MS/MS para obtener el fosfoproteoma. Fuente: Leutert et al. (2019)

Superioridad sobre otros métodos de enriquecimiento de fosfopéptidos

Leutert et al. compararon tres tipos diferentes de microesferas IMAC (incluida nuestra PureCube Fe-NTA) y microesferas de TiO2. Como se puede ver en la figura 2, nuestras perlas magnéticas PureCube Fe-NTA se presentaron como la mejor opción para el enriquecimiento de fosfopéptidos. Con nuestras Fe-NTA MagBeads, los fosfopéptidos más exclusivos (Fig. 2 A y C) se enriquecieron con la mayor eficiencia (Figura 2 B).

Figura 2: Comparación del rendimiento del enriquecimiento de fosfopéptidos entre cuatro productos/métodos diferentes. A: Número de fosfopéptidos únicos identificados por los diferentes enriquecimientos (media +/- SD, n = 3). B: eficiencia de enriquecimiento de fosfopéptidos mostrada como la fracción de péptidos fosforilados sobre los péptidos totales (media +/- SD, n = 3). C: Diagrama de Venn de fosfopéptidos identificados por los diferentes métodos de enriquecimiento de fosfopéptidos. Fuente: Leutert et al. (2019)

El mejor producto por el mejor costo

Comparar productos de diferentes fabricantes y proveedores puede resultar tedioso. Diferentes concentraciones y volúmenes de diferentes proveedores pueden ser engañosos en la búsqueda de la mejor relación costo-beneficio. Por lo tanto, en Cube Biotech compilamos los precios de los productos de enriquecimiento de fosfopéptidos más utilizados para brindar una descripción general de la situación real de los premios en el mercado.

Figura 3: Cube Biotech no solo ofrece el mejor producto individual para el enriquecimiento de fosfopéptidos, sino también el más rentable. Los competidores T y G tienen aproximadamente la mitad del volumen de perlas que obtiene por 200 USD en comparación con Cube Biotech. La diferencia extrema entre el competidor R y Cube Biotech es una proporción de 1:24.

Bibliografía

Año	Autor
2019	Searle B.C., Lawrence R.T., MacCoss M.J., Villén J.
2018	Searle B.C., Pino L.K., Egertson J.D., Ting Y.S., Lawrence R.T., Villén J., Macoss M.J.
2019	Leutert M., Rodríguez-Mias R.A., Fukuda N.K., Villén J.
2020	Smith I.R.m Hess K.N., Bakhtina A., Valente A.S., Rodriguez-Mias R.A., Villen J.
2020	Calejman C.M., Trefley S., Entwisle S.W., Luciano A., Jung S.M., Hsiao W., Torres A., Hung C.M., Li H., Snyder N.W., Villén J., Wellen K.E., D.A. Guertin
2020	Fan. Z., Delvin J.R.m Hogg S.J., Doyle M.A., Harrison P.F., Todorovski I., Cluse L.A., Knight D.A., Sandow J.J., Gregory G., Fox A., Beilharz T.H., Kwiatkowski N., Scott N.E., Vidakovic A.T., Kelly G.P., Svejstrup J.Q., Geyer M., Gray N.S., Vervoort S.J., Johnstone R.W.
2020	Vervoort S., Welsh S., Delvin J.R., Barbieri E., Knight D.A., Costacurta M., Todorovski I., Kearney C.J., Sandow J.J., Bjelosevic S., Fan Z., Vissers J.H.A., Pavic K., Martin B.P., Gregary G., Kong I.Y., Hawkins E.D., Hogg S.J., Kelly M.J., Newbold A., Simpson K.J., Kauko O., Harvey K.F., Ohlmeyer M., Westermarck J., Gray N., Gardini A., Johnstone R.W.
2021	Li Y., Imai N., Nicholls H.T., Roberts B.R., Goyal S., Krisko T.I., Ang L-H., Tillman M.C., Roberts A.M., Baqai M., Ortlund E.A., Cohen D.E., Hagen S.J.
2021	Mast N., Petrov A.M., Prendergast E., Bederman I., Pikuleva I.A.
2022	Heil L.R., Fondrie W.E., McGann C. D., Federation A.J., Noble W.S., MaxCoss M.J., Keich U.
2023	Moore J., Ewoldt J., Venturini G., Peraeira A.C., Padilha K., Lawton M., Lin W., Goel R., Luptak I., Perissi V., Seidman C.E., Seidman J., Chin M.T., Chen C., Emili A.
2023	Leutert M., Armstrong J., Ollodart A.R., Hess K., Muir M., Rodriguez-Mias R.A., Kaeberlein M., Dunham M., Villén J.

FAQ

• ¿Qué puedo hacer con las perlas de Fe-NTA?

R: Las perlas de Fe-NTA tienen dos propósitos. En primer lugar, se pueden utilizar como matriz para unir y enriquecer así los fosfopéptidos. En segundo lugar, se pueden usar de manera similar a, por ejemplo, Ni-NTA para purificar proteínas marcadas con His a través de IMAC.

• ¿Cómo funciona el proceso de enriquecimiento de fosfopéptidos?

R: Utilice este protocolo como referencia. Está escrito para nuestros PureCube Fe-NTA MagBeads, por lo que debe realizar algunos ajustes.

• ¿Puedo enriquecer todos los fosfopéptidos usando Fe-NTA?

R: No, esto no es posible. No todos los fosfopéptidos se unen a las perlas de Fe-NTA. Como se muestra en la figura 2, se deben usar múltiples tipos de perlas para cubrir todos los fosfopéptidos de una célula. Por eso, también ofrecemos perlas de Ti-Zr- y Al-NTA.